臨床標(biāo)本檢驗(yàn)

1、 常見臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)常見臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)細(xì)菌檢驗(yàn)的常見標(biāo)本細(xì)菌檢驗(yàn)的常見標(biāo)本：糞便、血、尿液、痰、膿汁、腦脊液、分泌物等檢驗(yàn)的目的檢驗(yàn)的目的: 協(xié)助疾病的診斷和治療。原則原則：準(zhǔn)確、快速、敏感、低耗、和安全。 一、認(rèn)真檢查細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)單 收到化驗(yàn)單后，應(yīng)及時(shí)登記、并檢查化驗(yàn)單上的標(biāo)本類型、來源、送檢目的、患者姓名、性別、年齡、臨床診斷等內(nèi)容。 只有了解標(biāo)本的來源及病人的臨床情況，才能有目的地選擇正確的檢驗(yàn)方法，檢出病原菌。第一節(jié) 臨床標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的基本要求二、正確采集和處理標(biāo)本 1.無菌操作 在采集血液、腦脊液或穿刺液時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，避免雜菌污染。 2.使用適當(dāng)?shù)娜萜?血液、腦脊

2、液等應(yīng)放在無菌容器內(nèi)，其他標(biāo)本盡量用無菌容器盛裝。容器滅菌應(yīng)采用干熱、濕熱或紫外線照射等方法。 3.應(yīng)在用藥物之前，并選擇合適的部位采樣。 4.送檢 標(biāo)本采集后，應(yīng)注明患者姓名、年齡、采樣日期、科室或病房，標(biāo)本名稱、臨床診斷、檢驗(yàn)項(xiàng)目等。 立即送檢。 如不能及時(shí)送檢，可將標(biāo)本放于運(yùn)送培養(yǎng)基或保存液中保存送檢。腦膜炎和淋病標(biāo)本需放3537保溫送檢。 5.安全防護(hù) 在采集、運(yùn)送和檢驗(yàn)的過程中務(wù)必注意安全，防止污染、傳播和自身感染。 6.及時(shí)檢驗(yàn)和報(bào)告 對(duì)國家規(guī)定的傳染病檢驗(yàn)結(jié)果，必須及時(shí)報(bào)送上級(jí)部門。 三、選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法 臨床常見標(biāo)本細(xì)菌分離用培養(yǎng)基見表： 臨床常用細(xì)菌分離培養(yǎng)基臨床常

3、用細(xì)菌分離培養(yǎng)基EB BA SS MAC/EMB CA SNA NYE SA血、骨髓 + + + +尿 + + +糞、肛拭 + + +痰、咽拭 + + + +生殖道標(biāo)本 + + + + + +眼耳口鼻 + + + + +標(biāo)本體液（除血 + + + 同時(shí)做需氧和厭氧 培養(yǎng)做細(xì)菌計(jì)數(shù)、必要時(shí)加厭氧培養(yǎng)霍亂則用堿性蛋白胨水增菌和TCBS分離可直接涂片染色鏡檢，并同時(shí)做需氧和厭氧 培養(yǎng)部分可直接涂片鏡檢可直接涂片染色鏡檢，膿汁可同時(shí)做需氧和厭氧培養(yǎng)部分可直接涂片鏡檢EB：增菌肉湯：增菌肉湯 CA：巧克力平板：巧克力平板 SNA：耐瑟菌選擇培養(yǎng)基：耐瑟菌選擇培養(yǎng)基 SA：沙保培養(yǎng)基：沙保培養(yǎng)基 NYE：

4、耶爾森菌培養(yǎng)：耶爾森菌培養(yǎng)基基四、臨床標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)基本程序： 培養(yǎng)方法 根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康目蛇x擇需氧培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)和二氧化碳培養(yǎng)。 從培養(yǎng)結(jié)果中區(qū)別污染菌和病原菌： 觀察菌落是否在劃線上 每次培養(yǎng)均做無菌對(duì)照； 結(jié)合擬培養(yǎng)細(xì)菌的生長特點(diǎn)對(duì)照判斷 注意培養(yǎng)時(shí)間，不同細(xì)菌生長速度不同 涂片染色檢查，觀察是否與目的菌一致。標(biāo)本選擇標(biāo)本選擇采采 集集（保存、運(yùn)送）觀察、前處理觀察、前處理直接涂片檢查直接涂片檢查快速檢驗(yàn)快速檢驗(yàn)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)（需氧、厭氧、二氧化碳培養(yǎng)）增菌增菌（需氧、厭氧、二氧化碳培養(yǎng)）可疑菌落可疑菌落涂片檢查生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定藥敏試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)報(bào) 告報(bào) 告報(bào) 告 一、標(biāo)本采集一、標(biāo)本采集

5、 （一）自然排便采集法 挑取有膿血、粘液部分的糞便23g或液狀糞便絮狀物12ml，盛于無菌廣口瓶/蠟紙盒中或置于保存液/增菌液中送檢。 志賀菌檢驗(yàn)常用甘油緩沖鹽水送檢。 霍亂弧菌用堿性蛋白胨水送檢。 （二）直腸拭子采集法第四節(jié)糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查第四節(jié)糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查 不易獲得糞便或排便困難的患者及幼兒，用甘油鹽水濕潤，然后插入肛門約45cm（幼兒23cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取表面粘液，裝入無菌試管或保存液中送檢。 如不能立即送檢，應(yīng)放入卡布（Cary-Blair）運(yùn)送培養(yǎng)或PH7.0的磷酸鹽甘油（0.033mol/L磷酸鹽緩沖液與等體積甘油的混合液）中運(yùn)送或保存。 二、檢驗(yàn)方法及結(jié)

6、果報(bào)告 （一）檢驗(yàn)程序（一）檢驗(yàn)程序 糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序見圖： 351824 h糞糞 便便 SS和 MAC/EMB初步鑒定初步鑒定 KIA和MIU 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 最最 終鑒終鑒 定定351824 h涂片檢查系統(tǒng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定藥敏試驗(yàn)挑可疑菌落351824 h報(bào)告菌種及藥敏（二）檢驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)告 1、顯微鏡檢查一般不做直接涂片鏡檢，只有在檢查一些特殊疾病如霍亂、結(jié)核、葡萄球菌或艱難梭菌引起的偽膜性腸炎才作直接涂片檢查。 （1）霍亂弧菌顯微鏡檢查： 染色檢查：取米泔水樣便或絮狀物、粘液制片2張，干燥后用乙醇或甲醇固定，分別做革蘭染色及1：10稀釋的石碳酸復(fù)染紅色，鏡檢有無革蘭陰性呈

7、魚群排列的弧菌； 懸滴檢查：取米泔水樣便制成懸滴或壓滴標(biāo)本，檢查細(xì)菌動(dòng)力。在懸滴片中加霍亂弧菌血清做制動(dòng)試驗(yàn)可初步診斷。 （2）葡萄球菌顯微鏡檢查：發(fā)現(xiàn)大量革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌可初步診斷。 （3）結(jié)核分枝桿菌顯微鏡檢查：取蠶豆大小糞塊與飽和鹽水1015ml混合，靜置12小時(shí)，取浮面液體少許作涂片，行萋尼染色鏡檢。若找到紅色桿菌，可報(bào)告“找到抗酸桿菌” （4）艱難梭菌顯微鏡檢查：發(fā)現(xiàn)革蘭陽性粗大桿菌，無莢膜，有卵圓形芽胞于菌體一端者，可報(bào)告找到“革蘭陽性芽胞桿菌，形似艱難梭菌”。 （5）空腸彎曲菌顯微鏡檢查：若見細(xì)小、長而彎的革蘭陰性弧菌、S形或螺旋形成海鷗狀的細(xì)菌，報(bào)告“找到彎曲菌”。

8、2.分離培養(yǎng)及鑒定（1）霍亂弧菌培養(yǎng)： 種于堿性蛋白胨水中，經(jīng)37 6小時(shí)增菌； 取表面生長物移種于堿性瓊脂平板上或TCBS平板； 作氧化酶試驗(yàn)，陽性者用霍亂弧菌多價(jià)“O”診斷血清作玻片凝集試驗(yàn)，初步報(bào)告為霍亂弧菌； 同時(shí)挑取菌落作純培養(yǎng)， 37 培養(yǎng)18小時(shí)后，經(jīng)玻片凝集試驗(yàn)復(fù)核無誤，即可作生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行全面鑒定，并報(bào)告結(jié)果。 （2）大腸埃希菌試驗(yàn)： 取膿血或糊狀糞便于弱選擇性培養(yǎng)培養(yǎng)基（EMB或MAC）， 37培養(yǎng)1824小時(shí)后觀察； 挑選可疑菌落接種KIA和MIU進(jìn)行初步生化鑒定； 從斜面是挑取菌苔或直接從上述平板挑取510個(gè)菌落，分別與致病性大腸埃希菌診斷血清進(jìn)行凝集，并與單

9、價(jià)血清做分型鑒定。 （3）金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：）金黃色葡萄球菌培養(yǎng)： 取嘔吐物、糞便等種于高鹽甘露醇瓊脂或高鹽卵黃瓊脂平板； 挑取平板上的黃色菌落涂片鏡檢； 做各項(xiàng)試驗(yàn)加以鑒定，并檢測(cè)其腸毒素，最后報(bào)告。 （4）艱難梭菌培養(yǎng)）艱難梭菌培養(yǎng)：取黃色夾有偽膜的新排出液狀糞便，種于環(huán)絲氨酸甲氧頭孢霉素果糖瓊脂（CCFA）平板上， 37厭氧培養(yǎng)48小時(shí)后，選擇可疑菌落移種于庖肉培養(yǎng)基備毒素測(cè)定，同時(shí)做其他試驗(yàn)加以鑒定，最后報(bào)告。（5）沙門菌及志賀菌屬培養(yǎng)（重點(diǎn)）： 取膿血、粘液糞便種于GN增菌液或亞硒酸鹽增菌液。 或直接劃線接種于強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基（SS、XLD等）和弱選擇性培養(yǎng)（MAC、EMB、CB等）

10、各一個(gè)，經(jīng)37培養(yǎng)1824小時(shí)。 挑取不發(fā)酵乳糖的小而透明的菌落，接種KIA和MIU 37 孵育后，觀察結(jié)果。 用生化試驗(yàn)和血清學(xué)凝集試驗(yàn)作最后鑒定并報(bào)告。如生化試驗(yàn)符合，診斷血清不發(fā)生凝集，則將待檢菌液隔水煮沸1小時(shí)以破壞K抗原和Vi抗原，再作凝集試驗(yàn)。 腸桿菌科生化反應(yīng)氧化酶硝酸鹽還原吲哚甲基紅VP檸檬酸鹽硫化氫尿酶丙二酸鹽苯丙氨酸脫氨酶賴氨酸脫羧酶鳥氨酸脫羧酶精氨酸雙水解酶動(dòng)力ONPG埃希菌屬 + + + + d + +/-志賀菌屬 + d + d d 沙門菌屬 + + + + + + +/ d +變形桿菌屬 + d + -/+ d +/- + + +克雷伯菌屬 + d d d d d

11、d d + 腸道桿菌系統(tǒng)生化反應(yīng)：沙門菌屬細(xì)菌的初步鑒定MIU 觸酶 氧化酶硝酸鹽還原診斷血清凝集KIA斜面 底層 產(chǎn)氣 H2S甲型副傷寒 K A + -/+ + - + + AF多價(jià)+ A群+乙型副傷寒 K A + + + - + + AF多價(jià)+ B群+丙型副傷寒 K A + + + - + + AF多價(jià)+ C群+ vi+豬霍亂沙門菌 K A + -/+ + - + + AF多價(jià)+ C群+ 傷寒沙門菌 K A - +/- + - + + AF多價(jià)+ D群+ vi+其他沙門菌 K A + + + - + + AF多價(jià)+ 腸炎+微量生化反應(yīng)系統(tǒng)Micro-ID系統(tǒng)VP硝酸鹽還原 苯丙氨酸脫羧酶硫化氫吲哚鳥氨酸賴氨酸丙二酸鹽尿素七葉甘ONPG阿拉伯糖側(cè)金盞花醇肌醇三梨醇421421421421421 + + + + + + + 0 2 0 0 2 1 4 0 0 0 2 1 4 0 0 2 3 4 3 4相加所得數(shù)字：23434 查出相應(yīng)細(xì)菌為：大腸埃希菌血清學(xué)凝集： 先做AF多價(jià)O血清的凝集(95%以上的沙門菌都屬于AF群)，然后以6個(gè)O群的因子血清定群（O2凝集為A群；O4凝集為B群；O7凝集為C1亞群;O8凝集C2亞群；O9凝集為D群；O