ABO 血型試驗 (正反定型 )

1、ABO血型試驗（正反定型）一 原理利用紅細胞凝集試驗，通過正反定型準確鑒定 ABO血型二試劑和材料1 .抗-A （B型血），抗-B （A型血）及抗-A+B （O型血）分型血清2 . 5%A、B及。型試劑紅細胞鹽水懸液。3 .受檢者血清o4 .受檢者5%紅細胞鹽水懸液。三操作（玻片法）1 .取清潔玻片一張，用蠟筆劃成方格，標明抗-A、抗-B和抗-A+B,分別用滴 管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清1滴于方格內(nèi)，再加受檢者2%紅細 胞懸液1滴，混合。2 .另取清潔玻片一張，用蠟筆劃成方格，標明 A細胞、B細胞和O細胞，用 滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管加A、B和。型試劑紅細胞懸液 1滴

2、。3 .將玻片輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細胞充分混勻，連續(xù)約 15min,以肉眼觀察有 無凝集反應。也可用低倍鏡觀察結果。四 結果判定：見表1表1 ABO血型正反定型結果分型血清+受檢者紅細胞受檢者受檢者血清+試劑紅細胞抗-A抗-B抗A+B血型A細胞B細胞O細胞+一+A一+一一+B+一一一一O+一+AB一一一注：+ =凝集；-=不凝集五注意事項1 .試管、滴管和玻片必需清潔干燥，防止溶血。2 .操作中應先加血清后加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清3 .為防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般在室溫內(nèi)進行試驗4標準抗血清必須符合標準，不要長期放在室溫，以免污染和孳長細菌，等滲生理鹽水必須等滲、新鮮、無微生物孳生

3、。5觀察結果要仔細，微弱凝集、或肉眼觀察未凝集的標本，要用顯微鏡觀察。注意特異性凝集與繼發(fā)性血液凝固、串錢狀形成和異物的區(qū)別。六 血型鑒定中常見的假陽性反應1紅細胞串錢形成：紅細胞相互重疊，連接成串，象一串重疊的錢幣，稱為串錢形成，又稱假凝集?？梢娪谘獫{蛋白紊亂、血沉加快的各種病例或?qū)嶒炛袦囟冗^高，作用時間過長，致水分蒸發(fā)，血清濃縮?？稍谟^察結果前，再加等滲鹽水 1 滴，徹底混勻，串錢狀紅細胞因血液稀釋而散開。也可用高倍鏡仔細觀察凝集塊的形態(tài)和用洗滌后和紅細胞配制懸液。2寒冷凝集： 在較低溫度出現(xiàn)的凝集稱為寒冷凝集。多數(shù)正常人的血清在02oC時能凝集本人的紅細胞，又稱自家凝集。這種凝集是可逆的

4、，在0-2 oC 時作用最強，20oC 時可消失。但在支原體肺炎、自免溶貧、肝硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等患者血清中，可以出現(xiàn)高效價的病理性自身冷凝集抗體，能與本人及其它各型人的紅細胞發(fā)生凝集。其最適反應溫度是低溫，一般在 25-30OC凝 集作用即減弱?？朔椒ǎ罕粰z紅細胞在配制懸液前，先用37oC等滲生理鹽 水洗滌，必要時試驗操作可在 37oC條件下進行，或在37oC水浴中反復觀察 幾次，報告時要注明有寒冷凝集現(xiàn)象。七 血型鑒定中常見的假陰性反應1. 標準血清效價太低親和力不強 : 抗血清保存方法不當或貯藏時間過長而致 效價減弱是最常見原因。2. 被檢紅細胞敏感度過低: 如新生兒紅細胞抗原形成不

5、足 , 老年人紅細胞敏感性下降 , 或紅細胞標本貯藏時間過久（ 紅細胞敏感性在血塊中下降相對較快），易將A亞型錯定為。型。3. 紅細胞懸液過濃或過淡: 抗原抗體比例適當時反應最明顯。如紅細胞懸液液過濃時 , 標準血清中的抗體全部被吸收 , 呈后帶現(xiàn)象, 以致凝集不明顯或不凝集。 紅細胞濃度太淡, 抗體濃度相對增高 , 呈前帶現(xiàn)象而不易凝集, 或凝集很弱 , 未被發(fā)現(xiàn)。 克服方法 : 按規(guī)定配制紅細胞懸液, 懸液太濃時可多加1 滴血清 , 轉(zhuǎn)動玻片 , 增加紅細胞接觸的機會 . 微弱凝集必須用顯微鏡觀察。4. 溶血反應 : 紅細胞抗原與相對應的免疫抗體相遇, 在補體存在時就可發(fā)生溶血。 溶血反應

6、與凝集反應在血型鑒定上意義相同 , 都是抗原抗體反應。 克服方法 : 玻片法看結果時, 片底最好襯以白紙, 溶血時液滴邊緣呈透明紅色試驗前后兩次鏡下觀察, 可發(fā)現(xiàn)紅細胞減少或消失。作血型發(fā)現(xiàn)溶血, 要換好的等滲鹽水和洗滌后紅細胞重新配制懸液來作血型鑒定。5. 溶解性抗原或血型物質(zhì)的中和作用 : 未經(jīng)洗滌的紅細胞懸液中，帶有血漿中的血型物質(zhì)。特別是輕度溶血，部分紅細胞溶解，釋放出大量可溶性抗原，可將血清中對應的抗體中和，以致抗體不足，使紅細胞不能凝集?？酥品椒ǎ翰皇褂萌苎獦吮?，用洗滌后的紅細胞配制懸液。6. 試驗時間過短：血型抗原抗體反應需要一定時間，時間不夠，較弱的凝集就不能出現(xiàn)。因此，玻片法

7、不能少于15 分鐘。7. 反應溫度不當：完全抗體作用的最適溫度多在 20oC左右至4oC,因此ABO 血型鑒定應在室溫進行。8. 輕度凝集誤認為不凝集。9. 不完全抗體遮斷引起的假陰性：新生兒溶血病時，病兒紅細胞的血型抗原被母體內(nèi)的不完全抗體致敏，從而遮斷其與相同特異的完全抗體的反應，以致定型時出現(xiàn)假陰性。RH 血型試驗一 原理利用紅細胞凝集試驗，采用單克隆IgM/IgG 抗 D 抗體，使用玻片法或試管法檢測紅細胞表面的RH (D)抗原。二 試劑1 RH 抗血清(抗D 血清)2 35%紅細胞懸液三 操作1 玻片法 ： 在清潔玻片上滴加一滴抗D 血清， 加待檢全血一滴， 輕輕轉(zhuǎn)動玻片，使抗血清與紅細胞充分混勻，連續(xù)5 分鐘，用肉眼觀察有無凝集反應。凝集者為RH (D)陽性；不凝集為RH (D)陰性。2 試管法 ：取清潔干燥試管一支，加抗D 血清一滴，再加入35%紅細胞懸液一滴，輕輕混勻后靜置1 分鐘，置離心機中，以3000 轉(zhuǎn)/分離心1 分鐘。用肉眼觀察有無凝集反應。凝集者為 RH (D)陽性；不凝集為RH (D)陰性。注意事項1待檢標本應為非抗凝血，紅細胞濃度以 35%RBC 等滲鹽水懸