化學(xué)化工分析方法選擇-研發(fā)分析方法開發(fā)進(jìn)階

1、化學(xué)化工分析方法選擇-研發(fā)分析方法開發(fā)進(jìn)階第一章衍生的方法與應(yīng)用我們?cè)谌粘５臉悠贩治鲋薪?jīng)常會(huì)遇到一些有機(jī)合成反應(yīng)中控時(shí)樣品不易氣化、熱分解、易聚合、又或者是見水分解等等而此時(shí)由于條件的有限而又不能做化學(xué)分析來進(jìn)行中控，這時(shí)我們總是想到一個(gè)熟悉而又陌生的方法-衍生。熟悉是因?yàn)槲覀兂３Ｂ犝f這個(gè)辦法，而陌生是因?yàn)槲覀冋娴暮茈y找到比較系統(tǒng)、全面的衍生方面的資料或者是方法介紹。我們常說的衍生，其實(shí)我給的定義就是我們?nèi)藶榈募恿艘徊椒磻?yīng)，使我們不能直接分析的樣品轉(zhuǎn)化為我們能夠應(yīng)用已有的條件來分析。雖然是只加了一步反應(yīng)，能夠分析了，但由此引入的問題也很多，下面逐一的介紹一下。衍生法種類衍生法種類繁多，用于色譜

2、試樣處理的衍生法主要有：硅烷化法、成肪或腺法、酯化法、?；?、鹵化法、環(huán)化法及無機(jī)試樣衍生法。分析工作者可根據(jù)待測(cè)試樣中所含官能團(tuán)的種類選擇適宜的衍生方法。一般地，硅烷化衍生方法適于羥基化合物，也可用于含竣基、航基、胺基等官能團(tuán)的化合物。酯化衍生法主要用于含竣基的化合物試樣，所得到的衍生物一般為甲酯、乙酯、丙酯或丁酯，其中最常見的是甲酯化合物。?；苌ㄖ饕糜诎坊孽；苌镏苽?，也可用于含羥基、航基等化合物的衍生處理。鹵化衍生法可由不同的鹵化方法分析含不飽和鍵化合物、羥基、竣基、?；衔?。羥基化合物在適當(dāng)條件下可與醍化試劑作用衍生成醍。?；衔锟蛇m用于成肪或成腺的衍生試劑處理后作色譜分

3、析。環(huán)化法可用于分析含兩個(gè)或兩個(gè)以上官能團(tuán)的有機(jī)物。水、無機(jī)氣體、無機(jī)酸、金屬元素等也可通過衍生試劑作衍生處理后作色譜分析。我們最常用衍生化反應(yīng)可歸三類：硅烷化，烷基化和?；磻?yīng)。衍生法的作用1,提高化合物熱穩(wěn)定性。(特別是包含極性官能團(tuán)的化合物)。2,調(diào)整化合物的揮發(fā)性。3,在分子中引入適合檢測(cè)器的標(biāo)記。氣相色譜中化學(xué)衍生的作用主要是：1改善樣品揮發(fā)性，2改善樣品的峰形，3改善樣品的分離，4提高化合物的檢測(cè)靈敏度。氣相分析中包含有活潑H原子的基團(tuán)，如：-COOH,-OH,-SH,和NH等化合物，因?yàn)樗鼈冓呄蛴谛纬煞肿娱g氫鍵，從而影響基團(tuán)的化合物原有的相互作用及穩(wěn)定性。HPLC中常用的衍生方法

4、為了增強(qiáng)紫外吸收，熒光及電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)性能。最常用的衍生方法有：(1)硅烷化。硅烷基衍生物廣泛用于氣相，是用三甲基硅烷取代酸、醇、硫醇、胺、酰按、烯醇酮醛等，分子中活潑H而形成。三氟官能團(tuán)常用于提高電子捕獲檢測(cè)的靈敏度。衍生方法使氨基酸的定量和定性分析容易。(2)烷基化。是活潑H被脂肪族或芳基(如節(jié)基)所取代。這可用硅烷化衍生試劑對(duì)含酸性氫的化合物進(jìn)行改性，如竣酸和酚。將其能轉(zhuǎn)化為酯。烷基化也可用來制備醍類、硫醍、硫酯、N-烷基胺、酰胺和磺胺。雖然竣酸硅烷化衍生物易形成但化合物穩(wěn)定性差。(3)?；？赏ㄟ^竣酸或竣酸衍生物反應(yīng)將包含活潑H的化合物轉(zhuǎn)化為酯、硫酯和酰胺。全笊代衍生物有助于解析硅烷

5、化組分的質(zhì)譜圖。O-烷基羥胺用來制備醛和酮的O-烷基腸。(4)增強(qiáng)檢測(cè)性能的試劑。當(dāng)紫處吸收光譜254nm檢測(cè)靈敏度為0或很低時(shí)通過在被測(cè)分子中接入在254nm有高吸光性的發(fā)色團(tuán)可增強(qiáng)檢測(cè)性能所有這些試劑均使還原性電化學(xué)檢測(cè)或熒光檢測(cè)容易。衍生物制備:同于絕大部分藥物是具備高沸點(diǎn)或高熔點(diǎn)的化合物。并且常帶有羥基、竣基、氨基或酰胺基等極性基因，給直接進(jìn)行GC分析帶來很大困難，往往拖尾嚴(yán)重，或被吸，或熱解，而行不出正確結(jié)果。為了克服這些困難要，可先制成各類衍生物后再進(jìn)行分析。這樣做的目的是：1、使原來不揮發(fā)的或揮發(fā)性差的藥物變成一種新的、具有一定揮發(fā)性的化合物，即降低其熔點(diǎn)或沸點(diǎn)。2、避免對(duì)熱不穩(wěn)

6、定化合物的分解，增加穩(wěn)定性。3、降低極性，減小拖尾和吸附。4、改變化合物的理化性質(zhì)以改進(jìn)分離。5、產(chǎn)生特殊性質(zhì)，如引入氟原子，增加電子捕獲能力，提高檢測(cè)靈敏度等。如硅烷化試齊ijTMCS（硅烷化試齊1JBSTFA,BSTFA+TMCS,硅烷化試齊1JDMDCS二甲基二氯硅烷）硅烷化作用是指將硅烷基引入到分子中，一般是取代活性氫（如：羥基hydroxyl,竣基carboxylicacid,胺amine,硫醇thiol,磷酸鹽phosphate?；钚詺浔还柰榛〈蠼档土嘶衔锏臉O性，減少了氫鍵束縛。因此所形成的硅烷化衍生物更容易揮發(fā)。同時(shí)，由于含活性氫的反應(yīng)位點(diǎn)數(shù)目減少，化合物的穩(wěn)定性也得以加強(qiáng)

7、。衍生化試劑分類：（一）三甲基硅烷化試劑利用三甲基硅烷化試劑（TMS）所制成的衍生物對(duì)熱穩(wěn)定，色譜系統(tǒng)對(duì)其吸附性小，反應(yīng)條件緩和，所以是制血衍生物的最重要的途徑之一。TMS化試劑主要用于含羥基化合物的衍生物制備。常用的試劑有：三甲基氯硅烷（TMCS）、六甲基二硅胺（HMDS）、雙（三甲硅烷基）乙酰胺（BSN）、三甲基烷基咪噪（TSIM）、以及雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFM）等。TMCS、HMDS是廣泛使用的TMS化試劑，可以個(gè)別地單獨(dú)使用，也可二者同時(shí)使用。單獨(dú)使用時(shí)，需加少許胺，以使反應(yīng)完全。R-OH+（CH3）3SICL+胺（CH3）3SIOR+胺.HCL單獨(dú)使用HMDS時(shí)，應(yīng)痕

8、量酸作為接觸劑。2R-OH+(CH3)3SINHSI(CH3)32(CH3)3SIOR+NH3當(dāng)兩者同時(shí)使用時(shí)3R-OH+(CH3)3SICL+(CH3)3SINHSI(CH3)33(CH3)3SIOR+NH4CL實(shí)際應(yīng)用中，常二者合用作為TMS試劑O-SiBSA,NSiH或TSIM,1優(yōu)點(diǎn)在于操作比較簡(jiǎn)便，只要將樣品直接溶于其中即可。在生物樣品分析中，常將提取物毗咤中，再加BSA。O-SiF|1IFNSiHBSTFA,f與BSA類似（二）甲酯化試劑甲酯化試劑主要用于具有竣基的化合物，二者作用后生成相應(yīng)的甲酯，進(jìn)行GC分析。常用的甲酯化試劑為甲醇制HCL（或H2SO4）液或重氮甲烷乙醍液。1、

9、與甲醇制HCL液回流2小時(shí)。HCLRCOOH+CH3OHRCOOHCH3+H2O2、在0c下與重氮甲烷的乙醍溶液反應(yīng)RCOOH+H2c=N+=N-RCOOCH3+N2以重氮甲烷為試劑的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)快速，但試劑制備比較困難，有爆炸性。（三）鹵素試劑用于衍生物制備的鹵素試劑大都是含氟化合物。由于氟的親電性強(qiáng)，對(duì)ECD顯示很高靈敏度，可檢測(cè)pg數(shù)量級(jí)的樣品。常用的試劑有三氟乙酊（TFAA）、五氟丙酊（PFPA）、五氟丁酊（PFBA）、七氟丁酊（HFBA），以及甲基雙三氟乙酰胺（MBTFA）。這些試劑主要用于含氨基、羥基化合物的衍生物制備。現(xiàn)以TFAA為例列出反應(yīng)式如下：R-NH2+（CF3CO）2O-

10、R-NHCOCF3+CF3COOHR-OH+（CF3CO）2O-R-OCOCF3+CF3COOH操作時(shí)，先將樣品四氫味喃中，然后加TFAA試劑及毗咤。放置幾分鐘即可進(jìn)樣。MBTFA的優(yōu)點(diǎn)是可用試劑直接溶解樣品，TFA化極易，而且不生成反應(yīng)副產(chǎn)物-酸。2R-NH2+（CF3CO）2N-CH3-2R-NHCOCF3+H2N.CH.3除以上最常用的3種衍生物外不有玻基的污化等。硅烷化試劑與樣品化合物的衍生反應(yīng)是通過硅烷基取代羥基，竣基，航基，氨基及亞氨基的活性氫而進(jìn)行的。衍生反應(yīng)的產(chǎn)物是硅醍或硅酯。幾乎所有含這些活性氫的化合物都能與硅烷化試劑發(fā)生衍生反應(yīng)，其反應(yīng)活性順序：醇酚竣酸胺酰胺。硅烷化衍生試

11、劑包括三甲硅烷化衍生試劑，如六甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷、N-甲基-N-三甲硅基乙酰胺、N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺、N,O-雙(三甲硅基)乙酰胺、N,O-雙(三甲硅基)三氟乙酰胺、N-三甲硅基咪噪等；鹵代硅烷基衍生試劑，如氯甲基二甲硅基氯硅烷、碘甲基二甲硅基氯硅烷、氯甲基二甲硅基二硅氮烷、碘甲基二甲硅基二硅氮烷、五氟苯基二甲硅基氯硅烷、特丁基五氟苯基甲硅氯硅烷、五氟苯基異丙基甲硅基氯硅烷等。烷基化衍生試劑制備烷基化衍生物的反應(yīng)是親核取代反應(yīng)，衍生試劑的烷基取代化合物的酸性氫。衍生反應(yīng)得到的產(chǎn)物是醍、酯、硫醍、硫酯、N-烷基胺、N-烷基酰胺。烷基化衍生試劑包括重氮烷炫類，如重氮甲烷等；烷基

12、鹵化物類，如五氟節(jié)基澳、碘乙睛等；季胺鹽類，如氟化二甲基苯基節(jié)基胺，氫氧化三甲基苯基胺；醇類，如1,1,1,3,3,3-六氟異丙醇等；烷基氯甲酸酯，如三氯乙基氯甲酸酯等。酰基化衍生試劑?；苌磻?yīng)的實(shí)質(zhì)是衍生試劑的酰基取代極性化合物中的活性氫。該類試劑可用于醇、酚、硫醇、胺、酰胺、磺酰胺等化合物的衍生。酰基化試劑主要有酰鹵，如4-乙酯基六氟丁酰氯、全氟辛酰氯等；酸酊，如乙酸酊等；?；湓肱c酰胺，如全氟乙酰咪噪、N-甲基雙三氟乙酰胺。其他衍生試劑形成環(huán)狀衍生物試劑，如硼酸和順式1,2-二醇反應(yīng)生成的環(huán)狀硼酸酯、含?；幕衔锱c合適的二胺生成的雜環(huán)衍生物等；手性衍生試劑，如S-(-)-七氟丁酰脯

13、氨酰氯、R-(+)-2-甲氧基-2-苯基-3,3,3-三氟丙酰氯等衍生化的好處:?提高色譜分辨率-增加氣化-減少分子間氫鍵作用-分離結(jié)構(gòu)相似化合物。?提高質(zhì)譜特性-更高的質(zhì)量碎片-更高的S/N（信噪比）-更多的特征質(zhì)量-增加分子離子的豐度/靈敏度。?增加一些化合物的熱穩(wěn)定性-減少熱降解-更高的溫度適于快速分析。?提升儀器和實(shí)驗(yàn)室的效率-可減少因峰拖尾所造成的重復(fù)進(jìn)樣和試驗(yàn)-更易于樣品鑒定和定量-容易操作-惰性衍生副產(chǎn)物不會(huì)對(duì)毛細(xì)管柱的性能產(chǎn)生影響。衍生化試劑使用密封的小瓶包裝，并用氮?dú)獗Ｗo(hù)以避免活性的喪失。試劑與濕氣接觸會(huì)顯著降低活性，因此要避免試劑與空氣和濕氣接觸。在不使用時(shí)使小瓶保持密封狀

14、態(tài)。移液管、玻璃儀器、小瓶等試驗(yàn)器具在衍生之前一定要不含水或醇類物質(zhì)，這對(duì)衍生是否成功至關(guān)重要。SELECTRA-SIL?硅烷化試齊甲硅烷基衍生物是最常用的化學(xué)衍生試劑，尤其對(duì)氣相色譜而言。甲硅烷基衍生物需要活性氫，比如酸、醇類、硫醇、胺、氨基化合物、酮和醛中的氫，該氫會(huì)被三甲基硅烷酯或三丁基二甲基硅烷取代。?三甲基硅烷的強(qiáng)度與BSA相同。?可用于適合BSA的同類化合物，并生成相同的衍生物。?與BSA無氟衍生物相比，可增加反應(yīng)副產(chǎn)物的揮發(fā)性。三甲基硅烷的給予強(qiáng)度與BSA相同。?可用于適合BSA的同類化合物，并生成相同的衍生物。?三甲基氯硅烷（TMCS）被添加到衍生化酰胺中，許多仲胺和受到空間阻

15、礙的羥基不會(huì)與BSTFA單獨(dú)發(fā)生反應(yīng)。?與BSA無氟衍生物相比，可增加反應(yīng)副產(chǎn)物的揮發(fā)性三甲基硅烷加合物具有與BSA和BSTFA相同的給予強(qiáng)度。?TMS衍生物大部分都是可揮發(fā)的。?常常在GC的溶劑峰前沿出現(xiàn)。三甲基硅烷加合物具有與BSA和BSTFA相同的給予強(qiáng)度。?TMS衍生物大部分都是可揮發(fā)的。?常常在GC的溶劑峰前沿出現(xiàn)。?TMCS添加劑有助于酰胺，仲胺和受阻羥基的衍生化?？捎糜诹u基、竣基、硫醇、伯胺和仲胺的衍生?衍生物較TMS衍生物具有更高的穩(wěn)定性。?反應(yīng)副產(chǎn)物為中性且易揮發(fā)。1.1衍生化試劑中文名稱CASNO醋酸酊七氟丁酸酊336-59-4甲基二(三氟乙酰685-27-8胺五氟丙酸酊3

16、56-42-3酰化試劑縮寫英文名稱AceticAnhydrideHFBAHeptafluorobutyricanhydrideMBTFAN-Methylbis(trifluoroacetamide)PFPAPentafluoropropionicanhydrideTFAATrifluoroacetic三氟乙酸酊407-25-01-三氟乙酸酰咪噪1546-79-8CASNO60858-95-9102832-11-136805-97-71188-33-64637-24-5TFAI烷基化試劑縮寫DiazaldDiazald-N-methyl-13CDiazald-N-methyl-13C-N-met

17、hyl-d3DMF-DBADMF-DEAanhydride1-(Trifluoroacetyl)imidazole英文名稱N-Methyl-N-nitroso-p-toluenesulffonamideN-Methyl-13C-N-nitroso-p-toluenesulffonamideN-Methyl-13C-d3-N-nitroso-p-toluenesulffonamideN,N-Dimethylformamidedi-tert-butylacetalN,N-Dimethylformamidediethylacetal中文名稱N-甲基-N-亞硝基-對(duì)-甲苯磺酰胺N-甲基"-N

18、-亞硝基-對(duì)-甲苯磺酰胺N-甲基-13C-d3-N-亞硝基-對(duì)-甲苯磺酰胺N,N-二甲基甲酰胺-二特丁基乙縮醛N,N-二甲基甲酰胺-二乙基乙縮醛DMF-DMAN,N-DimethylformN,N-二甲基甲酰6006-65-1amidedimethyl胺-二甲基乙縮醛acetalDMF-DPAN,N-DimethylformN,N-二甲基甲酰77-76-9amidedipropyl胺-二正丙基乙縮acetal醛DMP2,2-Dimethoxypropane2,2-二甲氧基丙烷EsterateMin1mlpyridineMNNG1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidin

19、eNBBn-ButylboronicacidPFBBrPentafluorobenzylbromideHexaoxacyclooctadecaneo-MethoxyamineHCl吐匕咤70-25-71-甲基-3-硝基-1-4426-47-5亞硝基月瓜正-丁基硼酸1765-40-8五氟澳化苯4426-47-5六惡環(huán)十八烷鄰-甲氧胺HClTMAHTrimethylanilinium三甲基苯胺1765-40-8硅烷化試劑縮寫英文名稱中文名稱CASNOBSAN,O,Bis(trimethylsiyl)acetamide雙(三甲基硅烷基)乙酰胺10416-59-8BSTFABis(trimethyls

20、ilyl)trifluoroacetamide雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺25561-30-2DMDCSDimethyldichlorosilane二甲基二氯硅烷75-78-5HMDS1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazane1,1,1,3,3,3,-六甲基二硅烷999-97-3MTBSTFAN-(ter-Butyldimethylsilyl)-N-methyltrifluoroacetamideN-(特丁基二甲基硅烷基)-N-甲基三氟乙酰胺77377-52-7TBDMCSt-Butyldimethylchlorosilane特丁基二甲基氯硅烷18162-48-6TFAT

21、rifluoroaceticacid三氟乙酸76-05-1TMCSTrimethylchlorosilane三甲基氯硅烷75-77-4TMSDEATrimethylsilyldiethylamine三甲基硅烷基二乙胺996-50-9TMSITrimethylsilylimidazole三甲基硅烷咪噪18156-74-6柱前衍生化的條件：色譜中柱前衍生化使用的衍生化反應(yīng)應(yīng)滿足以下幾個(gè)條件：1、反應(yīng)迅速、定量的進(jìn)行、反應(yīng)重復(fù)性好，反應(yīng)條件不苛刻，容易操作。2、反應(yīng)的選擇性高，最好只與目標(biāo)化合物反應(yīng)，即反應(yīng)要有專一性。3、衍生化反應(yīng)產(chǎn)物只有一種，反應(yīng)的副產(chǎn)物和衍生化試劑應(yīng)不干擾目標(biāo)化物的分離與檢測(cè)。

22、4、衍生化試劑應(yīng)方便易得，通用性好。總之，柱前衍生化可以擴(kuò)大色御用分析的應(yīng)用范圍，使色譜分析的結(jié)果能更令人滿意，所以柱前衍生化是色譜樣品一個(gè)重要方法。下面通過實(shí)例說明：第一節(jié)氣相色譜中常用的柱前衍生化方法一、硅烷化衍生化方法硅烷化衍生化方法是氣相色譜樣品應(yīng)用最多的方法，它是得用質(zhì)子性化合物（如醇，酚，酸，胺，硫醇等）與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物，一般反應(yīng)式為：RsSi-X+H-R'RsSi-R,+HX硅烷化反應(yīng)一般在數(shù)分鐘內(nèi)即可完成。常用的硅甲基化試劑見表：常用的硅甲基化試劑試劑名稱N-三甲基硅乙酰胺N-甲基-N-三甲基硅乙酰胺N-三甲基硅環(huán)丙二胺氨N-三甲基硅二乙基胺三甲

23、基氯硅烷二甲基氯硅烷氯甲基二甲基氯硅烷六甲基二硅胺N,O-雙三甲基硅三氟乙酰胺三甲基硅咪噪化學(xué)式CH3CONHSI(CH)3CF3CONCH3SI(CH)3(CH3)3SI-NCH=NCH=CH(CH3)3SIN(C2H5)2(CH3)3SICLH(CH3)2SICL(CH2CL)(CH3)2SICL(CH3)3SINHSI(CH3)3(CH3)3SIN=C-OSI(CH3)3ICF3(CH3)3SI-N=N能進(jìn)行硅烷化的化合物反應(yīng)性一般為：醇酚竣酸胺酰胺，反應(yīng)活性還受空間位阻的影響，其醇的反應(yīng)活性為伯醇仲醇叔醇，胺的反應(yīng)活性為：伯胺仲胺酯人生化方法有機(jī)酸由于極性較強(qiáng)，易產(chǎn)生嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象，而

24、且大多數(shù)有機(jī)酸揮發(fā)性差，熱穩(wěn)定性也較低。因此，許多有機(jī)酸（特別是長(zhǎng)碳鏈的有機(jī)酸）在進(jìn)行氣相色譜分析之前都要衍生為相應(yīng)的酯。常用的酯化方法有以下一些。1、甲醇法有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯催化劑RCOOH+CH3OHRCOOHCH3+H2O加熱當(dāng)催化劑使用H2SO4,HCL時(shí)，需要回流，反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)。若用三氟化硼作分催化劑，反應(yīng)可在室溫下完成，通常是將三氟化硼通入甲醇中配制酯化劑，然后再進(jìn)行酯化反應(yīng)。2、重氮甲烷法重氮甲烷可與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，放出氮?dú)釸COOH+CH2N2RCOOCH3+N2此方法簡(jiǎn)便有效，反應(yīng)速度快，轉(zhuǎn)化率高，很少有副反應(yīng)，

25、不引入雜質(zhì)，但反應(yīng)要在非水介質(zhì)中進(jìn)行。反應(yīng)條件雖溫和，但重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒（致癌），制備和使用時(shí)要特別小心。常溫下酚羥基可與重氮甲烷緩慢反應(yīng)，但在0c以下時(shí)可避免酚羥基反應(yīng)。3、三氟乙酸酊法在三氟乙酸酊的存在下有機(jī)酸和醇可以反應(yīng)生成酯RCOOH+R'OHRCOOR'+H2O此法特別適于空間位阻較大的有機(jī)酸和醇或酚的酯化。4、其他酚化方法為了提高方法的靈敏度和選擇性，有時(shí)需要制備甲酯以外的酚，這些酯化方法有的類似于甲酯化反應(yīng)，如以重氮乙烷、重氮丙烷、重氮甲苯代替氮甲烷，可制得相應(yīng)的酯。而且這些試劑穩(wěn)定性好、爆炸性小。用BF3的丙醇、丁醇或戊醇溶液與有機(jī)酸反應(yīng)，也可制備

26、相應(yīng)的丙酯、丁酯或戊酯。3、 ?；苌椒；芙档土u基、氨基、航基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰的拖尾），并能提高這些化合物的揮發(fā)性，也能增加某些易氧化化合物（如兒茶酚胺）的穩(wěn)定性。當(dāng)?；瘯r(shí)引入含有鹵離子的?；鶗r(shí)，還可提高使用電子捕獲檢測(cè)器。當(dāng)?；瘯r(shí)入含有鹵離子的酰基時(shí)，還可提高使用電子捕獲檢測(cè)器（ECD）的靈敏度。常用的?；噭┯絮｛u、酸酊和反應(yīng)活性的?；铮ㄈ缫宜徇湓耄浞磻?yīng)為RNH2RNHCOR'IIROH+（RCO）2O（或RCOX）ROCOR'+H2O（或HX）IIRSHRSCOR'常用的?；椒ㄓ幸韵乱恍?、乙?；?biāo)準(zhǔn)的乙?；ㄊ菍悠啡?/p>

27、于氯仿（5ml）中，與0.5ml乙酸在50c反應(yīng)2-6小時(shí)，真空除去剩余試劑。還可以乙酸鈉為堿性催化劑，以乙酸酊為乙?；噭┻M(jìn)行乙酰化反應(yīng)，用于糖類的分析。毗咤、三乙胺、甲基咪噪等也可作為堿性催化劑。乙?；磻?yīng)通常在非水介質(zhì)中進(jìn)行，但胺類和酚類化合物乙酰化時(shí)可在水溶液中進(jìn)行。2、多氟酰化法常用的多氟?；噭┦侨阴＃═FA）五氟丙酰（PFP）和七氟丁酰（HFB）,其反應(yīng)活性是TFA>PFP>HFB。TFA和PFP的衍生物揮發(fā)性較強(qiáng)，而GFB的衍生物ECD靈敏度高。多氟?；磻?yīng)的時(shí)間除取決于多氟?；噭┑幕钚酝?，還取決于目標(biāo)化合物的活性。如：麻黃堿和偽麻黃堿及其同系物與三氟乙酸酊（

28、TFAA）在60c時(shí)5min可完成反應(yīng)：而哌可酸，脯氨酸，谷氨酸，丫-氨基丁酸的甲酯與HFBA的反應(yīng)需在120c時(shí)20分鐘完成。多數(shù)情況氟?；磻?yīng)不需溶劑，但也有些需在溶劑中進(jìn)行。此外，有時(shí)還需加堿性催化劑。如胺和酚的多氟?；Ｒ员綖槿軇野窞榇呋瘎惶穷惖娜阴；窃谌燃淄槿軇┲?，以毗咤為催化劑進(jìn)行的。4、 鹵化衍生化方法在目標(biāo)化合物中引入鹵原子后可使用ECD檢測(cè)器，提高檢測(cè)的靈敏度（降低檢測(cè)限），同時(shí)也可改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性，常用的鹵化衍生化方法有以下一些。1、鹵素法用鹵素直接作為衍生化試劑品，鹵素的作用是加成或取代RCH=CH2+CL2RCHCLCH2CLRC=CR+BR2RCBR

29、=CBRRRCBR2-CBR2RCL苯氯苯+對(duì)二氯苯FECL2,PCH3COOHCLCH2COOHH2、鹵化氫法常用HCL和HBR為衍生化試劑與不飽和鏈發(fā)生加成反應(yīng)或與羥基發(fā)生轉(zhuǎn)換反應(yīng)HXRCH=CH2RCHXCH3HXRCH2OHRCH2X+H2OZNCL2HXRCH-CHR'RCHOHCHXR/O（X=CL,BR）法NBS是選擇性很強(qiáng)鹵化衍生試劑,3、N-澳代丁二酰亞胺（NBS）可使烯丙位的氫原子發(fā)生澳代反應(yīng)IIIC=C-C-|HNBS|C-C-C-BRNBS甲苯澳節(jié)衍生化方法還可些金屬化合物成為可揮發(fā)性化合物，用于分析，在些就不作詳細(xì)介紹了。第二節(jié)液相色譜中常用的柱前衍生化方法1

30、、紫外衍生化反應(yīng)液相色譜使用最多的是紫外檢測(cè)器，為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能補(bǔ)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，往往是通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)，這些衍生物可被紫外檢測(cè)器檢測(cè)。常用紫外衍生基團(tuán)基團(tuán)名稱摩爾吸收系數(shù)最大吸收波長(zhǎng)（入max/nm）2-4-二硝基苯>10000苯甲基254200對(duì)硝基苯甲基26562003.5-二硝基苯甲基>10000苯甲酸酯230<1000對(duì)甲苯酰2365400對(duì)氯苯甲酸酯2366300254>10000對(duì)甲氧基苯甲酸酯26216000苯甲酰甲基250約10000對(duì)澳苯甲酰甲基26018000“蔡甲酰甲基2481

31、2000大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來自經(jīng)典的光度分析和有機(jī)定量分析，新的衍生化反應(yīng)和衍生化試劑是隨液相色譜發(fā)展，這些反應(yīng)的原理都來自有機(jī)合成，所以就要求操作者對(duì)有機(jī)合成有所了解。但是，由于柱前衍生化是為色譜分析準(zhǔn)備樣品，處理樣品的量（mg級(jí)）和所用的反應(yīng)器皿（小型和微型）又不同于常量的有機(jī)合成，而是類似于近年來發(fā)展的微量有機(jī)合成。紫外衍生化反應(yīng)要選擇反應(yīng)產(chǎn)率高，重復(fù)性好的反應(yīng)。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果干擾下一步的色譜分離和檢測(cè)，面在色譜進(jìn)樣前要進(jìn)行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對(duì)紫外吸收的影響。下面分別介紹一些常用的反應(yīng)。1、苯甲酰化反應(yīng)苯甲酰氯及其彳濘生物對(duì)硝基苯甲酰氯，3.5-二硝基苯甲酰氯和對(duì)甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng)，生成強(qiáng)紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物，反應(yīng)如下:苯甲酰氯+醇苯酯+HCL過量試劑可以通過水解除去，反應(yīng)產(chǎn)物可用有機(jī)溶劑提取后直接進(jìn)樣。2、2.4-二硝基氟代苯（DNFB）的反應(yīng)DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率低，但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng)，生成強(qiáng)紫外苯胺類衍生物。3、苯基異硫富酸酯（PITC）的反應(yīng)PITC可與氨基酸反應(yīng)，生成苯基己內(nèi)酰硫月尿衍生物-PTH氨基酸苯基異富酸與醇類反應(yīng)生成苯基甲酸酯。4、苯基磺酰氯的反應(yīng)苯基磺酰氯可與伯胺和仲