實驗五 葉綠體色素的提取、分離及理化性質的鑒定ppt課件

1、 一、實驗目的一、實驗目的 了解也綠色提取分離的原理以及它們的光了解也綠色提取分離的原理以及它們的光學特性和在光合作用中的意義學特性和在光合作用中的意義 二、實驗原理二、實驗原理 葉綠體色素室植物吸收太陽光能進行光合葉綠體色素室植物吸收太陽光能進行光合作用的重要物質，主要由葉綠素作用的重要物質，主要由葉綠素a、葉綠素、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據它們在有、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據它們在有機溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從機溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從葉片中提取出來，并可根據它們在不同有葉片中提取出來，并可根據它們在不同有機溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的機溶劑中的溶解度不同

2、以及在吸附劑上的吸附能力不同將它們彼此分開。吸附能力不同將它們彼此分開。 葉綠素是一種雙羧酸的酯，可與堿發(fā)生皂化作用，產生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素與胡蘿卜素都有光學活性，表現出一定的吸收光譜，可用分光鏡檢查和用分光光度計精確測定。葉綠素在光照下可產生暗紅色的熒光；葉綠素的化學性質很不穩(wěn)定，容易受強光破壞，特別是葉綠素與蛋白分離后光破壞更快；葉綠素中的鎂可被H+取代，稱為褐色的去鎂葉綠素；加入銅鹽后則成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作子午的浸制標本。 三、器材與試劑三、器材與試劑 儀器：帶蓋培養(yǎng)皿、臺天平、研缽、量筒、儀器：帶蓋培養(yǎng)皿、

3、臺天平、研缽、量筒、燒杯、漏斗、軟木塞、新華濾紙、毛細滴燒杯、漏斗、軟木塞、新華濾紙、毛細滴管、剪刀、分液漏斗、移液管、分光計。管、剪刀、分液漏斗、移液管、分光計。 實驗試劑：丙酮、甲酯、醋酸銅、鹽酸、實驗試劑：丙酮、甲酯、醋酸銅、鹽酸、氫氧化鉀、石英砂、碳酸鈣、無水硫酸鈉、氫氧化鉀、石英砂、碳酸鈣、無水硫酸鈉、四氯化碳、乙醚。四氯化碳、乙醚。 資料：菠菜葉片資料：菠菜葉片 一、葉綠體色素的提取與分離 1、稱取新鮮葉片2 g，放入研缽總加入丙酮5 ml，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成勻漿，再加丙酮10 ml，以漏斗過濾，濾液即為色素提取液，放于暗處備用 2、把展層用的驢子中間搞一個圓洞，把新華濾紙

4、剪成20 cm的長條卷成圓柱，一端多次滴上色素提取液，插入圓形濾紙中間孔中，上面與圓形濾紙齊平 3、在培養(yǎng)皿中加入展層用的四氯化碳，把上部做成的濾紙下的含色素圓柱下端浸入展層液，蓋上培養(yǎng)皿上蓋，開始展層。等展層液擴散到培養(yǎng)皿邊緣時，取出濾紙，觀察同心圓色素帶，做好記錄。 二、葉綠體色素的理化性質 1、葉綠體的熒光現象：取上述色素提取液少許于試管中，分別觀察反射光和透射光，比較觀察到的顏色不同并分析原因。 2、光對葉綠素的破壞：取上述色素提取液少許分別加入兩個試管中，一支試管放在暗處，一支試管放在強光下照射，2 h后觀察顏色變化，分析原因。 3、銅代反應：取上述色素提取液加入試管，逐滴加入濃鹽酸，直至溶液呈現褐色，此時葉綠素分子已經遭到破壞，稱為去鎂葉綠素，然后加入醋酸銅結晶少許，慢慢加入溶液，直至出現鮮亮的綠色，此時即形成了銅代葉綠素。 4、黃色素與綠色素的分離：取上述色素丙酮提取液10 ml，加入盛有20 ml乙醚的分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入30 ml蒸餾水，輕輕搖動分液漏斗，靜止片刻，溶液分為兩層。色素已經全部轉入上層乙醚總，棄去丙酮和水，再加入5 ml30%KOH甲醇溶液，用力搖動分液漏斗，靜置10分鐘，再加入蒸餾水10 ml，搖動后靜置分離，得到黃色素層和綠色素層，分別保留，分析實驗結