致瀉大腸埃希式菌的檢驗(yàn)優(yōu)秀課件

1、123 俗稱大腸桿菌1、革蘭氏陰性菌2、桿狀、兩端鈍圓、周生鞭毛、無莢膜3、需氧及兼性厭氧4、能在普通瓊脂上生長(zhǎng)4普通大腸埃希氏菌Escherichia Coli掃描照片5v污染水源和土壤，進(jìn)而污染食物v肉類食品v乳制品v水產(chǎn)品等6 v腸道內(nèi)感染 腹瀉、食物中毒、腸熱癥v腸道外感染 鼠疫（烈性傳染?。?、泌尿道感染、 肺炎、腦膜炎、傷口化膿、敗血癥7檢樣檢樣25g+營(yíng)養(yǎng)肉湯營(yíng)養(yǎng)肉湯225mL乳糖發(fā)酵陽(yáng)性乳糖發(fā)酵陽(yáng)性的發(fā)酵管的發(fā)酵管3616h腸道菌增菌肉湯腸道菌增菌肉湯麥康凱麥康凱EMB36118h24h乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落3個(gè)個(gè)5個(gè)，個(gè)，氧化酶氧化酶，革蘭氏陰性桿菌，革蘭

2、氏陰性桿菌TSI、靛基質(zhì)、靛基質(zhì)、pH7.2尿素尿素KCN、賴氨酸、動(dòng)力、賴氨酸、動(dòng)力TSI底層底層+， H2S，KCN，尿素，尿素血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)非左述的各種非左述的各種反應(yīng)結(jié)果反應(yīng)結(jié)果非大腸埃希氏菌非大腸埃希氏菌報(bào)告報(bào)告8（一）（一）檢驗(yàn)步驟 檢樣樣品處理增菌培養(yǎng)伊紅美藍(lán)（EMB）平板分離培養(yǎng)生化鑒定血清學(xué)鑒定報(bào)告91、增菌培養(yǎng)v以無菌手續(xù)稱取檢樣25 g，加在225mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，以均質(zhì)器打碎1 min或用乳缽加滅菌砂磨碎。v取出適量，接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基，以測(cè)定大腸菌群MPN，其余的移入500mL廣口瓶?jī)?nèi)，于361培養(yǎng)6h。v挑取1 環(huán)，接種于 1管30mL腸道菌增菌肉湯內(nèi)，于 42

3、培養(yǎng) 18h。 102、分離培養(yǎng)v 將乳糖發(fā)酵陽(yáng)性的乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)瓊脂平板；v污染嚴(yán)重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)平板，于361培養(yǎng)1824h，觀察菌落。v不但要注意乳糖發(fā)酵的菌落，同時(shí)也要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。 11EMB培養(yǎng)基黑紫色或紫紅黑紫色或紫紅色，圓形，邊色，圓形，邊緣整齊，表面緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，光滑，濕潤(rùn)，常具有金屬光常具有金屬光澤，也有的呈澤，也有的呈紫黑色，不帶紫黑色，不帶或略帶金屬光或略帶金屬光澤。澤。菌落特征：菌落特征：123、生化檢驗(yàn)v 自鑒別平板上直接挑取數(shù)個(gè)菌落分別接種三糖鐵瓊脂（TSI）或克氏雙

4、糖鐵瓊脂（KI）。同時(shí)將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7.2 尿素瓊脂、KCN 肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在 36培養(yǎng)過夜。vTSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸,底層產(chǎn)酸, H2S陰性,KCN陰性和尿素陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌.vTSI底層不產(chǎn)酸或 H2S、KCN、尿素有任何一項(xiàng)為陽(yáng)性的培養(yǎng)物，均非大腸埃希氏菌。v必要時(shí)做氧化酶實(shí)驗(yàn)或革藍(lán)氏染色鏡檢。 13v三糖鐵瓊脂試驗(yàn)：只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持

5、黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。細(xì)菌分解含硫氨基酸，產(chǎn)生H2S，與FeSO4發(fā)生反應(yīng)形成FeS。 大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生解乳糖，不產(chǎn)生H2S。 14靛基質(zhì)試驗(yàn)：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的色氨酸產(chǎn)靛基質(zhì)試驗(yàn)：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對(duì)二氨基苯甲醛作用，形成生吲哚，吲哚與對(duì)二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成紅色。玫瑰吲哚而成紅色。15v脲酶試驗(yàn)：細(xì)菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨，使培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細(xì)菌有脲酶。v動(dòng)力試驗(yàn)：有動(dòng)力的細(xì)菌會(huì)沿著穿刺線擴(kuò)散生長(zhǎng)。v賴氨酸脫羧

6、試驗(yàn)：細(xì)菌從賴氨酸脫去羧基（-COOH），導(dǎo)致培養(yǎng)基pH變堿，指示劑溴麝香草酚藍(lán)就顯示出藍(lán)色，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，如果細(xì)菌不能脫酸，培養(yǎng)基不變則為黃色。164、血清學(xué)試驗(yàn) v假定試驗(yàn)：挑取經(jīng)生化試驗(yàn)證實(shí)為大腸埃希菌的瓊脂培養(yǎng)物，用致病性大腸埃希氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌和產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌多價(jià)O血清和出血性大腸埃希氏菌O157血清做玻片凝集試驗(yàn)。v當(dāng)與某一種多價(jià)O血清凝集時(shí)，再與該多價(jià)血清所包含的單價(jià)O血清做試驗(yàn)。v致瀉大腸埃希氏菌所包括的O抗原群。如與某一單價(jià)O血清呈現(xiàn)強(qiáng)凝集反應(yīng)，即為假定試驗(yàn)陽(yáng)性。17OK多價(jià)1O55：K59（B5） O86：K61（B7）O111：K58（B4） O127a：K63（B8）OK多價(jià)2O26：K60（B6） O125：K70（B15） O126：K71（B1