DNA限制性內(nèi)切酶——酶切Buffer組分及其活性

1、DNA限制性內(nèi)切酶一一酶切Buffer組分及其活性TaKaRa 公司，為了方便限制酶的統(tǒng)一使用，采用了通用緩沖液(UniversalBuffer)測(cè)JE限制酶活性的體系(5 種通用緩沖液中，用標(biāo)注的)，以此時(shí)的活性值作為 100%。并把在其它通用緩沖液中的相對(duì)活性表示如下表。有()標(biāo)記的是易受 Star 活性影響的緩沖液，為了避免 Star 活性的影響，希望盡量使用或口標(biāo)注的緩沖液。每種限制酶都有其自身的基本緩沖液(BasalBuffer),其中 AccW、BalI、BcnI、BglI、Bpu1102I、Cfr10I、Eam1105I、Eco52I、NruI、PshBI、SnaBI、SspI、

2、TaqI、VpaK11BI(共 14 種)由于沒有十分合適的通用緩沖液，只能使用基本緩沖液(BasalBuffer)。各種限制酶的基本緩沖液組成不同，相互之間不能通用。各種限制酶在基本緩沖液中的相對(duì)活性也被列于下表，供參考。限制酶在各種緩沖液中的相對(duì)活性隔制第AatMAccwWJll202020111120Alai10011002040200120gl3Hl202020*STrjoIWl用“1HIB。 ：202015C畫Apat10020202042012。：ApoLI1002020502C120網(wǎng)”2020202040IOCBamH(蛭0)20Bar?II(120)(120)100liaoI

3、(20)(100)208。!BcmMIsoeoeo100J40|BenI20Byii20Bg!IISOBtn劃BmcT11019Tl如120B0U1W21BapT1D41100I60BapT107l也。201100201004060red1001204。20逾10011(IOC)60)jooi4Q10020120：2Q1002CICO4020240j(2040l-BQ)QQ2031100|國(guó)iso100|20100；(20420,翎Joo;附帶活性測(cè)定用 Buffer推薦使用的 BufferAccltAc&H相對(duì)活性。a100201008spi4071BMHllBstPlBstXlBs

4、f1107l20wo國(guó)20201001001006020HC100(20)(60100(100)(100)1002040(20)(60To202012010010010040CMOIClalCpo1DdeIDpn1(20)；20(20)40(20)wo4010012080100160100202010020100406060wo8080GO60童140100,3100Dra1Eao1Ea/n1105I8065l80109Ipoo酉CO60|1OO8C80WO2020120160(20)(402040(40)4040I00(20(60)601001002020nooj160coR15coRV5c

5、oT141ECOV221“0521(20)(100)(20)(40)(20)(40)2020100(120)(80)Too120)(40)WO(60)100*100(140,(20)1202020202020100co611FbalFokIHaeilHaelll201002020100：160(20)( 20(80)100(20)100100(20)60(60) 2020(200)ico20J4O100WO10060rroo；100限制融HapUHha1HinellHindIIIHintI相對(duì)活性()LMHKT+BSABosa11006020201OT80-80100HOO.2C2040120

6、10020(60)畫I0010080*10020200(100)L801。10016060100Hml1HpaiKpn1MbolMboW4080*120206016020(4020|ioo(eo)100100L12020(100)8020406010040100Rffl國(guó)2020Z60100MfllMiuIMspIMunINac11008。20208010060.60100(100)60100808。2010010080200)100 “2020160100100202020100120NeoINdelNhelNotINru1(40)(60)2060(60)160204010010080100

7、(120)1002020(160)100l20)202020(20)100020202020100NsblPmaClPshAlPshB1PsO100100100F8020201Q010020402010060160(20)(40)20404010020L)2020100rioolPstiPvulPvuItflspRSIISad(20)(60)FH3)no(20)(201E080 %（4。）p20iSOlao1004020GOco100Itool100100100100602020BOsoSacU6HESudA1S3rSfii402020204020(60)間1。)20

8、&oQ0：1100： (H：wc20ifiO)42。(80)920)1203ffl*fid1002020UIOOJ100|Sma1SmilSna81SpeISpft20202020也回1020WO4010ICO(20)隔。）202040)100flO|100so：1OO120(80)bco；(2Q)M0)IOC(20)LicoJSspStuIT&qrrnmiC 細(xì)EH*13020(60)(60)40(100)(BO)1g.60.100l.60eo60140|boo.4030國(guó)ao|10Q|BO：40100(90)i120Van9l1VpKUBXhoXsp120(2D)60100

9、(SO)10O，之。206C.(40)2010020eoi*H2020120112020I60too160GOloo206020jog160100*1_+0.01%BS2100%:AflII,Aor13HI,EcoO65I,FokI,Hin1I,MunI,NcoI,PvuI,Sse8387I,XbaI*2+0.01%BSA+0.01%TritonX-100100%:NotI*3不加 BSALMHKT+BSAAfaJAcc1BanIIAfaAatHAlu1ACC11Bgl冉 on3Hi*|AccIor51HIAfat日 mgT1201BamH1Acc(ApaI時(shí)”產(chǎn)SSpTIW18anAfaI即

10、乩 IAim0HIIflcT13。1#011BspTlO4I4or5lH1BstPtBen1AlulJ0spT1O4BstX1B/n1用 313HIBSSHEIffSp1407ISst1107IBmeTMOI4XS1HI8mHIIClaifispT1071出 paLI85Hl071CpolBSM107JBenIEcoO1091而DpnlGalBpu1021HfleilDraDraCpOlBspT104JHaeinfaeiEcpO65!*DpnI日印 1286!HapwEcoOiOStEc 閑 1Dr&1日印 14 口 7】LFcoRFCDT14IRsHIIFakI*FCOT141Fbx

11、l心加 THaellEcoT221HaellDpnJMhollMae111HaemHae111DmHaplHhaHhalEaeiH 向印 miHinam氏 00109IMspiHineMboHinti氏 061!Nae1HftvA!IEMtu1Hpa1HaeIEPmaCHint!AJdeiMbo1litSac11*NotI*JMSPIHapHStuikpnIPSHNCQ*HhaMboiMfllMiuIMspIMtin1*SallSaii3AISea1SmiSpeINdelNsbIPshAIPstyPvu1*HMcIIHintIHtmIMboIIMfllNhelPmaCJF 印 1405t產(chǎn) s

12、llSacISphlswTaqJVan911VpjKUBlSpe1SphI5miTaqITfM11IMiuIMspIMun1Nd1SdgA1SfiSpeISse&2&71Stu1XhoIVaflfll1X/TO1XspEMs01PmnC1PMIP 印 1406ISac1TaqImtniXba1*,XhoXsp1SaeTFSfiSm1SWlTaqXbsiXsp1Xhol,+0.01%BSA*+0.01%BSA+0.01%Triton1. 10XL1QQmM1QQmM10mMTriS-HCI(pH7.5)MgCI?Dithioihreiiol210XM100rnMIOOmMtOmM

13、500TrisHCI(pH7.5)MgCLOHhiQlhreitoiNaCl3. WXH500mM100mM10mMtOOQmMTfi$-HCl(pH7.5)MgCl?DithiQihreitQlNaCI410 xK200mM1QQmM10mW1.000mMTns-HCl(pH6+5)MQCI;DithiothreiiolKCI5.10 xT(BSA-free)330mM100mM5mM660mMTrisacelale(pH7,9)Mg-acetateDithiolhreitofK地?zé)o帶楂6 0.1%BSA1ml7.01%TritOrtX-1001ml使用注意事項(xiàng)10XBuffer 都為 10 倍濃度的緩沖液。止匕外，10XT 溶液中不含 BSA,在使用時(shí)將 BSA 添加進(jìn)去，使最終濃度為 0.01%,有些限制酶(帶有*1或*2標(biāo)記)的反應(yīng)體系中需加 BSA 或 TritonX-100,添附的溶液是 10 倍濃度(0.1%)的液體，使用時(shí)，請(qǐng)?jiān)诜磻?yīng)體系中