強直性脊柱炎的實驗室檢測及其意義

1、強直性脊柱炎的實驗室強直性脊柱炎的實驗室檢測及其意義檢測及其意義四川金域 魏徵霄2014-02-08內容提要： 強直性脊柱炎 特點及其與B27關系什么是HLA及HLA-B27MHC、HLA、亞型、關聯、RRHLA-B27與哪些疾病相關HLA-B27 怎么檢測MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP2 強直性脊柱炎(AS) 是一種慢性、進行性，中軸關節(jié)受累 的關節(jié)病變，其中以骶髂關節(jié)和脊柱關節(jié)受累為主要臨床表現。該病早期進展較慢，但后期發(fā)展較快，很短時間內形成 駝背畸形，髖、膝等關節(jié)強直，故早期診斷顯得尤為重要。強直性脊柱炎的流行病學v 患病率患病率 我國我國0.3% 0

2、.3% 高！高！ （RA 0.36%RA 0.36%）v 發(fā)病年齡發(fā)病年齡 40 40歲以前發(fā)病歲以前發(fā)病 高峰高峰20-30 20-30 歲歲v 男女比例男女比例 10:1 10:1強直性脊柱炎相關檢測：HLA-B27Ankylosing Spondylitis，AS患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關節(jié)（骶髂關節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關節(jié)及關節(jié)外表現，嚴重者發(fā)生脊柱畸形和關節(jié)強直B27檢測可作為有相關癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！5AS與HLA-B276健康人群健康人群HLA-B27HLA-B27陽性

3、率及陽性率及ASAS患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異患病率各地區(qū)、種族有顯著的差異HLAB27HLAB27與強直性脊柱炎的發(fā)病有很強的相關性與強直性脊柱炎的發(fā)病有很強的相關性兩種錯誤認識：兩種錯誤認識：HLA-B27HLA-B27陽性陽性ASAS！ HLA-B27HLA-B27陽性不會轉陰！陽性不會轉陰！AS與HLA-B27的關聯機制連鎖不平衡學說分子模擬學說關節(jié)源性肽假說其他：T細胞受體庫假說超抗原假說B27修飾因子假說Cys67模型7HLA相關概念主要組織相容性抗原主要組織相容性復合體（ MHC 類)：H-2 SLA HLAMHC、HLA復合體基因MHC分子、HLA分子抗原HLA：人類白細胞

4、抗原（ Human Leukocyte Antigen）8HLA相關概念9HLA-B27相關疾病 10HLA-B27檢測方法及評價抗原水平微量細胞毒法 84%ELISA 85%IMS-ELISA 88%流式細胞術法 93%基因水平PCR-SSP 96%11微量細胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）原理：如果受試者淋巴細胞表面表達有相應的HLA-B27抗原，就可以與B27抗體結合，形成Ag-Ab復合物激活補體，發(fā)生對細胞膜的破壞及細胞殺傷作用，通過染色法觀察，死細胞的細胞膜通透性改變，染料能夠進入使之著色，而活細胞細胞膜完整不被染色。根據死細胞占全部細胞的百分比

5、，可以判斷受試者淋巴細胞表面是否存在HLA-B27抗原及其與抗體的反應強度。優(yōu)點：不需特殊儀器設備，易于操作，一般的實驗室都可開展。缺點：標本存放不能超過8小時；感染可以使細胞膜表面的B27分子的數量或結構改變，影響MLCT的結果，易出現假陰性。12J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189ELISA原理：應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中HLA-B27水平。用純化的B27抗體包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待檢標本）、生物素化的抗HLA-B27抗體、HRP標記的親和素，形成雙抗體夾心反

6、應，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HLA-B27呈正相關。其結果與MLCT法符合率為99，且不受感染因素的影響，重復性好。 13瞿良等實用醫(yī)學雜志，瞿良等實用醫(yī)學雜志，2005,19(21):2190-2191磁珠酶聯免疫分析（IMS-ELISA）磁珠分離與ELISA結合B27單抗標記磁珠HRP標記CD45單抗通過磁場分離游離相優(yōu)點：反應時間短（1小時完成）對標本新鮮度要求不高28靜置4 d之內可用14楊雅瓊等現代檢驗醫(yī)學雜志，楊雅瓊等現代檢驗醫(yī)學雜志，2002,17(2):60-62流式細胞術法利用熒

7、光標記的HLA-B27單克隆抗體，與細胞表面的B27抗原結合，使結合后的淋巴細胞具有一定的熒光強度，這種熒光強度可由流式細胞儀測得的通道值來反映，以其值的高低判斷HLA-B27抗原表達百分比，從而判斷HLA-B27是否陽性。優(yōu)點：全自動儀器檢測，減少了人為因素的影響，重復性高，操作簡單，自動化程度高；靈敏度可達100%，特異性達97.4%；結果穩(wěn)定，樣本之間，不同儀器之間，不同實驗室之間可重復性高。結果判斷準確，為目前較為理想的方法，國外已將FCM法檢測HLA-B27作為AS 診斷的常規(guī)檢測方法。缺點：儀器昂貴，目前只在較大醫(yī)院應用，且熒光易淬滅。15PCR-SSP通過設計基因序列特異的引物SSP，特異性的擴增出標本中的HLA-B27基因片段，以瓊脂糖凝膠電泳分析PCR擴增產物，若出