實驗九過氧化氫酶(cat)活性的測定

1、1實驗九 過氧化氫酶的活性測定過氧化氫酶的活性測定紫外吸收法紫外吸收法v原原 理：理：v H2O2在在240nm波長下有強(qiáng)烈吸收，過氧波長下有強(qiáng)烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度化氫酶能分解過氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時間而降低。根據(jù)測量吸光率隨反應(yīng)時間而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。2材料與設(shè)備 實驗材料實驗材料: 海桐葉海桐葉實驗器材：紫外分光光度計；離心機(jī)；研缽；實驗器材：紫外分光光度計；離心機(jī)；研缽；0.5ml刻度吸管刻度吸管2支，支，2ml刻度吸管刻度吸管1支；支；10ml試管試管3支；恒溫

2、水?。恢?；恒溫水??；試試 劑：劑： O.1mol/LO.1mol/L過氧化氫；過氧化氫；，0.1mo1/L0.1mo1/L磷酸緩沖液磷酸緩沖液,pH7.0pH7.0、 pH7.8 pH7.8 3操作步驟： 1 1稱取植物材料稱取植物材料0.30.3g g，加入，加入，0.1mo1/L0.1mo1/L磷酸緩沖液磷酸緩沖液 (pH7.0) (pH7.0) 6ml(6ml(分三次加入，最后兩次用于分三次加入，最后兩次用于洗研缽洗研缽) )，在研缽中研磨成勻漿，在研缽中研磨成勻漿，以以 6000r6000rmin min 離心離心1515分鐘，傾分鐘，傾出上清液。出上清液。4操作步驟：2.測定：取測定

3、：取10ml試管試管3支，其中支，其中2支為樣品測定支為樣品測定管，管，1支為空白管，按下表順序加入試劑。支為空白管，按下表順序加入試劑。紫外吸收法測定紫外吸收法測定H H2 2O O2 2樣品液配置表樣品液配置表管 號S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8磷酸(ml)1.51.51.5蒸餾水(ml)1.01.01.05操作步驟：3 3測定測定v 25預(yù)熱后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即記時，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下測定吸光度，每隔1min讀數(shù)1次，共測2min，記錄數(shù)據(jù)。64.按下式計算酶活性。FWtV.VAT124010()AA

4、SS122結(jié)果計算：結(jié)果計算： 以以1min1min內(nèi)內(nèi)A A240240減少減少0.10.1的酶量為的酶量為1 1個酶活單位（個酶活單位（u u）。）。 過氧化氫酶活性過氧化氫酶活性(u/gFW/min)=(u/gFW/min)=式中：式中： A240 = AS0- A AS0S0加入煮死酶液的對照管吸光值；加入煮死酶液的對照管吸光值； A AS1S1, A, AS2S2樣品管吸光值；樣品管吸光值； Vt Vt粗酶提取液總體積（粗酶提取液總體積（mlml）；）； V V1 1測定用粗酶液體積（測定用粗酶液體積（mlml）；）； FW FW樣品鮮重（樣品鮮重（g g）；）； 0.1A 0.1A240240每下降每下降0.10.1為為1 1個酶活單位（個酶活單位（u u）； t t加過氧化氫到最后一次讀數(shù)時間（加過氧化氫到最后一次讀數(shù)時間（minmin）。）。7作 業(yè)：1.寫實驗報告寫實驗報告2.問題：問題： （1）影