細(xì)菌的分離、接種和培養(yǎng)ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 細(xì)菌的分別、接種細(xì)菌的分別、接種和培育和培育 目的要求目的要求 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 操作規(guī)范例如操作規(guī)范例如 作作 業(yè)業(yè)一、目的要求一、目的要求 掌握從環(huán)境土壤、水體、活性污泥等中分掌握從環(huán)境土壤、水體、活性污泥等中分別和純化別和純化微生物的方法和原理；微生物的方法和原理；倒平板；倒平板；細(xì)菌純種分別：稀釋混合平板分別法、稀釋涂布細(xì)菌純種分別：稀釋混合平板分別法、稀釋涂布平板分別法和平板劃線法；平板分別法和平板劃線法；接種技術(shù)；接種技術(shù)；無菌操作技術(shù)；無菌操作技術(shù)； 在自然界中，不同種類的微生物絕大多數(shù)都是混雜生活在一同的，為了消費(fèi)和科學(xué)研討的需

2、求，當(dāng)我們希望獲得某一種微生物時(shí)，就必需從混雜的微生物類群中分別出它，以得到只含有這一種微生物的純培育物，這種獲得純培育物的方法稱為微生物的分別與純化。 為了獲得純種的微生物，普通根據(jù)該微生物營(yíng)養(yǎng)或培育特點(diǎn)(微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、氧等條件)，或?qū)δ撤N抑制劑的耐受性不同，或?qū)δ撤N環(huán)境條件要求不同，從而制造或設(shè)置一些選擇性培育基，或選擇性培育條件，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或劃線法分別，純化該微生物，直至得到該純種菌株。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材 土壤樣品環(huán)境樣品土壤樣品環(huán)境樣品 牛肉膏蛋白胨培育基；牛肉膏蛋白胨培育基； 無菌試管、無菌三角瓶、無菌玻璃無菌

3、試管、無菌三角瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、無菌涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、無菌培育皿；培育皿； 超凈任務(wù)臺(tái)超凈任務(wù)臺(tái)一一 稀釋混合平板法稀釋混合平板法四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 1. 土壤稀釋液的制備土壤稀釋液的制備 稱取土樣稱取土樣10g10g，放入盛，放入盛90ml90ml無菌水三角瓶中，振蕩無菌水三角瓶中，振蕩15152020分分鐘，使微生物細(xì)胞分散，靜置約鐘，使微生物細(xì)胞分散，靜置約20203030秒，即成秒，即成10-110-1的土壤的土壤懸液。懸液。 另取裝有另取裝有9ml9ml無菌水的試管，編號(hào)為無菌水的試管，編號(hào)為10-210-2、10-310-3、10-410-4、10

4、-10-5 5、10-610-6，用無菌吸管汲取，用無菌吸管汲取10-110-1土壤懸液土壤懸液l mll ml，參與編號(hào)，參與編號(hào)10-210-2的的無菌試管中，吹吸三次，使之混合均勻，即成無菌試管中，吹吸三次，使之混合均勻，即成10-210-2的土壤稀的土壤稀釋液。再用另一支吸管汲取釋液。再用另一支吸管汲取10-210-2試管中的土壤稀釋液試管中的土壤稀釋液1ml1ml，參，參與編號(hào)與編號(hào)10-310-3的無菌試管中，悄然搖動(dòng)，使之混合均勻，即成的無菌試管中，悄然搖動(dòng)，使之混合均勻，即成10-310-3的土壤稀釋液，一定要每次改換一支無菌吸管延續(xù)稀的土壤稀釋液，一定要每次改換一支無菌吸管延

5、續(xù)稀釋。同法依次分別稀釋成釋。同法依次分別稀釋成10-410-4、10-510-5和和10-610-6等一系列稀釋度等一系列稀釋度菌懸液。菌懸液。 2. 平板制造平板制造 將無菌培育皿編上將無菌培育皿編上10-3、10-4、10-5號(hào)碼，每一號(hào)碼號(hào)碼，每一號(hào)碼設(shè)三個(gè)反復(fù)，用設(shè)三個(gè)反復(fù)，用1ml無菌吸管按無菌操作要求吸無菌吸管按無菌操作要求吸10-5稀釋稀釋液各液各1ml，分別放入編號(hào)，分別放入編號(hào)10-5的三個(gè)培育皿中。同法汲取的三個(gè)培育皿中。同法汲取10-5稀釋液各稀釋液各1ml，分別放入編號(hào)，分別放入編號(hào)10-4的三個(gè)培育皿中。的三個(gè)培育皿中。再汲取再汲取10-3稀釋液各稀釋液各1ml，分

6、別放入編號(hào)，分別放入編號(hào)10-3的三個(gè)培的三個(gè)培w1養(yǎng)皿中。然后在養(yǎng)皿中。然后在9個(gè)培育皿中分別倒入個(gè)培育皿中分別倒入15ml已融化并且冷已融化并且冷卻至卻至45左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基，加蓋后悄然左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基，加蓋后悄然搖動(dòng)培育皿，使培育基均勻分布，平置于桌面上，待凝搖動(dòng)培育皿，使培育基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整個(gè)操作過程應(yīng)嚴(yán)厲按照無菌操作。固后即成平板，整個(gè)操作過程應(yīng)嚴(yán)厲按照無菌操作。 3. 培育與移植培育與移植 待平板完全冷凝后，將平板倒置待平板完全冷凝后，將平板倒置37恒溫箱中培育恒溫箱中培育2448小時(shí)，檢查分別結(jié)果。將培育后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落小時(shí)，

7、檢查分別結(jié)果。將培育后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取接種到牛肉膏蛋白胨培育基的斜面上，然后置分別挑取接種到牛肉膏蛋白胨培育基的斜面上，然后置于于37恒溫箱中培育，待菌苔長(zhǎng)出后，檢查菌苔能否單恒溫箱中培育，待菌苔長(zhǎng)出后，檢查菌苔能否單純，也可用顯微鏡涂片染色檢查能否是單一的微生物，純，也可用顯微鏡涂片染色檢查能否是單一的微生物，假設(shè)有其它雜菌混雜，就可再一次進(jìn)展分別、純化，直假設(shè)有其它雜菌混雜，就可再一次進(jìn)展分別、純化，直至獲得純培育。至獲得純培育。二稀釋涂布平板法二稀釋涂布平板法 此法與稀釋混合平板法根本一樣，無菌操作此法與稀釋混合平板法根本一樣，無菌操作也一樣，所不同的是先將牛肉膏蛋白胨培育基融也一

8、樣，所不同的是先將牛肉膏蛋白胨培育基融化，在火焰旁注入培育皿，搖勻后制成平板，然化，在火焰旁注入培育皿，搖勻后制成平板，然后用三支后用三支1ml1ml無菌吸管分別由無菌吸管分別由10-410-4、10-510-5、10-610-6三管三管土壤稀釋液中各汲取土壤稀釋液中各汲取0.2ml0.2ml對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌玻璃涂棒在培育基外表悄然地的平板中，用無菌玻璃涂棒在培育基外表悄然地涂布均勻，然后分別倒置于涂布均勻，然后分別倒置于3737溫箱中培育后，溫箱中培育后，再挑取單個(gè)菌落，直至獲得純培育。再挑取單個(gè)菌落，直至獲得純培育。三平板劃線分別法三平板劃線分別法制

9、備土壤稀釋液制備土壤稀釋液傾注平板傾注平板培育培育 挑菌落挑菌落接種和分別工具1接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀 移接斜面移接斜面常用的接種方法常用的接種方法劃線接種劃線接種點(diǎn)接種點(diǎn)接種穿刺接種穿刺接種涂布接種涂布接種液體接種液體接種注射接種注射接種斜面接種時(shí)的無菌操作(1)接種滅菌 (2)開啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞 純化平板劃線法純化平板劃線法倒平板倒平板劃線劃線培育培育挑菌落挑菌落純種純培育純種純培育 平板劃線分別的方法平板劃線分別的方法1.斜線法斜線法 2.曲線法曲線法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四格法五、微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范例如五、微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)范例如一斜面接種無菌操作技術(shù)二倒平板及平板劃線接種一斜面接種無菌操作技術(shù)一斜面接種無菌操作技術(shù)( (二倒平板及平板劃線接種二倒平板及平板劃線接種三平板劃線接種：三平板劃線接種：六、作六、作 業(yè)業(yè)1. 簡(jiǎn)述無菌操作過程中的留意點(diǎn)。2. 擬出從土壤中分