色譜分析檢測(cè)技術(shù)

1、LOGO 浙江泰鴿安全科技有限公司浙江泰鴿安全科技有限公司Company Logo目錄目錄液相色譜法（液相色譜法（HPLC）五職業(yè)衛(wèi)生毒物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及其檢測(cè)方法職業(yè)衛(wèi)生毒物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及其檢測(cè)方法一實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法二色譜法概述色譜法概述三三氣相色譜法（氣相色譜法（GC）四Company Logo1.1毒物檢測(cè)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)毒物檢測(cè)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)v 在進(jìn)行職業(yè)衛(wèi)生危害因素檢測(cè)時(shí)，必須按照在進(jìn)行職業(yè)衛(wèi)生危害因素檢測(cè)時(shí)，必須按照國(guó)家頒布的相關(guān)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品采集、實(shí)驗(yàn)室國(guó)家頒布的相關(guān)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣品采集、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等，沒有標(biāo)準(zhǔn)方法可采用國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)外均檢測(cè)等，沒有標(biāo)準(zhǔn)方法可采用國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)

2、外均無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可采樣國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的方法。無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可采樣國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的方法。vGBZ 2.1、 GBZ 159、GBZ 160、WS/T-1996vGB/T170611997 作業(yè)場(chǎng)所空氣采樣儀器的作業(yè)場(chǎng)所空氣采樣儀器的技術(shù)規(guī)范技術(shù)規(guī)范vGB/T8170 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值修中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值修約規(guī)則約規(guī)則v工作場(chǎng)所空氣中有毒物質(zhì)監(jiān)測(cè)研究規(guī)范工作場(chǎng)所空氣中有毒物質(zhì)監(jiān)測(cè)研究規(guī)范Company Logo1.2職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)方法的基本要求職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)方法的基本要求1. 應(yīng)該采用科學(xué)、先進(jìn)、可靠、可行的檢驗(yàn)方法。應(yīng)該采用科學(xué)、先進(jìn)、可靠、可行的檢驗(yàn)方法。2. 檢測(cè)方法必須包括采樣方法、樣品預(yù)處理和測(cè)

3、定方法。檢測(cè)方法必須包括采樣方法、樣品預(yù)處理和測(cè)定方法。3. 應(yīng)滿足工作場(chǎng)所有害因素職業(yè)接觸限值中有害物質(zhì)容許濃度對(duì)檢測(cè)應(yīng)滿足工作場(chǎng)所有害因素職業(yè)接觸限值中有害物質(zhì)容許濃度對(duì)檢測(cè)的要求。的要求。4. 方法具有一定的特異性，空氣中常見共存物不干擾測(cè)定或能被消除。方法具有一定的特異性，空氣中常見共存物不干擾測(cè)定或能被消除。5. 采樣方法應(yīng)符合采樣方法應(yīng)符合GBZ 159的要求，能采集空氣中相應(yīng)存在狀態(tài)的待測(cè)的要求，能采集空氣中相應(yīng)存在狀態(tài)的待測(cè)物。物。6. 方法性能指標(biāo)應(yīng)符合方法性能指標(biāo)應(yīng)符合職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定規(guī)范職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定規(guī)范的要求。的要求。7. 空氣中毒物濃度以空氣中毒物濃度以mg/m3表

4、示，即在溫度表示，即在溫度20、大氣壓、大氣壓101.3 kPa 狀態(tài)狀態(tài)下下 ，1立方米空氣中含待測(cè)物的毫克數(shù)。立方米空氣中含待測(cè)物的毫克數(shù)。Company Logo1.3職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)vGBZ/T 160-2004 GBZ/T160.1-160.81共檢測(cè)共檢測(cè)81類化合物，其中無(wú)機(jī)類化合物，其中無(wú)機(jī)化合物類化合物類45種，種，42個(gè)檢測(cè)方法；非金屬類化合物個(gè)檢測(cè)方法；非金屬類化合物11種，種，37個(gè)檢測(cè)方法；有機(jī)化合物類個(gè)檢測(cè)方法；有機(jī)化合物類44種，種，115個(gè)檢測(cè)方法。個(gè)檢測(cè)方法。 檢測(cè)方法檢測(cè)方法項(xiàng)目數(shù)（個(gè)）項(xiàng)目數(shù)（個(gè)）比例（比例（%）GC 20663 HPLC 155

5、AAS 299 SP 5617其它其它Company Logo1.3職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)vGBZ/T 160-2007 新增新增26種化合物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，種化合物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法，增加增加4個(gè)編號(hào)、個(gè)編號(hào)、修訂修訂12個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法。個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法。 Company Logo標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)內(nèi)容描述內(nèi)容描述備注備注GBZ/T160.38-2007 （烷烴類）（烷烴類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷-溶劑解吸溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.39-

6、2007 （烯烴類）（烯烴類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加二聚環(huán)戊二烯溶劑解吸二聚環(huán)戊二烯溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.42-2007（芳香烴類）（芳香烴類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加對(duì)對(duì)-特丁基甲苯、二乙烯基苯溶劑解吸特丁基甲苯、二乙烯基苯溶劑解吸GC增加增加Company Logo標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)內(nèi)容描述內(nèi)容描述備注備注GBZ/T160.45-2007 （鹵代烷烴（鹵代烷烴類）類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解

7、吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加1,2-二氯丙烷、二氯二氟甲烷二氯丙烷、二氯二氟甲烷-溶劑解吸溶劑解吸GC 增加增加GBZ/T160.48-2007 （醇類）（醇類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加1-甲氧基甲氧基-2-丙醇溶劑解吸丙醇溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.51-2007（酚類）（酚類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加五氯酚及鈉鹽五氯酚及鈉鹽-HPLC增加增加GBZ/T160.52-2007（脂肪族醚類）（脂肪族醚類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、

8、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加正丁基縮水甘油醚正丁基縮水甘油醚-溶劑解吸溶劑解吸GC增加增加Company Logo標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)內(nèi)容描述內(nèi)容描述備注備注GBZ/T160.54-2007 （脂肪族醛類）（脂肪族醛類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加三氯乙醛三氯乙醛-溶劑解吸溶劑解吸HPLC增加增加GBZ/T160.55-2007 （脂肪族酮類）（脂肪族酮類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明

9、高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加異佛爾酮、二異丁基甲酮、二乙基甲酮、異佛爾酮、二異丁基甲酮、二乙基甲酮、2-己酮己酮-溶劑解吸溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.63-2007（飽和脂肪族酯類）（飽和脂肪族酯類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂解吸測(cè)定方法說(shuō)明解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加乙酸異丁酯、乙酸異戊酯乙酸異丁酯、乙酸異戊酯-溶劑解吸溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.68-2007（氰類）（氰類）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明高濃度樣品采集、解吸測(cè)定方法說(shuō)明增加增加甲基丙稀氰甲基丙稀氰-溶

10、劑解吸溶劑解吸GC增加增加Company Logo標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)內(nèi)容描述內(nèi)容描述備注備注GBZ/T160.78-2007（擬除蟲聚酯類農(nóng)藥）（擬除蟲聚酯類農(nóng)藥）有機(jī)氮農(nóng)藥改為擬除蟲聚酯類農(nóng)藥有機(jī)氮農(nóng)藥改為擬除蟲聚酯類農(nóng)藥修訂修訂樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）樣品空白（對(duì)照試驗(yàn)、位置）修訂修訂氰戊菊酯氰戊菊酯-HPLC增加增加GBZ/T160.82-2007 （醇醚類）（醇醚類）二丙烯基乙二醇甲基醚二丙烯基乙二醇甲基醚-溶劑解吸溶劑解吸GC增加增加GBZ/T160.83-2007（銦及其化合物）（銦及其化合物）微孔濾膜采樣，硝酸消解，火焰微孔濾膜采樣，硝酸消解，火焰AAS測(cè)定測(cè)定增加增加GBZ/T16

11、0.84-2007（釔及其化合物）（釔及其化合物）微孔濾膜采樣，硝高酸消解，微孔濾膜采樣，硝高酸消解，ICP測(cè)定測(cè)定增加增加GBZ/T160.85-2007（碘及其化合物）（碘及其化合物）活性碳管采樣，碳酸氫鈉溶液解吸，離子色活性碳管采樣，碳酸氫鈉溶液解吸，離子色譜測(cè)定譜測(cè)定增加增加Company Logo二、實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法二、實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)室常用檢測(cè)方法光譜法光譜法 色譜法色譜法 質(zhì)譜法質(zhì)譜法 電化學(xué)法電化學(xué)法 分子光譜分子光譜原子光譜原子光譜氣相色譜氣相色譜液相色譜液相色譜離子色譜離子色譜氣質(zhì)氣質(zhì)液質(zhì)液質(zhì)ICP-MS極譜法極譜法電位溶出電位溶出電位分析法電位分

12、析法電導(dǎo)法電導(dǎo)法Company Logo三、色譜法概述三、色譜法概述v色譜法最早是由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究植物葉子的組成時(shí)所用的一種方法。他用碳酸鈣作吸附劑，分離植物干燥葉子的石油醚萃取物。v他把干燥的碳酸鈣粉末裝到一根長(zhǎng)的玻璃管中，然后把植物葉子的石油醚萃取液倒到管中的碳酸鈣上，萃取液的色素就吸附在管內(nèi)上部的碳酸鈣里，再用純凈的石油醚洗脫被吸附的色素，于是在管內(nèi)的碳酸鈣上就形成了三種顏色的6個(gè)色帶。Company Logo3.1色譜法起源色譜法起源v當(dāng)時(shí)，茨維特把這種色帶叫做色譜，色譜法因之得名。 (Chromatography)v在這一方法中，把玻璃管叫做“色譜

13、柱”，碳酸鈣叫做“固定相”，純凈的石油醚叫做“流動(dòng)相”。這就是最早的液固色譜法。v后來(lái)在此基礎(chǔ)上又發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。 Company Logo 俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）在）在1906 年研究用碳酸鈣分離植年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。因之得名。石油醚石油醚碳酸鈣顆粒碳酸鈣顆粒色素色素玻璃柱玻璃柱Company Logo3.2分離原理分離原理v色譜法的分離原理是：色譜法的分離原理是：v溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分，經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定

14、相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，那么在固定相中滯留的時(shí)間就不同，故從固定相中流出的先后也就不同。v這種方法被稱為色層法、層析法。 Company Logo3.3色譜分離過(guò)程色譜分離過(guò)程v色譜分離過(guò)程色譜分離過(guò)程Temporal course流流動(dòng)動(dòng)相相Company LCompany Logo四、氣相色譜四、氣相色譜 氣相色譜儀是一個(gè)載氣連續(xù)運(yùn)行、氣密的氣體流路系統(tǒng)。氣路系統(tǒng)的氣密性、載氣流速的穩(wěn)定性及測(cè)量的準(zhǔn)確性，都影響色譜儀的穩(wěn)定性和分析結(jié)果。 高壓鋼瓶中的載氣（氣源）經(jīng)減壓閥減低至0.1-0.5MPa，通過(guò)裝有吸附劑（分

15、子篩）的凈化氣除去載氣中的水分和雜質(zhì)，到達(dá)穩(wěn)壓閥，維持氣體壓力穩(wěn)定。樣品在氣化室變成氣體后被載氣帶至色譜柱，各組分在柱中達(dá)到分離后依次進(jìn)入檢測(cè)器。 Company Logo4.1組成Company Logo組成Company Logo4.2氣相色譜法的分析原理 氣相色譜法主要是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性及吸附性質(zhì)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離。1分離原理分離原理 氣相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的氣相和固定相間氣相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的氣相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)汽化后的試樣被載氣帶人色譜柱中運(yùn)行時(shí)，組分的分配系數(shù)不同，當(dāng)汽化后的試樣被載氣帶人色譜柱中運(yùn)行時(shí)，組分就在其中的兩相

16、間進(jìn)行反復(fù)多次的分配（吸附一脫附一放出）。由于就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次的分配（吸附一脫附一放出）。由于固定相對(duì)各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各組分固定相對(duì)各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各組分在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，順在色譜柱中的運(yùn)行速度就不同，經(jīng)過(guò)一定的柱長(zhǎng)后，便彼此分離，順序離開色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器，產(chǎn)生的離子流信號(hào)經(jīng)放大后，在記錄器上序離開色譜柱進(jìn)入檢測(cè)器，產(chǎn)生的離子流信號(hào)經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。描繪出各組分的色譜峰。 2檢測(cè)原理檢測(cè)原理 當(dāng)組分流出色譜柱后，立即進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器將檢測(cè)到的樣品當(dāng)組分流出色

17、譜柱后，立即進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器將檢測(cè)到的樣品組分轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，而電信號(hào)的大小與被測(cè)組分的量或濃度成正比。組分轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，而電信號(hào)的大小與被測(cè)組分的量或濃度成正比。這些信號(hào)放大并記錄下來(lái)，就是氣相色譜圖。這些信號(hào)放大并記錄下來(lái)，就是氣相色譜圖。Company Logo 3分離分析條件的選擇分離分析條件的選擇 氣相色譜分析的關(guān)鍵是氣相色譜分析的關(guān)鍵是物質(zhì)的分離物質(zhì)的分離問(wèn)題。兩物質(zhì)怎樣才算達(dá)到完問(wèn)題。兩物質(zhì)怎樣才算達(dá)到完全分離呢？第一是兩物質(zhì)的色譜峰的距離足夠遠(yuǎn)；第二是色譜峰必須全分離呢？第一是兩物質(zhì)的色譜峰的距離足夠遠(yuǎn)；第二是色譜峰必須很窄。因?yàn)閮H僅兩峰間有一定的距離，而每一峰都很寬而導(dǎo)致彼此

18、交很窄。因?yàn)閮H僅兩峰間有一定的距離，而每一峰都很寬而導(dǎo)致彼此交疊，則還是分不開。所以只有同時(shí)滿足這兩個(gè)條件，才能完全達(dá)到分疊，則還是分不開。所以只有同時(shí)滿足這兩個(gè)條件，才能完全達(dá)到分離的目的。離的目的。3.1載氣及其流速的選擇載氣及其流速的選擇 載氣的流速不僅對(duì)色譜柱分離效率有重大影響，并且還決定分析載氣的流速不僅對(duì)色譜柱分離效率有重大影響，并且還決定分析所需要的時(shí)間。流速快，分析時(shí)間短；流速慢，分析時(shí)間增長(zhǎng)。檢測(cè)所需要的時(shí)間。流速快，分析時(shí)間短；流速慢，分析時(shí)間增長(zhǎng)。檢測(cè)時(shí)，一般都有一個(gè)最佳流速，可以使柱子的分離效果最好。在實(shí)際工時(shí)，一般都有一個(gè)最佳流速，可以使柱子的分離效果最好。在實(shí)際工作

19、中為了加快分析速度，選擇的流速往往稍高于最佳流速，但不影響作中為了加快分析速度，選擇的流速往往稍高于最佳流速，但不影響分離。分離。 Company Logo3.2 柱溫的選擇柱溫的選擇 柱溫的選擇原則應(yīng)是：柱溫的選擇原則應(yīng)是：在對(duì)最難分離的物質(zhì)對(duì)保持較好分離度的前提下，在對(duì)最難分離的物質(zhì)對(duì)保持較好分離度的前提下，盡可能采用較高柱溫盡可能采用較高柱溫，但以保留時(shí)間適宜、峰形不拖尾為度。在實(shí)際工作中，但以保留時(shí)間適宜、峰形不拖尾為度。在實(shí)際工作中，柱溫的選擇還須從試樣沸點(diǎn)和固定液配比綜合考慮。柱溫一般選擇在接近或柱溫的選擇還須從試樣沸點(diǎn)和固定液配比綜合考慮。柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)

20、的溫度。對(duì)于略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)的溫度。對(duì)于組分復(fù)雜、沸程寬組分復(fù)雜、沸程寬的試樣，采用的試樣，采用程序升程序升溫溫的方法，使低沸點(diǎn)和高沸點(diǎn)樣品都能達(dá)到良好的分離。的方法，使低沸點(diǎn)和高沸點(diǎn)樣品都能達(dá)到良好的分離。3.3 進(jìn)樣條件的選擇進(jìn)樣條件的選擇 進(jìn)樣時(shí)間：進(jìn)樣時(shí)間： 進(jìn)樣速度必須快，一般用注射器或進(jìn)樣閥進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣時(shí)間都在進(jìn)樣速度必須快，一般用注射器或進(jìn)樣閥進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣時(shí)間都在IsIs以內(nèi)。以內(nèi)。若進(jìn)樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，試樣原始寬度變大，致使峰變形。若進(jìn)樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，試樣原始寬度變大，致使峰變形。 Company Logo進(jìn)樣量進(jìn)樣量： 進(jìn)樣量太大，會(huì)使幾個(gè)峰疊在一起，分離效果不好；進(jìn)樣量太少，進(jìn)樣

21、量太大，會(huì)使幾個(gè)峰疊在一起，分離效果不好；進(jìn)樣量太少，會(huì)影響檢出和增大誤差?？偟膩?lái)說(shuō)，在實(shí)際分析過(guò)程中進(jìn)樣量一般是會(huì)影響檢出和增大誤差?？偟膩?lái)說(shuō)，在實(shí)際分析過(guò)程中進(jìn)樣量一般是比較少的，液體試樣進(jìn)樣量一般為比較少的，液體試樣進(jìn)樣量一般為1uL1uL，氣體試樣為，氣體試樣為lmLlmL。 汽化溫度汽化溫度： 進(jìn)樣后要有足夠的汽化溫度，使樣品瞬間汽化被載氣帶入柱中，進(jìn)樣后要有足夠的汽化溫度，使樣品瞬間汽化被載氣帶入柱中，在保證試樣不分解的情況下，適當(dāng)?shù)奶岣咂瘻囟葘?duì)分離和定量有利，在保證試樣不分解的情況下，適當(dāng)?shù)奶岣咂瘻囟葘?duì)分離和定量有利，尤其當(dāng)進(jìn)樣量大時(shí)更是如此。一般選擇的汽化溫度比柱溫高尤其當(dāng)

22、進(jìn)樣量大時(shí)更是如此。一般選擇的汽化溫度比柱溫高30307070。 3.4 柱長(zhǎng)柱長(zhǎng)L L的選擇的選擇 加大柱長(zhǎng)對(duì)分離有利，但將使各組分的保留時(shí)間增加，分析時(shí)間加大柱長(zhǎng)對(duì)分離有利，但將使各組分的保留時(shí)間增加，分析時(shí)間延長(zhǎng)。但柱過(guò)長(zhǎng)，分析時(shí)間增加且峰寬也會(huì)增加，導(dǎo)致總分離效能下延長(zhǎng)。但柱過(guò)長(zhǎng)，分析時(shí)間增加且峰寬也會(huì)增加，導(dǎo)致總分離效能下降，因此柱長(zhǎng)降，因此柱長(zhǎng)L L要選擇剛好使各組分得到有效分離為宜。要選擇剛好使各組分得到有效分離為宜。3.5 擔(dān)體粒度和篩分范圍選擇擔(dān)體粒度和篩分范圍選擇 3.6 固定液配比的選擇固定液配比的選擇 Company Logo4.3色譜定性與定量分析（1）定性分析）定性

23、分析 色譜定性分析就是要確定各色譜峰所代表的化合物。色譜定性分析就是要確定各色譜峰所代表的化合物。當(dāng)前色譜定性分析常用的方法有以下幾種。當(dāng)前色譜定性分析常用的方法有以下幾種。1. 保留時(shí)間定性保留時(shí)間定性2. 利用不同檢測(cè)方法定性利用不同檢測(cè)方法定性3. 保留指數(shù)定性保留指數(shù)定性4. 柱前或柱后化學(xué)反應(yīng)定性柱前或柱后化學(xué)反應(yīng)定性5. 與其他儀器聯(lián)用定性與其他儀器聯(lián)用定性 Company Logov 1.1. 保留時(shí)間定性保留時(shí)間定性在一定的色譜系統(tǒng)和操作條件下，每種物質(zhì)都有一定的保留時(shí)間，在一定的色譜系統(tǒng)和操作條件下，每種物質(zhì)都有一定的保留時(shí)間，如果在相同色譜條件下，未知物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

24、相同，則可初如果在相同色譜條件下，未知物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相同，則可初步認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。為了提高定性分析的可靠性，還可進(jìn)一步改步認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。為了提高定性分析的可靠性，還可進(jìn)一步改變色譜條件（分離柱、流動(dòng)相、柱溫等）或在樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，變色譜條件（分離柱、流動(dòng)相、柱溫等）或在樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如果被測(cè)物的保留時(shí)間仍然與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一致，則可認(rèn)為它們?yōu)橥晃锶绻粶y(cè)物的保留時(shí)間仍然與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一致，則可認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。質(zhì)。 Company Logov 2. 2. 利用不同檢測(cè)方法定性利用不同檢測(cè)方法定性同一樣品可以采用多種檢測(cè)方法檢測(cè)，如果待測(cè)組分和標(biāo)準(zhǔn)物在同一樣品可以采用多種檢

25、測(cè)方法檢測(cè)，如果待測(cè)組分和標(biāo)準(zhǔn)物在不同的檢測(cè)器上有相同的響應(yīng)行為，則可初步判斷兩者是同一種物質(zhì)。不同的檢測(cè)器上有相同的響應(yīng)行為，則可初步判斷兩者是同一種物質(zhì)。在液相色譜中，還可通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器比較兩個(gè)峰的紫外或可見在液相色譜中，還可通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器比較兩個(gè)峰的紫外或可見光譜圖。光譜圖。 v 3. 3. 保留指數(shù)定性保留指數(shù)定性在氣相色譜中，可以利用文獻(xiàn)中的保留指數(shù)數(shù)據(jù)定性。保留指數(shù)在氣相色譜中，可以利用文獻(xiàn)中的保留指數(shù)數(shù)據(jù)定性。保留指數(shù)隨溫度的變化率還可用來(lái)判斷化合物的類型，因?yàn)椴煌愋突衔锏碾S溫度的變化率還可用來(lái)判斷化合物的類型，因?yàn)椴煌愋突衔锏谋Ａ糁笖?shù)隨溫度的變化率不同。保留

26、指數(shù)隨溫度的變化率不同。 Company Logov 4. 4. 柱前或柱后化學(xué)反應(yīng)定性柱前或柱后化學(xué)反應(yīng)定性在色譜柱后裝在色譜柱后裝T T型分流器，將分離后的組分導(dǎo)入官能團(tuán)試劑反應(yīng)型分流器，將分離后的組分導(dǎo)入官能團(tuán)試劑反應(yīng)管，利用官能團(tuán)的特征反應(yīng)定性。也可在進(jìn)樣前將被分離化合物與某管，利用官能團(tuán)的特征反應(yīng)定性。也可在進(jìn)樣前將被分離化合物與某些特殊反應(yīng)試劑反應(yīng)生成新的衍生物，于是，該化合物在色譜圖上的些特殊反應(yīng)試劑反應(yīng)生成新的衍生物，于是，該化合物在色譜圖上的出峰位置或峰的大小就會(huì)發(fā)生變化甚至不被檢測(cè)。由此得到被測(cè)化合出峰位置或峰的大小就會(huì)發(fā)生變化甚至不被檢測(cè)。由此得到被測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息。物

27、的結(jié)構(gòu)信息。v 5. 5. 與其他儀器聯(lián)用定性與其他儀器聯(lián)用定性將具有定性能力的分析儀器如質(zhì)譜（將具有定性能力的分析儀器如質(zhì)譜（MSMS）、紅外（）、紅外（IRIR）、原子吸）、原子吸收光譜（收光譜（AASAAS）、原子發(fā)射光譜（）、原子發(fā)射光譜（AESAES，ICP-AESICP-AES）等儀器作為色譜儀）等儀器作為色譜儀的檢測(cè)器即可獲得比較準(zhǔn)確的定性信息。的檢測(cè)器即可獲得比較準(zhǔn)確的定性信息。Company Logo（2）定量分析）定量分析 色譜定量分析的依據(jù)是被測(cè)物質(zhì)的量與它在色譜圖上的峰面積色譜定量分析的依據(jù)是被測(cè)物質(zhì)的量與它在色譜圖上的峰面積（或峰高）成正比。數(shù)據(jù)處理軟件（工作站）可以

28、給出包括峰高和峰（或峰高）成正比。數(shù)據(jù)處理軟件（工作站）可以給出包括峰高和峰面積在內(nèi)的多種色譜數(shù)據(jù)。因?yàn)榉甯弑确迕娣e更容易受分析條件波動(dòng)面積在內(nèi)的多種色譜數(shù)據(jù)。因?yàn)榉甯弑确迕娣e更容易受分析條件波動(dòng)的響，且峰高標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍也較峰面積的窄，因此，通常情況的響，且峰高標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍也較峰面積的窄，因此，通常情況是采用峰面積進(jìn)行定量分析。常用的定量分析方法以下幾種：是采用峰面積進(jìn)行定量分析。常用的定量分析方法以下幾種： 1. 1. 校正因子定量校正因子定量2. 2. 歸一化法歸一化法3. 3. 外標(biāo)法外標(biāo)法4. 4. 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法5. 5. 標(biāo)準(zhǔn)加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法 Company Logo五、

29、高效液相色譜五、高效液相色譜Company Logo5.1液相色譜發(fā)展概述v 液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。v 高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。v 它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)

30、。Company Logov 又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。v 一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置。 Company Logo5.2主要類型和原理v 通常所說(shuō)的液相色譜法僅指所用固定相為柱型的柱液相色通常所說(shuō)的液相色譜法僅指所用固定相為柱型的柱液相色譜

31、法。譜法。v 高效液相色譜法按固定相不同分為液固吸附色譜法、液液高效液相色譜法按固定相不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、鍵合相色譜。根據(jù)固定相的分配色譜法（正相與反相）、鍵合相色譜。根據(jù)固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法和薄層色形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法和薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、體積排阻色譜和親和色譜。譜、體積排阻色譜和親和色譜。1 1液固色譜法液固色譜法 使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是

32、根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附解吸附的對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附解吸附的平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度510m510m。適用于。適用于分離分子量分離分子量2001000 2001000 的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。 Company Logo2.2.液液色譜法液液色譜法 使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面，或化學(xué)鍵合使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面，或化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面

33、而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的于擔(dān)體表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)分配平衡過(guò)程。是一個(gè)分配平衡過(guò)程。 涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性；流動(dòng)相必須預(yù)先涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性；流動(dòng)相必須預(yù)先用固定相飽和，以減少固定相從擔(dān)體表面流失；溫度的用固定相飽和，以減少固定相從擔(dān)體表面流失；溫度的變化和不同批號(hào)流動(dòng)相的區(qū)別常引起柱子的變化；另外變化和不同批號(hào)流動(dòng)相的區(qū)別常引起柱子的變化；另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜化。在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜

34、化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如用。現(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18C18、C8C8、氨、氨基柱、氰基柱和苯基柱?；?、氰基柱和苯基柱。 Company Logo 液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法色譜法(NPC)(NPC)和反相色譜法和反相色譜法(RPC)(RPC)。 v 正相色譜法正相色譜法 采用極性固定相采用極性固定相( (如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相) )；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑

35、流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑( (烷烴類如正已烷、環(huán)烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物化合物( (如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。 v 反相色譜法反相色譜法 一般用非極性固定相（如一般用非極性固定相（如C18C18、C8C8）；流動(dòng)相為水或緩）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的

36、有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。極性較弱的化合物。RPC RPC 在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC HPLC 應(yīng)用的應(yīng)用的80%80%左右。左右。Company Logo正相色譜正相色譜 20%反相色譜反相色譜80%正相色譜正相色譜 20%反相色譜反相色譜80%正相正相HPLC 極性極性:固定相固定相 流動(dòng)相流動(dòng)相 固定相固定相 - 極性強(qiáng)極性強(qiáng) 流動(dòng)相流動(dòng)相(己烷己烷, 庚烷庚烷)- 極性極性弱弱 極性小物質(zhì)先出峰極性小物質(zhì)先出峰主流反相反相HPLC 極性極性:固定相固定相 流動(dòng)相流動(dòng)相 固定相固定相 - 極性弱極性弱 流動(dòng)相流動(dòng)相(甲醇甲醇, 乙腈等乙腈等)- 極性強(qiáng)極性強(qiáng) 極性大物質(zhì)先出峰極性大物質(zhì)先出峰Company Logo5.3液相色譜儀