快速膠體-免疫層析法檢測(cè)臨床應(yīng)用201510

1、膠體膠體-金金-免疫免疫層析法檢測(cè)層析法檢測(cè)在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的需要注意若干問題王洛平王洛平 2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)1 免疫標(biāo)記學(xué)可追溯到免疫標(biāo)記學(xué)可追溯到6060年代。隨著新理論涌現(xiàn)、年代。隨著新理論涌現(xiàn)、單克隆技術(shù)與納米工藝開發(fā)單克隆技術(shù)與納米工藝開發(fā)，7070年代以膠體金為代年代以膠體金為代表的標(biāo)記免疫分析技術(shù)表的標(biāo)記免疫分析技術(shù)突起突起，迅速進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室常規(guī)，迅速進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中，成為繼酶免放免熒光免疫三大技術(shù)之后，工作中，成為繼酶免放免熒光免疫三大技術(shù)之后，又一個(gè)龐大的試驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用體系，其產(chǎn)品廣泛用于又一個(gè)龐大的試驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用體系，其產(chǎn)品廣泛用于健康體檢，流行病學(xué)調(diào)查，臨床疾

2、病快篩篩查，酒健康體檢，流行病學(xué)調(diào)查，臨床疾病快篩篩查，酒駕測(cè)試，毒品檢測(cè)，食品安全檢測(cè)等方面，駕測(cè)試，毒品檢測(cè)，食品安全檢測(cè)等方面，2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)2發(fā)展歷史 基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室或者大型醫(yī)院門診部為滿足臨床患者急迫基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室或者大型醫(yī)院門診部為滿足臨床患者急迫 診療需要，采用膠體（診療需要，采用膠體（金金/ /硒硒）免疫）免疫層析層析法檢測(cè)法檢測(cè) 基于膠體金免疫層析法屬于定性實(shí)驗(yàn)（無室內(nèi)質(zhì)控，有些基于膠體金免疫層析法屬于定性實(shí)驗(yàn)（無室內(nèi)質(zhì)控，有些 用儀器半定量結(jié)果表達(dá)）范疇，靈敏度用儀器半定量結(jié)果表達(dá)）范疇，靈敏度無法無法與與定量實(shí)驗(yàn)定量實(shí)驗(yàn)比比 較，檢測(cè)低水平抗原或抗體有時(shí)

3、會(huì)發(fā)生漏檢，目測(cè)方法會(huì)較，檢測(cè)低水平抗原或抗體有時(shí)會(huì)發(fā)生漏檢，目測(cè)方法會(huì) 受到實(shí)驗(yàn)室光線影響等干擾，容易產(chǎn)生一些假陰性或假陽(yáng)受到實(shí)驗(yàn)室光線影響等干擾，容易產(chǎn)生一些假陰性或假陽(yáng) 性結(jié)果性結(jié)果 如何做好如何做好技術(shù)技術(shù)防范？防范？2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)3使用現(xiàn)狀1 1、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎表面抗原檢測(cè)試紙卡檢測(cè)試紙卡2 2、HIVHIV（1/21/2）抗體）抗體檢測(cè)試紙卡檢測(cè)試紙卡3 3、潛血（、潛血（HbHb）檢測(cè)）檢測(cè)試紙卡試紙卡4 4、輪狀病毒（、輪狀病毒（F-RVF-RV， A A群群）抗原檢測(cè)）抗原檢測(cè)試紙卡試紙卡5 5、H HCGCG檢測(cè)試紙檢測(cè)試紙卡卡6 6、降鈣素原

4、（、降鈣素原（PCTPCT）檢測(cè)）檢測(cè)試紙?jiān)嚰埧? 7、甲、甲/ /乙型流感病毒抗原檢測(cè)乙型流感病毒抗原檢測(cè)試紙?jiān)嚰埧?、達(dá)百種、達(dá)百種2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)4臨床實(shí)驗(yàn)室膠體金檢測(cè)條（卡）常用種類2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)5產(chǎn)品種類之一 認(rèn)真閱讀產(chǎn)品說明書，了解方法學(xué)種類認(rèn)真閱讀產(chǎn)品說明書，了解方法學(xué)種類 熟知熟知產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度 及時(shí)告知臨床方法局限性：限于及時(shí)告知臨床方法局限性：限于初步篩查初步篩查； 限于操作人員限于操作人員判斷經(jīng)驗(yàn)；限于判斷經(jīng)驗(yàn)；限于單一項(xiàng)目檢測(cè)單一項(xiàng)目檢測(cè)2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)6檢測(cè)原理快速診斷快速診斷技術(shù)之一：技術(shù)之一：免疫膠

5、體免疫膠體金金免疫層析分析檢測(cè)免疫層析分析檢測(cè) (colloidal gold immunochromatography assay, GICA ) 是是以以膠體金膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體檢抗體檢測(cè)的測(cè)的一種新型的一種新型的免疫免疫標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記技術(shù) 有三種反應(yīng)模式：夾心法，間接法，競(jìng)爭(zhēng)抑制法見下面圖示3-52015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)7方法學(xué)圖示 膠體金顆粒對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，而不被壞其生物活性，可以與蛋白質(zhì)等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共價(jià)結(jié)合，形成膠體金標(biāo)記物。 2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)8襯板樣品墊金標(biāo)墊吸收墊膜膠體金免疫層析試紙條

6、的構(gòu)成圖示圖示12015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)9標(biāo)本處理后，標(biāo)本處理后，加樣行進(jìn)方向加樣行進(jìn)方向圖示圖示22015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)10夾心法反應(yīng)原理夾心法反應(yīng)原理C 陰性B 陽(yáng)性圖示32015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)11間接法反應(yīng)原理間接法反應(yīng)原理C 陰性B 陽(yáng)性圖示圖示42015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)12陽(yáng)性 弱陽(yáng)性陰性競(jìng)爭(zhēng)抑制法反應(yīng)原理檢測(cè)線顏色強(qiáng)度與SD（磺胺嘧啶）濃度負(fù)相關(guān)圖示圖示52015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)13抗原抗原/抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)試紙?jiān)嚰埧?兩條（兩條（紅紅或紫或綠或紫或綠）線，）線， 陽(yáng)性陽(yáng)性 一條線，一條線， 陰性陰性 無線，無線， 實(shí)驗(yàn)失敗或試紙失效實(shí)

7、驗(yàn)失敗或試紙失效2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)14結(jié)果判定結(jié)果判定2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)15GICAGICA優(yōu)勢(shì) GICA GICA確實(shí)是確實(shí)是一一種便捷檢測(cè)種便捷檢測(cè)方法，具方法，具有簡(jiǎn)單快速有簡(jiǎn)單快速、通過肉眼或小型臺(tái)式儀判、通過肉眼或小型臺(tái)式儀判定定結(jié)果、無需復(fù)雜操作技巧和特殊設(shè)備結(jié)果、無需復(fù)雜操作技巧和特殊設(shè)備、無無污染、攜帶方便等污染、攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 限于初步限于初步篩查篩查限于操作人員限于操作人員判斷判斷經(jīng)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)限于單一項(xiàng)目檢測(cè)，目前已有組合項(xiàng)目限于單一項(xiàng)目檢測(cè)，目前已有組合項(xiàng)目試條出現(xiàn)，如甲試條出現(xiàn)，如甲/ /乙型流感病毒檢測(cè)乙型流感病毒檢測(cè)2015-10大興區(qū)質(zhì)

8、控中心專項(xiàng)16GICAGICA技術(shù)技術(shù)問題 最大問題：沒有室內(nèi)質(zhì)控，其結(jié)果解釋只作篩查，不作疾病診斷依據(jù)， IQC質(zhì)控豁免試驗(yàn)。提醒臨床多結(jié)果核對(duì)，例如血常規(guī)，CRP，PCT， 室間比對(duì)：衛(wèi)生部或北京市臨檢中心發(fā)已知儀器結(jié)果質(zhì)控品，各家發(fā)回結(jié)果給予EQA評(píng)價(jià)2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)17室內(nèi)/室間質(zhì)控 術(shù)前或孕期術(shù)前或孕期12周檢查或創(chuàng)傷輸血：周檢查或創(chuàng)傷輸血： 艾梅乙檢查已納入必檢項(xiàng)目，擇期手術(shù)或正常孕艾梅乙檢查已納入必檢項(xiàng)目，擇期手術(shù)或正常孕檢標(biāo)本可采用檢標(biāo)本可采用EIA或或MEIA或或ECL方法上機(jī)檢測(cè)方法上機(jī)檢測(cè) 急診情況，快速篩查使用試條檢測(cè)，如篩查結(jié)果急診情況，快速篩查使用試

9、條檢測(cè)，如篩查結(jié)果是陰性，血清學(xué)是陰性，血清學(xué)儀器儀器復(fù)檢結(jié)果是陽(yáng)性結(jié)果，復(fù)檢結(jié)果是陽(yáng)性結(jié)果，臨床大臨床大夫問：夫問：是否存在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法學(xué)問題是否存在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法學(xué)問題 回答回答：肯定會(huì)這種情況，方法學(xué)自身局限性問題肯定會(huì)這種情況，方法學(xué)自身局限性問題2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)18案例一HIV（1/2）抗體檢測(cè)試條1513-1514陽(yáng)性?（膠體硒法）1513-1514陽(yáng)性（膠體金法）2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)192015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)20仔細(xì)觀察后！案例二某公司便潛血檢測(cè)試條某公司便潛血檢測(cè)試條 HGB檢測(cè)濃度檢測(cè)濃度: 試劑試劑標(biāo)定標(biāo)定靈敏靈敏度度0.2ug/ml

10、(檢測(cè)范圍檢測(cè)范圍0.22000ug/ml=0.00020.2g/L)換算公式換算公式: 1ug/ml=0.000001g/0.001L=0.001g/L 判定判定： 預(yù)試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)0.2ug/ml根本肉根本肉眼看不出。眼看不出。所以所以科室科室要求只要要求只要看見檢測(cè)線就看見檢測(cè)線就報(bào)陽(yáng)性報(bào)陽(yáng)性HBsAg檢測(cè)試條檢測(cè)試條 曾驗(yàn)證曾驗(yàn)證4家市場(chǎng)上最常用試家市場(chǎng)上最常用試條檢測(cè)靈敏度條檢測(cè)靈敏度 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，僅美國(guó)雅培試條實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，僅美國(guó)雅培試條能檢出說明書標(biāo)定檢測(cè)靈敏能檢出說明書標(biāo)定檢測(cè)靈敏度，其他試條均撿不出度，其他試條均撿不出2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)21案例三輪狀病毒抗原檢測(cè)試條輪狀病

11、毒抗原檢測(cè)試條 曾收集曾收集150例例嬰幼兒嬰幼兒腹瀉便標(biāo)本，腹瀉便標(biāo)本，進(jìn)口試條快篩獲得陽(yáng)性與陰性結(jié)進(jìn)口試條快篩獲得陽(yáng)性與陰性結(jié)果，再經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳果，再經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）法）法檢測(cè)輪狀病毒基因檢測(cè)輪狀病毒基因組組RNA，發(fā)現(xiàn)陰性標(biāo)本中，發(fā)現(xiàn)陰性標(biāo)本中有有3例例C群群輪狀病毒血清型輪狀病毒血清型 陽(yáng)性均為陽(yáng)性均為A群群輪狀病毒血清型，感輪狀病毒血清型，感染人群中主要血清型染人群中主要血清型甲型甲型/乙型流感乙型流感病毒病毒抗原檢測(cè)試條抗原檢測(cè)試條 市場(chǎng)上最常用產(chǎn)品標(biāo)注：市場(chǎng)上最常用產(chǎn)品標(biāo)注：甲型甲型流感流感病毒病毒：Flu A (A2/Aichi/2/68,H3N2)

12、 乙型乙型流感流感病毒：病毒：Flu B (Hong Kong5/72) 事實(shí)上，流行毒株事實(shí)上，流行毒株 Flu A有有16個(gè)亞型；個(gè)亞型； Flu B 有有5個(gè)亞型個(gè)亞型；檢測(cè)檢測(cè)陽(yáng)檢率與流行陽(yáng)檢率與流行株株 緊密緊密相關(guān)相關(guān)2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)22解決對(duì)策(1-1)方法學(xué)互相補(bǔ)充方法學(xué)互相補(bǔ)充 多種方法多種方法（廠家（廠家）驗(yàn)證）驗(yàn)證 必要必要時(shí)復(fù)查（時(shí)復(fù)查（尤其遇到臨尤其遇到臨床對(duì)陰性結(jié)果質(zhì)疑床對(duì)陰性結(jié)果質(zhì)疑）或多或多次不同批號(hào)試條次不同批號(hào)試條核查核查 HIV抗體檢測(cè)流程為典范抗體檢測(cè)流程為典范2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)23以以CDC結(jié)果結(jié)果報(bào)告臨床報(bào)告臨床2015

13、-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)24解決對(duì)策(1-2)質(zhì)疑時(shí)，質(zhì)疑時(shí)，雙雙法驗(yàn)證法驗(yàn)證解決對(duì)策(2)產(chǎn)品選購(gòu)目標(biāo)產(chǎn)品選購(gòu)目標(biāo) 改良最好結(jié)果是用儀器測(cè)定，去除人為干擾。例如PCT，用血清50ul或全血75ul； 性能指標(biāo)與臨床意義：性能指標(biāo)與臨床意義： 檢測(cè)范圍 0.1-100ng/ml 靈敏度 0.1ng/ml 參考范圍：0.5ng/ml儀器法參考性強(qiáng)儀器法參考性強(qiáng)2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)25 免疫方法學(xué)遇到技術(shù)問題，在這一技術(shù)領(lǐng)域幾乎都免疫方法學(xué)遇到技術(shù)問題，在這一技術(shù)領(lǐng)域幾乎都能遇到，須事先想到：能遇到，須事先想到： 例一 便潛血試條：柏油便陰性，抗原過多后帶現(xiàn)象，稀釋后再做 為強(qiáng)陽(yáng)性 例

14、二 肺炎支原體試條：自身免疫型疾病患者可能出現(xiàn)假陽(yáng)性干擾 例三 Flu A/B試條：取材不足，假陰性。臨床質(zhì)疑，可以重新再送 一次，反復(fù)多次 例四 工藝問題： RV一盒試條多一半無C線，更換批次正常； 潛血檢測(cè)兩家醫(yī)院結(jié)果不一致，更換批次一致2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)26解決對(duì)策(3) 項(xiàng)目操作規(guī)范一致性培訓(xùn)項(xiàng)目操作規(guī)范一致性培訓(xùn) 無論如何開展正式實(shí)驗(yàn)前，須讓全體參加發(fā)報(bào)告的檢驗(yàn)人員每人操作一遍，最好能覆蓋陽(yáng)性與陰性標(biāo)本 目的：目的：發(fā)現(xiàn)糾正個(gè)人習(xí)慣性操作與隨意性，防止造成邊緣性結(jié)果有出入。例如使用移液器手法；重要試劑從冰箱回到室溫時(shí)間；目測(cè)判斷標(biāo)準(zhǔn)；觀察結(jié)果時(shí)間（計(jì)時(shí)器定時(shí)）2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)27解決對(duì)策(4) 與與臨床經(jīng)常溝通，檢驗(yàn)項(xiàng)目臨床經(jīng)常溝通，檢驗(yàn)項(xiàng)目手冊(cè)告知該方法檢測(cè)手冊(cè)告知該方法檢測(cè)結(jié)果結(jié)果可靠性可靠性，強(qiáng)調(diào)臨床質(zhì)疑可強(qiáng)調(diào)臨床質(zhì)疑可復(fù)檢（更換批次?。?fù)檢（更換批次！） 強(qiáng)調(diào)低濃度抗原或抗體，因其檢測(cè)下線靈敏度受限：強(qiáng)調(diào)低濃度抗原或抗體，因其檢測(cè)下線靈敏度受限： 1）報(bào)告注明：XXXXX試驗(yàn)篩查 2）建議臨床多次開單復(fù)檢，便潛血 3）關(guān)注流行季節(jié)特點(diǎn)：RV試條或Flu A/B試條 4）重要檢驗(yàn)項(xiàng)目，須同時(shí)進(jìn)行同期預(yù)留標(biāo)本血清學(xué)檢測(cè)， Anti-HIV或梅毒特異性抗體/RPR 5) 4周后血清抗體復(fù)查2015-10大興區(qū)質(zhì)控中心專項(xiàng)28解決對(duì)