實驗五、簡單染色與革蘭氏染色ppt課件

1、福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院一一 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? 1、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的操作技術(shù)；、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的操作技術(shù)；2 2、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；、掌握細(xì)菌單染色和革蘭氏染色的方法；3 3、初步掌握無菌操作技術(shù)；、初步掌握無菌操作技術(shù)；4 4、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。、掌握革蘭氏染色反應(yīng)原理、操作步驟和意義。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院二二 實驗原理實驗原理簡單染色簡單染色常用堿性染料進行簡單染色，這是因為在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在

2、電離時，其分子的染色部分帶正電荷，因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色。經(jīng)染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。常用作簡單染色的染料有美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。 當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時，細(xì)菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別染色法。 革蘭氏染色法所以能將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰革蘭氏染色法所以能將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，是由這兩類細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的。革蘭氏性，是由這兩類

3、細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的。革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚、陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚、類脂質(zhì)含量低，用乙醇類脂質(zhì)含量低，用乙醇( (或丙酮或丙酮) )脫色時細(xì)胞壁脫水、使肽聚糖脫色時細(xì)胞壁脫水、使肽聚糖層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，透性降低，從而使結(jié)晶紫層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，透性降低，從而使結(jié)晶紫- -碘的復(fù)合碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑的藍紫色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄、的藍紫色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄、類脂含

4、量高，所以當(dāng)脫色處理時，類脂質(zhì)被乙醇類脂含量高，所以當(dāng)脫色處理時，類脂質(zhì)被乙醇( (或丙酮或丙酮) )溶解，溶解，細(xì)胞壁透性增大，使結(jié)晶紫細(xì)胞壁透性增大，使結(jié)晶紫- -碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來，碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色。用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色。 二二 實驗原理實驗原理革蘭氏染色革蘭氏染色 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院三 實驗材料n培養(yǎng)培養(yǎng)2424小時的大腸桿菌小時的大腸桿菌E.coliE.coli），金黃色葡萄），金黃色葡萄球菌球菌; ;n每個小組從土壤中分離得到的菌種；每個小組從土壤中分離得到的菌種；n載玻片

5、載玻片接種環(huán)接種環(huán)酒精燈及火柴酒精燈及火柴結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫染色液碘液碘液9595乙醇乙醇番紅染色液番紅染色液吸水紙吸水紙顯微顯微鏡。鏡。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院四四 實驗步驟實驗步驟簡單染色制片制片染色染色水洗水洗枯燥枯燥鏡檢鏡檢 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（1 1制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、自然干燥、加熱固制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、自然干燥、加熱固 定；定；（2 2染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加復(fù)染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加復(fù)紅染色紅染色1-2min1-2min。（3 3水洗：用水洗去涂片上的染色液。水洗：用水

6、洗去涂片上的染色液。（4 4枯燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸枯燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。干。（5 5鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇扮R檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入后，將高倍鏡轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。注意無菌注意無菌操作操作 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院制片制片初染結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫1min）水洗水洗媒染碘液媒染碘液1min）水水洗洗脫色乙醇

7、脫色乙醇20-30s）水洗水洗復(fù)染番紅復(fù)染番紅2min）水洗水洗枯燥枯燥察看察看革蘭氏染色 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實驗完畢后的處理實驗完畢后的處理將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許乙醚用擦鏡紙沾少許乙醚-乙醇混合液將鏡頭擦乙醇混合液將鏡頭擦2-3次。次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭

8、。將顯微鏡小心輕拿，按號放入向一個方向擦拭。將顯微鏡小心輕拿，按號放入顯微鏡柜中。顯微鏡柜中。觀察后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈，放觀察后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈，放入回收容器內(nèi)。入回收容器內(nèi)。 福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院五 本卷須知1 1、載玻片要潔凈無油跡。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂、載玻片要潔凈無油跡。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂片要均勻，菌膜宜薄。片要均勻，菌膜宜薄。2 2、革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。、革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。3 3、染色過程中勿使染色液干涸。、染色過程中勿使染色液干涸。4 4、選用幼齡的細(xì)菌。、選用幼齡的細(xì)菌。5 5、用接種環(huán)將菌體與染液混合時不要劇烈涂抹，以免破壞細(xì)胞；、用接種環(huán)將菌體與染液混合時不要劇烈涂抹，以免破壞細(xì)胞；6 6、滴加染液要適中，否則用蓋玻片覆蓋時，染液過多會溢出，過少、滴加染液要適中，否則用蓋玻片覆蓋時，染液過多會溢出，過少會產(chǎn)生大量氣泡；會產(chǎn)生大量氣泡；7 7、蓋玻片要緩慢傾斜覆