生物制品制造檢定規(guī)程資料講解

1、生物制品制造檢定規(guī)程中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室1 概述概述 （一）（一） 生物制品（生物制品（biological products） 定義：生物制品是以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織定義：生物制品是以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷的一類藥物。，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷的一類藥物。 區(qū)分概念區(qū)分概念生物藥物生物藥物 生化藥物生化藥物生物技術(shù)藥物生物技術(shù)藥物基因工程藥物基因工程藥物中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室（二）生物制品

2、的分類按應(yīng)用分按應(yīng)用分A 治療類治療類B 預(yù)防類預(yù)防類C 診斷類診斷類生物制品分類生物制品分類其他劃分其他劃分疫苗；疫苗；抗毒素及抗血清；抗毒素及抗血清；血液制品；血液制品；重組重組DNA制品；制品；（三）生物制品發(fā)展和現(xiàn)狀（三）生物制品發(fā)展和現(xiàn)狀中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室1796年 英國醫(yī)生Edward Jenner首創(chuàng)接種牛痘疫苗預(yù)防天花的方法，并得到了迅速的普及，牛痘苗成為人類早期成功應(yīng)用的生物制品之一。1919年我國開始生產(chǎn)生物制品，在北京天壇建立中央防疫處專門從事疫苗、抗毒素等的制造工作。50年代 生物制品機構(gòu)整頓調(diào)整，全國設(shè)有7個研究所和1個國家檢定所，產(chǎn)

3、量迅速提高近年來發(fā)展迅速 生物制品的生產(chǎn)由以往的生化提取方式，發(fā)展為細(xì)胞工程、基因工程表達，得到生物活性強、性質(zhì)更優(yōu)、成本更低并能夠大量獲得的生物制品。這些生物技術(shù)藥物已被廣泛應(yīng)用于癌癥、糖尿病、心血管疾病等疾病的預(yù)防和治療。1982年 世界上第一個生物技術(shù)藥物重組人胰島素獲準(zhǔn)生產(chǎn)銷售。全球生物技術(shù)藥物報批新藥的數(shù)量急速上升，大有超過常規(guī)藥物報批量的趨勢目前 我國已有15種基因工程藥物批準(zhǔn)上市，另有約30種正在進行臨床驗證和臨床試驗，還有近30種進入中試和實驗室研究階段，其中一部分具有自主知識產(chǎn)權(quán)2005年我國批準(zhǔn)重組人腦利鈉肽等4 個生物制品一類新藥。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥

4、物分析教研室（四）生物制品特點（四）生物制品特點1專一性強，毒副作用小2 穩(wěn)定性差3分子量大，結(jié)構(gòu)確證難2 生物制品質(zhì)量要求生物制品質(zhì)量要求主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：v1）生物藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展）生物藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展v2）生物藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容簡介）生物藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容簡介v3）生物樣品檢測的特點）生物樣品檢測的特點 Company L中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室一、我國生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展一、我國生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展中國生中國生物制品規(guī)物制品規(guī)程程生物制生物制品制造檢品制造檢定規(guī)程定規(guī)程第一部第一部中國生中國生物制品規(guī)物制品規(guī)程程英文英文版版19591979-20002

5、003中國生中國生物制品規(guī)物制品規(guī)程程并入并入藥典，作藥典，作為中國藥為中國藥典三部典三部200505年版三部收載年版三部收載101個品種，其中新增個品種，其中新增44個，修訂個，修訂57個個藥典三部內(nèi)容藥典三部內(nèi)容凡 例正 文索 引附 錄通用檢測方法檢測方法制劑通則通 則生物制品術(shù)語及名詞解釋中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室制造名稱及編排引文索引生物制品生產(chǎn)、檢定、貯藏、運輸?shù)雀鳝h(huán)節(jié)所相應(yīng)的規(guī)程生物藥品或制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中文索引生物樣品檢測的特點生物樣品檢測的特點標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容和方法差異大標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容和方法差異大全過程質(zhì)量控制全過程質(zhì)量控制生物活性檢查和效價（含量）生物活性檢查和效價（

6、含量）測定測定嚴(yán)格的安全性檢查嚴(yán)格的安全性檢查中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室3 鑒別試驗鑒別試驗取樣鑒別檢查報告含量測定中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室 一、鑒別一、鑒別鑒別方法鑒別方法原理原理舉例舉例 理化鑒別法理化鑒別法化學(xué)鑒別化學(xué)鑒別采用現(xiàn)象明顯、反應(yīng)迅速的顯色反采用現(xiàn)象明顯、反應(yīng)迅速的顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等應(yīng)、沉淀反應(yīng)等雙縮脲反雙縮脲反映映物理鑒別物理鑒別利用其物理特征特性進行鑒別。利用其物理特征特性進行鑒別。UV、HPLC 生化鑒別法生化鑒別法免疫法免疫法利用特征性強的免疫反應(yīng)。利用特征性強的免疫反應(yīng)。免疫雙擴免疫雙擴散法散法酶法酶法利用酶類制

7、劑的特征酶學(xué)性質(zhì)利用酶類制劑的特征酶學(xué)性質(zhì)鏈激酶鏈激酶電泳法電泳法利用蛋白質(zhì)等帶電的性質(zhì)利用蛋白質(zhì)等帶電的性質(zhì)瓊脂糖凝瓊脂糖凝膠電泳膠電泳 生物鑒別法生物鑒別法利用生物試驗進行鑒別利用生物試驗進行鑒別家兔驚厥家兔驚厥試驗試驗中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室一、鑒別一、鑒別v 例例1（化學(xué)鑒別）：例如溶菌酶（化學(xué)鑒別）：例如溶菌酶（Lysozyme）的鑒別是利用溶菌酶肽）的鑒別是利用溶菌酶肽鍵在堿性條件下與鍵在堿性條件下與Cu2+絡(luò)合生成有色配絡(luò)合生成有色配位化合物的位化合物的顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)進行的，其方法為進行的，其方法為：取本品約：取本品約2mg，加水，加水2滴使溶解，加

8、滴使溶解，加10氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液5滴與滴與10硫酸銅硫酸銅溶液溶液1滴，混勻后顯紫紅色。滴，混勻后顯紫紅色。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室v 例例2（物理鑒別）：注射用重組人干擾素（物理鑒別）：注射用重組人干擾素原液檢定采用原液檢定采用紫紫外光譜外光譜掃描進行鑒別，規(guī)定最大吸收峰波長應(yīng)為掃描進行鑒別，規(guī)定最大吸收峰波長應(yīng)為2803nm。一、鑒別一、鑒別v 例例3（免疫法）（免疫法） ：人免疫球蛋白采用免疫雙擴散法和免疫：人免疫球蛋白采用免疫雙擴散法和免疫電泳法進行鑒別，免疫雙擴散法中它僅與抗人血清發(fā)生抗電泳法進行鑒別，免疫雙擴散法中它僅與抗人血清發(fā)生抗原抗體反應(yīng)形

9、成免疫復(fù)合物的沉淀線，而抗馬、抗牛、抗原抗體反應(yīng)形成免疫復(fù)合物的沉淀線，而抗馬、抗牛、抗豬及抗羊血清均不產(chǎn)生沉淀線，免疫電泳法中與正常人血豬及抗羊血清均不產(chǎn)生沉淀線，免疫電泳法中與正常人血清比較，主要沉淀線為清比較，主要沉淀線為IgG。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室v 例例4（酶法）（酶法） ：鏈激酶是專屬性強的：鏈激酶是專屬性強的蛋白水解酶，可以激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化蛋白水解酶，可以激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，引起纖維蛋白的溶解，使為纖溶酶，引起纖維蛋白的溶解，使纖維蛋白平板中出現(xiàn)溶圈，作為判斷纖維蛋白平板中出現(xiàn)溶圈，作為判斷指標(biāo)。指標(biāo)。一、鑒別一、鑒別例例5（電泳法）：例如肝

10、素是一個（電泳法）：例如肝素是一個酸性粘多糖，進行瓊脂糖凝膠電酸性粘多糖，進行瓊脂糖凝膠電泳時，向正極方向移動，供試品泳時，向正極方向移動，供試品與肝素標(biāo)準(zhǔn)品進行對照，其移動與肝素標(biāo)準(zhǔn)品進行對照，其移動的位置應(yīng)一致。注射用重組鏈激的位置應(yīng)一致。注射用重組鏈激酶，在等電聚焦電泳時主區(qū)帶明酶，在等電聚焦電泳時主區(qū)帶明顯清晰，可利用等電聚焦電泳得顯清晰，可利用等電聚焦電泳得到的等電點進行鑒別。到的等電點進行鑒別。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室例例6（生物鑒別法）：例如，用家兔驚厥試驗來鑒別胰島素（生物鑒別法）：例如，用家兔驚厥試驗來鑒別胰島素，通過胰島素降血糖作用進行鑒別。當(dāng)計

11、量大時，血糖降，通過胰島素降血糖作用進行鑒別。當(dāng)計量大時，血糖降低致一定水平，家兔發(fā)生驚厥，迅速注射葡萄糖注射液，低致一定水平，家兔發(fā)生驚厥，迅速注射葡萄糖注射液，補充血糖，驚厥停止補充血糖，驚厥停止二、檢查二、檢查一般雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查安全性檢查安全性檢查包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液澄清度、水分及干燥失重等金屬、酸度、溶液澄清度、水分及干燥失重等生物制品中的特殊雜質(zhì)都是生物制品中的特殊雜質(zhì)都是生產(chǎn)、貯藏生產(chǎn)、貯藏中引入中引入的。如藥品純度檢查；多糖類的核酸、蛋白質(zhì)；的。如藥品純度檢查；多糖類的核

12、酸、蛋白質(zhì)；胰蛋白酶的糜蛋白酶等胰蛋白酶的糜蛋白酶等主要包括：熱原檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、異常毒性主要包括：熱原檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、異常毒性檢查、降壓物質(zhì)檢查、無菌檢查、過敏物質(zhì)檢查、檢查、降壓物質(zhì)檢查、無菌檢查、過敏物質(zhì)檢查、外源性外源性DNA殘留量、宿主菌蛋白殘留量等。殘留量、宿主菌蛋白殘留量等。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室二、檢查二、檢查 例7（特殊雜質(zhì)檢查）：重組人甲狀旁腺激素rh-PTH(1-34)的HPLC純度檢測法色譜條件 流動相A為0.1%TFA的水溶液；B為0.1%TFA乙腈-水（95 5）。流速1 ml/min。采用Symmetry ORC18色譜柱

13、（5m，4.6 150mm）；檢測波長214nm；柱溫40；進樣量20l。梯度程序 為040min線性程序至100%B。結(jié)果結(jié)果 在上述色譜條件下，各雜在上述色譜條件下，各雜質(zhì)與主峰能完全分離。色譜圖質(zhì)與主峰能完全分離。色譜圖見圖見圖12-3。主要可見兩類雜。主要可見兩類雜質(zhì)，即質(zhì)，即rh-PTH(1-34)主峰主峰前出現(xiàn)的雜質(zhì)前出現(xiàn)的雜質(zhì)Z1Z3和主峰和主峰后出現(xiàn)的雜質(zhì)后出現(xiàn)的雜質(zhì)Z4。經(jīng)實驗發(fā)。經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)，Z1Z3為氧化產(chǎn)生的降為氧化產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，解產(chǎn)物，Z4為生產(chǎn)工藝中引為生產(chǎn)工藝中引入的雜質(zhì)。入的雜質(zhì)。中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室三、含量測定三、含量測定生

14、物制品的含量表示方法通常有兩種百分含量百分含量例如蛋白質(zhì)總量的測定例如蛋白質(zhì)總量的測定生物效價或生物效價或酶活力單位酶活力單位例如對酶類、蛋白類等生物制品，除蛋白例如對酶類、蛋白類等生物制品，除蛋白質(zhì)含量測定外，還進行活性測定質(zhì)含量測定外，還進行活性測定常見的效價測定方法包括免疫學(xué)測常見的效價測定方法包括免疫學(xué)測定法、細(xì)胞病變抑制法、酶法等定法、細(xì)胞病變抑制法、酶法等中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室四、四、 鑒別試驗鑒別試驗 鑒別就是依據(jù)生物制品的生物學(xué)特點，利用免疫學(xué)等方法來判斷與確證產(chǎn)品的真?zhèn)巍Ｃ阜治龇ㄒc：1.以酶為工具,目的在于測定其他物質(zhì)的含量2.被測物可以是底物

15、、輔酶、活化劑或抑制劑等3.分析步驟： a.選擇適宜的工具酶 b.測定酶反應(yīng) c.校正曲線 d.測定被測物的濃度或量中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室四、四、 鑒別試驗鑒別試驗分析基礎(chǔ)：基于抗原和抗體特征性反應(yīng)分析基礎(chǔ)：基于抗原和抗體特征性反應(yīng)特點：選擇性高，檢測限極低特點：選擇性高，檢測限極低用途：臨床、生物制藥和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域用途：臨床、生物制藥和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室（一）免疫鑒定法（一）免疫鑒定法1. 免疫斑點法免疫斑點法原理原理1.供試品與特異性抗體結(jié)供試品與特異性抗體結(jié)合合2.上述抗體再與酶標(biāo)抗體上述抗體再與酶標(biāo)抗體性能

16、特異性結(jié)合，性能特異性結(jié)合，3.通過酶學(xué)反應(yīng)的顯色，通過酶學(xué)反應(yīng)的顯色，對供試品的抗原特異性進對供試品的抗原特異性進行檢查。行檢查。321中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室免疫斑點法檢查步驟免疫斑點法檢查步驟預(yù)處理預(yù)處理上樣上樣干燥干燥1h1h，浸入封閉液浸入封閉液1h1h用緩沖液洗滌用緩沖液洗滌加入供試品抗體，加入供試品抗體，過夜過夜生物素標(biāo)記的第二抗體，生物素標(biāo)記的第二抗體，放置放置40min用緩沖液洗滌用緩沖液洗滌親和素溶液和生物素標(biāo)記的親和素溶液和生物素標(biāo)記的辣根或氧化物酶，放置辣根或氧化物酶，放置1h顯色顯色用緩沖液洗滌用緩沖液洗滌中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科

17、大學(xué)藥物分析教研室（一）免疫鑒定法（一）免疫鑒定法 2.免疫印跡法免疫印跡法檢查法檢查法 1）SDS-PAGE進行電泳后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上進行電泳后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上2）進行免疫斑點法的操作）進行免疫斑點法的操作中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室（一）免疫鑒定法（一）免疫鑒定法 3. 免疫雙擴散法免疫雙擴散法原理：原理：1.在打有特定小孔的瓊脂板在打有特定小孔的瓊脂板上，在相鄰的兩孔內(nèi)分別加入抗上，在相鄰的兩孔內(nèi)分別加入抗原和抗體原和抗體 2.相對應(yīng)的抗原、抗體在適相對應(yīng)的抗原、抗體在適宜的濃度、比例下，相互擴散宜的濃度、比例下，相互擴散 3.一定時間后，在抗原和抗一定時

18、間后，在抗原和抗體孔之間形成免疫復(fù)合物的沉淀體孔之間形成免疫復(fù)合物的沉淀線。線。 中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室 （一）免疫鑒定法（一）免疫鑒定法 4. 免疫電泳法免疫電泳法原理：原理：1.通過瓊脂凝膠電泳將供通過瓊脂凝膠電泳將供試品中的各蛋白抗原組分分試品中的各蛋白抗原組分分成不同的區(qū)帶成不同的區(qū)帶 2. 各抗原與相應(yīng)的抗體各抗原與相應(yīng)的抗體進行雙向免疫擴散進行雙向免疫擴散 3.當(dāng)兩者的比例合適時當(dāng)兩者的比例合適時形成可見的沉淀弧。形成可見的沉淀弧。 中國藥科大學(xué)藥物分析教研室中國藥科大學(xué)藥物分析教研室4 生物制品檢查內(nèi)容生物制品檢查內(nèi)容v 生物制品的質(zhì)量檢定包括安全性

19、和效力檢定兩方面：生物制品的質(zhì)量檢定包括安全性和效力檢定兩方面：前者包括毒性試驗、防腐劑試驗、熱原質(zhì)試驗和有關(guān)安全前者包括毒性試驗、防腐劑試驗、熱原質(zhì)試驗和有關(guān)安全性的特殊試驗等；后者包括濃度測定（含菌數(shù)或純化抗原性的特殊試驗等；后者包括濃度測定（含菌數(shù)或純化抗原量）、活菌率或病毒滴度測定、動物保護率試驗、免疫抗量）、活菌率或病毒滴度測定、動物保護率試驗、免疫抗體滴度測定和穩(wěn)定性試驗等。體滴度測定和穩(wěn)定性試驗等。v 將生物制品的質(zhì)量檢測大致分為理化檢定、將生物制品的質(zhì)量檢測大致分為理化檢定、安全檢定和效力檢定三個方面安全檢定和效力檢定三個方面 ：v（一）物理性狀的檢查（一）物理性狀的檢查 1外

20、觀外觀 2真空度及溶解速率真空度及溶解速率 3裝量裝量 v（二）蛋白質(zhì)含量測定（二）蛋白質(zhì)含量測定v（三）防腐劑和滅活劑含量測定（三）防腐劑和滅活劑含量測定v（四）純度檢查（四）純度檢查v（五）相對分子質(zhì)量或分子大小測定（五）相對分子質(zhì)量或分子大小測定v（六）其他（六）其他v（七）安全檢查（七）安全檢查 1安全檢查對象安全檢查對象 2安全檢查內(nèi)容安全檢查內(nèi)容 （1）過敏性物質(zhì)的檢查）過敏性物質(zhì)的檢查 （2） 殺菌、滅活和脫毒檢查殺菌、滅活和脫毒檢查 （3）殘余毒力和毒性物質(zhì)的檢查）殘余毒力和毒性物質(zhì)的檢查 （4）外源性污染的檢查）外源性污染的檢查 v（八）生物制品的效力測定（八）生物制品的效力

21、測定v（九）雜質(zhì)檢查（九）雜質(zhì)檢查 1宿主細(xì)胞（菌）蛋白殘留量的檢查宿主細(xì)胞（菌）蛋白殘留量的檢查 2外源外源DNA殘留量的檢查殘留量的檢查 3殘余抗生素的檢查殘余抗生素的檢查 4產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的檢查產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的檢查 Company Logo（一）注射用重組人干擾素（一）注射用重組人干擾素1b質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 注射用重組人干擾素注射用重組人干擾素1bZhusheyong Chongzu Ren Ganraosu 1bRecombinant Human Interferon 1b for Injection 本品系由含有高效表達人干擾素本品系由含有高效表達人干擾素1b基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離

22、基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后凍干制成。含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素。和高度純化后凍干制成。含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素。1 基本要求基本要求 生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原料及輔料、水、器具、動物等應(yīng)符合生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原料及輔料、水、器具、動物等應(yīng)符合“凡例凡例”的有關(guān)要求。的有關(guān)要求。2 制造制造2.1 工程菌菌種工程菌菌種2.1.3 菌種檢定菌種檢定 主種子批和工作種子批的菌種應(yīng)進行以下各項全面檢定主種子批和工作種子批的菌種應(yīng)進行以下各項全面檢定2.1.3.1 劃種劃種LB瓊脂平板瓊脂平板 應(yīng)呈典型大腸桿菌集落形態(tài)，無其他雜菌生長應(yīng)呈典型大腸桿菌集落形態(tài)，無其他雜菌生長2.1

23、.3.2 染色鏡檢染色鏡檢 應(yīng)為典型的革蘭陰性桿菌。應(yīng)為典型的革蘭陰性桿菌。5 生物制品質(zhì)量控制示例生物制品質(zhì)量控制示例. Company Logo2.1.3.3 對抗生素的抗性對抗生素的抗性 應(yīng)與原始菌種相符。應(yīng)與原始菌種相符。2.1.3.4 電鏡檢查（工作種子批可免做）電鏡檢查（工作種子批可免做） 應(yīng)為典型大腸桿菌形態(tài)，無應(yīng)為典型大腸桿菌形態(tài)，無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。2.1.3.5 生化反應(yīng)生化反應(yīng) 應(yīng)符合大腸桿菌生物學(xué)性狀。應(yīng)符合大腸桿菌生物學(xué)性狀。2.1.3.6干擾素表達量干擾素表達量 在搖床中培養(yǎng)，應(yīng)不低于原始菌種的表達量。在搖床中培

24、養(yǎng)，應(yīng)不低于原始菌種的表達量。2.1.3.7 表達的干擾素型別表達的干擾素型別 應(yīng)用應(yīng)用1b型干擾素參考血清做中和試驗，型干擾素參考血清做中和試驗，證明型別無誤。證明型別無誤。2.1.3.8 質(zhì)粒檢查質(zhì)粒檢查 該質(zhì)粒的酶切圖譜應(yīng)與原始重組質(zhì)粒相符。該質(zhì)粒的酶切圖譜應(yīng)與原始重組質(zhì)粒相符。2.2 原液原液2.2.1 種子液制備種子液制備 將檢定合格的工作種子批菌種接種于適宜培養(yǎng)基（可將檢定合格的工作種子批菌種接種于適宜培養(yǎng)基（可含適量抗生素）中培養(yǎng)，供發(fā)酵罐含適量抗生素）中培養(yǎng)，供發(fā)酵罐接種用。接種用。2.2.2 發(fā)酵用培養(yǎng)基發(fā)酵用培養(yǎng)基 采用適宜的不含任何抗生素的培養(yǎng)基。采用適宜的不含任何抗生素

25、的培養(yǎng)基。2.2.3 種子液接種及發(fā)酵培養(yǎng)。種子液接種及發(fā)酵培養(yǎng)。2.2.3.1 在滅菌培養(yǎng)基中接種適量種子液。在滅菌培養(yǎng)基中接種適量種子液。Company Logo2.2.3.2 在適宜的溫度下進行發(fā)酵，應(yīng)根據(jù)經(jīng)批準(zhǔn)的發(fā)酵工藝進行，并確在適宜的溫度下進行發(fā)酵，應(yīng)根據(jù)經(jīng)批準(zhǔn)的發(fā)酵工藝進行，并確定相應(yīng)的發(fā)酵條件，如溫度、定相應(yīng)的發(fā)酵條件，如溫度、pH值、溶氧、補料、發(fā)酵時間等。發(fā)酵值、溶氧、補料、發(fā)酵時間等。發(fā)酵液應(yīng)定期進行質(zhì)粒丟失率檢查（附錄液應(yīng)定期進行質(zhì)粒丟失率檢查（附錄G）.2.2.4 發(fā)酵液處理發(fā)酵液處理 用適宜的方法收集處理菌體。用適宜的方法收集處理菌體。2.2.5 初步純化初步純化

26、采用經(jīng)批準(zhǔn)的純化工藝進行初步純化，使其純度達到規(guī)采用經(jīng)批準(zhǔn)的純化工藝進行初步純化，使其純度達到規(guī)定的要求。定的要求。2.2.6 高度純化高度純化 經(jīng)初步純化后，采用經(jīng)批準(zhǔn)的工藝進行高度純化，使其經(jīng)初步純化后，采用經(jīng)批準(zhǔn)的工藝進行高度純化，使其達到達到3.1項要求，即為干擾素原液。加入適宜穩(wěn)定劑，除菌過濾后于溫項要求，即為干擾素原液。加入適宜穩(wěn)定劑，除菌過濾后于溫度下保存，并規(guī)定其有效期。度下保存，并規(guī)定其有效期。2.2.7 原液檢定原液檢定 按按3.1項進行。項進行。2.3 半成品半成品2.3.1 配制與除菌配制與除菌2.3.1.1 稀釋液配制稀釋液配制 按經(jīng)批準(zhǔn)的配方配制稀釋液。配制后應(yīng)立即

27、用于稀釋按經(jīng)批準(zhǔn)的配方配制稀釋液。配制后應(yīng)立即用于稀釋2.3.1.2 稀釋與除菌稀釋與除菌 將檢定合格加穩(wěn)定劑的干擾素原液用將檢定合格加穩(wěn)定劑的干擾素原液用2.3.1.1項稀釋液項稀釋液稀釋至所需濃度。除菌過濾后即為半成品，保存于稀釋至所需濃度。除菌過濾后即為半成品，保存于28。2.3.2 半成品檢定半成品檢定 按按3.2項進行。項進行。Company Logo2.4 成品成品2.4.1 分批分批 應(yīng)符合應(yīng)符合“生物制品分批規(guī)程生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。規(guī)定。2.4.2 分裝及凍干分裝及凍干 應(yīng)符合應(yīng)符合“生物制品分裝和凍干規(guī)程生物制品分裝和凍干規(guī)程”規(guī)定。規(guī)定。2.4.3 規(guī)格規(guī)格 應(yīng)為經(jīng)批準(zhǔn)

28、的規(guī)格。應(yīng)為經(jīng)批準(zhǔn)的規(guī)格。2.4.4 包裝包裝 應(yīng)符合應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。規(guī)定。3 檢定檢定3.1 原液檢定原液檢定3.1.1 生物學(xué)活性生物學(xué)活性 依法測定（附錄依法測定（附錄C）。）。3.1.2 蛋白質(zhì)測定（附錄蛋白質(zhì)測定（附錄B）。色譜柱以適合分離分子質(zhì)量為）。色譜柱以適合分離分子質(zhì)量為560kD蛋蛋白質(zhì)的色譜用含量白質(zhì)的色譜用含量 依法測定（附錄依法測定（附錄 B第二法）。第二法）。3.1.3 比活性比活性 為生物學(xué)活性與蛋白質(zhì)含量之比，每為生物學(xué)活性與蛋白質(zhì)含量之比，每1mg蛋白質(zhì)應(yīng)不低于蛋白質(zhì)應(yīng)不低于1.0107IU。3.1.4 純度純度3.1.4.1

29、電泳法電泳法 依法測定（附錄依法測定（附錄C）。用非還原型）。用非還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠電泳法，分離膠濃度為電泳法，分離膠濃度為15，加樣量應(yīng)不低于，加樣量應(yīng)不低于10g（考馬斯亮藍（考馬斯亮藍R250染色法）或染色法）或5g（銀染法）。經(jīng)掃描儀掃描，純度應(yīng)不低于（銀染法）。經(jīng)掃描儀掃描，純度應(yīng)不低于95.0。Company Logo3.1.4.2 高效液相色譜法高效液相色譜法 依法凝膠為填充劑依法凝膠為填充劑;流動相為流動相為0.1mol/L磷酸磷酸鹽鹽-0.1mol/L氯化鈉緩沖液，氯化鈉緩沖液，pH7.0；上樣量不低于；上樣量不低于20g，于波長，于波長280nm處檢

30、測，以干擾素色譜峰計算理論板數(shù)應(yīng)不低于處檢測，以干擾素色譜峰計算理論板數(shù)應(yīng)不低于1000。按面。按面積歸一化法計算，干擾素主峰面積應(yīng)不低于總面積的積歸一化法計算，干擾素主峰面積應(yīng)不低于總面積的95.0。3.1.5 分子量分子量 依法測定（附錄依法測定（附錄C）。用還原型）。用還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳法，分離膠濃度為法，分離膠濃度為15，加樣量應(yīng)不低于，加樣量應(yīng)不低于1.0g，制品的分子質(zhì)量應(yīng)為，制品的分子質(zhì)量應(yīng)為19.4kD1.94kD。3.1.6 外源性外源性DNA殘留量殘留量 每每1次人用劑量應(yīng)不高于次人用劑量應(yīng)不高于10ng（附錄（附錄B）。）。3.1.7 鼠鼠

31、IgG殘留量殘留量 如采用單克隆抗體親和色譜法純化，應(yīng)進行本項檢定如采用單克隆抗體親和色譜法純化，應(yīng)進行本項檢定。每。每1次人用劑量鼠次人用劑量鼠IgG殘留量應(yīng)不高于殘留量應(yīng)不高于100ng（附錄（附錄 L）。）。3.1.8 宿主菌蛋白殘留量宿主菌蛋白殘留量 應(yīng)不高于總蛋白質(zhì)的應(yīng)不高于總蛋白質(zhì)的0.10(附錄附錄C)。3.1.9 殘余抗生素活性殘余抗生素活性 依法測定（附錄依法測定（附錄 A），不應(yīng)有殘余氨卞西林或其），不應(yīng)有殘余氨卞西林或其他抗生素活性。他抗生素活性。3.1.10細(xì)菌內(nèi)毒素檢查細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 每每30萬萬IU應(yīng)小于應(yīng)小于10EU（附錄（附錄 E凝膠限量試驗）凝膠限量試驗）。3

32、.1.11 等電點等電點 主區(qū)帶應(yīng)為主區(qū)帶應(yīng)為4.06.5（附錄（附錄D）。）。Company Logo3.1.12 紫外光譜掃描紫外光譜掃描 最大吸收峰波長應(yīng)為最大吸收峰波長應(yīng)為278nm3nm（附錄（附錄A）。）。3.1.13 肽圖（至少每半年測定肽圖（至少每半年測定1次）次） 依法測定（附錄依法測定（附錄 E），應(yīng)與對照），應(yīng)與對照品圖形一致。品圖形一致。3.1.14 N-末端氨基酸序列（至少每年測定末端氨基酸序列（至少每年測定1次）次） 用氨基酸序列分析儀用氨基酸序列分析儀測定，測定，N-末端序列應(yīng)為：末端序列應(yīng)為：Cys-Asp-Leu-Pro-Glu-Thr-His-Ser-Leu-Asp-Asn-Arg-Arg-Thr-Leu。3.2 半成品檢定半成品檢定3.2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 每每30萬萬IU應(yīng)小于應(yīng)小于10EU(附錄附錄 E凝膠限量試驗?zāi)z限量試驗)。3.2.2 無菌檢查無菌檢查 依法檢查（附錄依法檢查（附錄 A），應(yīng)符合規(guī)定。），應(yīng)符合規(guī)定。3.3 成品檢定成品檢定除水分測定外，應(yīng)按標(biāo)示量加入滅菌注射用水，復(fù)溶后進行其余各項檢定除水分測定外，應(yīng)按標(biāo)示量加入滅菌注射用水，復(fù)溶后進行其余各項檢定3.3.1 鑒別試驗鑒別試驗 按免疫印跡法（附錄按免疫印跡法（附錄 A）或免疫斑點法（附錄）或免疫斑點