實(shí)驗(yàn)九過(guò)氧化氫酶CAT活性的測(cè)定

1、1實(shí)驗(yàn)九 過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定紫外吸收法紫外吸收法v原原 理：理：v H2O2在在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫酶能分解過(guò)氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度氫酶能分解過(guò)氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活性。變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活性。2材料與設(shè)備 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料: 海桐葉海桐葉實(shí)驗(yàn)器材：紫外分光光度計(jì)；離心機(jī)；研缽；實(shí)驗(yàn)器材：紫外分光光度計(jì)；離心機(jī)；研缽；0.5ml刻度吸管刻度吸管2支，支，2ml刻度吸管刻度吸管1支；支；10ml試管試管3支；恒溫

2、水浴；支；恒溫水浴；試試 劑：劑： O.1mol/LO.1mol/L過(guò)氧化氫；過(guò)氧化氫；，0.1mo1/L0.1mo1/L磷酸緩沖液磷酸緩沖液,pH7.0pH7.0、 pH7.8 pH7.8 3操作步驟： 1 1稱取植物材料稱取植物材料0.30.3g g，加入，加入，0.1mo1/L0.1mo1/L磷酸緩沖液磷酸緩沖液 (pH7.0) (pH7.0) 6ml(6ml(分三次加入，最后兩次用于分三次加入，最后兩次用于洗研缽洗研缽) )，在研缽中研磨成勻漿，在研缽中研磨成勻漿，以以 6000r6000rmin min 離心離心1515分鐘，傾分鐘，傾出上清液出上清液( (即為粗酶液即為粗酶液) )

3、。4操作步驟：2.測(cè)定：取測(cè)定：取10ml試管支，按下表順序加入試試管支，按下表順序加入試劑。劑。紫外吸收法測(cè)定紫外吸收法測(cè)定H H2 2O O2 2樣品液配置表樣品液配置表管 號(hào)S1粗酶液(ml)0.2pH7.8 PBS(ml)1.5蒸餾水(ml)1.05操作步驟：3 3測(cè)定測(cè)定v逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，加完立即記時(shí)，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下測(cè)定吸光度，每隔1min讀數(shù)1次，共測(cè)2min，記錄數(shù)據(jù)。64.按下式計(jì)算酶活性。FWtV.VAT124010結(jié)果計(jì)算：結(jié)果計(jì)算： 以以1min1min內(nèi)內(nèi)A A240240減少減少0.10.1的酶量為的酶量為1 1個(gè)酶活單位（個(gè)酶活單位（u u）。）。 過(guò)氧化氫酶活性過(guò)氧化氫酶活性(u/gFW/min)=(u/gFW/min)=Vt粗酶提取液總體積（粗酶提取液總體積（ml）；）； V1測(cè)定用粗酶液體積（測(cè)定用粗酶液體積（ml）；）； FW樣品鮮重（樣品鮮重（g）；）； 0.1A240每下降每下降0.1為為1個(gè)酶活單位（個(gè)酶活單位（u）；）； t加過(guò)氧化氫到最后一次讀數(shù)時(shí)間加過(guò)氧化氫到最后一次讀數(shù)時(shí)間（min）。）。7作 業(yè)：1.寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告2.問(wèn)題：?jiǎn)栴}： （1）影響過(guò)氧化氫酶活性測(cè)