項目四-子項目3：外標法測定有機酸含量

1、任務任務3 3 外標法測定有機酸外標法測定有機酸 液相色譜分析法模塊之p完成有機酸含量的測定p能進行定性定量分析 能力目標p 常用的方法是化學分析法、液相色譜法（內標法和外標法）p食品中常見的有機酸有檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、草酸、琥珀酸、乳酸及醋酸等。這些有機酸有的是食品原料中固有的，如水果蔬菜及其制品中的有機酸；有的是在食品加工中添加進去的，如汽水中的有機酸；有的是在生產加工貯存中產生的，如酸奶、食醋中的有機酸。 課程引入p 本項目采用外標法測定有機酸酸的含量樣品的預處理技術p樣品預處理的目的是消除基質干擾，保護儀器，提高方法的準確度、精密度、選擇性和靈敏度。預處理的過程一般包括：提取 經典

2、的方法有均質提取法、振蕩提取法、索氏提取法等。 凈化 比較傳統(tǒng)的凈化手段有液液萃取和固相萃取等應用的比較廣泛。測定過程演示1p 配制流動相：磷酸二氫鈉緩沖液：取磷酸二氫鈉6.80g，加水 880mL，振搖使溶解，用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH6.300.05把磷酸二氫鈉緩沖液和甲醇以80 20的比例混合，用0.45m有機相濾膜減壓過濾，脫氣。 p 色譜分離條件：色譜柱：C18色譜柱（5m,4.6mm i.d.250mm）波長：254nm流速：1.0mLmin-1。 。測定過程演示2p 標樣及試樣配制有機酸標準品：精密稱取0.01g有機酸對照品，置50mL容量瓶中，加30ml0.5%的氨水溶解，再用純水

3、定容至刻度。有機酸試樣：精確稱量有機酸樣品2g，研磨至均勻加入50ml的容量瓶中，加入30ml0.5%氨水，在熱水浴中振搖20分鐘，冷卻后用純水定容至刻度，搖勻，過濾。p 打開檢測器、高壓泵的電源開關，按上述分離條件設置參數(shù)；打開排放閥，“purge”1-2分鐘，關閉“purge”，使儀器在設定的條件下平衡。p 打開工作站，設置分析方法。p 等基線平衡后，用微量注射器量取定量環(huán)體積的3-5倍的有機酸標樣，在上述分析條件下進樣。p 在相同的條件下，對有機酸樣品進行測定，記錄標樣與樣品的色譜峰面積和保留時間。p記錄下樣品名對應的文件名，同時打印出經優(yōu)化的色譜圖和 分析結果測定過程演示3p有機酸的定

4、性問題：一般可采用標準物質進行保留時間的對照來定性。p在標樣和試樣溶液的配制過程中，稱量需采用減量法。p本項目中葉酸的定量采用外標法。p色譜柱的個體差異很大，即使是同一廠家的同種型號的色譜柱，性能也會有差異。因此，色譜條件（主要是指流動相的配比）應根據所用色譜柱的實際情況作適當?shù)恼{整。p本項目的測定操作時要注意用電安全；同時配制氨水溶液應在通風柜中進行。學生實訓p要求每位學生獨立完成，獨立處理數(shù)據，合理安排時間。外標法定量外標法的特點：操作、計算簡單，是一種常用的定量方法。它無需各組分都被檢出、洗脫。但需要標樣，標樣及未知樣品的測定條件要一致，進樣體積要準確。 分析中的污染p一般檢測的環(huán)境、容

5、器、試劑都是影響測定結果的因素。容器 實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等，在進行分析時，應按照待測樣品的要求來選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測結果的基本保證。試劑 在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純，如果用含量有雜質的試劑，則會出現(xiàn)雜峰而影響測定結果。環(huán)境污染 儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測結果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實驗室應隔離，保持清潔，儀器室內應安裝空調，注意防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小于70%為宜儀器維護p儀器的性能影響到分析的結果，因此，我們要及時維護儀器。貯液

6、器流動相在使用前都應用0.45m的濾膜過濾，以保持貯液器的清潔；要定期清洗貯液器，以防滋長微生物。高壓輸液泵所用流動相或溶劑均過濾和脫氣；開泵時應放空排氣，工作結束后從泵中洗去緩沖液；不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中進樣器進樣前應使樣品混合均勻，無可溶解的污染物，以免堵塞六通閥；液相進樣針應為平頭針；每次工作結束后應沖洗整個系統(tǒng)；以防止緩沖鹽和其它殘留物留在進樣系統(tǒng)中，。色譜柱在進樣閥后加流路過濾器（0.5m燒結不銹鋼片），擋住來源于樣品和進樣閥墊圈的微粒。在流路過濾器和分析柱之間加上“保護柱”，收集阻塞柱進口的來自樣品的降低柱效能的化學“垃圾”。 色譜柱應在要求的pH值范圍和柱溫范圍下使用，應使用不損壞柱的流動相。進樣前應將樣品進行必要的凈化，以免進樣后對色譜柱造成損