微生物的利用

1、微生物的利用復(fù)習(xí)講義【知識診斷】1 .微生物是結(jié)構(gòu)簡單、形體微小的單細胞、多細胞或沒有細胞結(jié)構(gòu)的生物，如原核生物（菌、菌、菌）、某些真菌（菌、菌）和病毒。2 .許多抗生素的來源于菌和菌。實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)與分離1 .大腸桿菌的特性：是革蘭氏性（異化作用類型）的腸道桿菌，屬生態(tài)系統(tǒng)中的者。大腸桿菌在腸道中一般對人害；但也有些菌株是有害的，可侵襲并產(chǎn)生。任何大腸桿菌進入人的系統(tǒng),都會對人體產(chǎn)生危害。培養(yǎng)的最適溫度約為C。以的方式進行繁殖，約min分裂一次。2 .大腸桿菌的應(yīng)用：在基因工程技術(shù)中被廣泛的應(yīng)用，它的是最常用的運載體，它也是基因工程中常用的。如人粒細胞一巨噬細胞集落刺激因子就是利用大腸

2、桿菌工程菌生產(chǎn)的。3 .細菌的擴大培養(yǎng)（擴增）：使用培養(yǎng)基（通用的細菌培養(yǎng)基）。4 .細菌的分離：使用培養(yǎng)基。分離后，一個菌體會形成一個。的分離是消除的通用方法，也是用于篩選的最簡便方法之一。分離的方法包括法和法。劃線分離：劃線分離使用的器具是,劃線過程中逐漸減少，部分的細菌間距離加大，彼此分開。劃線過程中只蘸取次菌液，每次劃線好后要并后繼續(xù)劃線。每次劃線不要出現(xiàn)線條重疊，第二次及隨后劃線操作從上一次劃線的末端開始，不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。涂布分離：涂布分離使用的器具是。涂布分離需要先將培養(yǎng)的菌液稀釋，通常稀釋倍。然后取mL稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用涂布在培養(yǎng)基表

3、面，然后進行培養(yǎng)，在適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)下，可培養(yǎng)得到相互分開的菌落，通常以每個培養(yǎng)皿中有個以內(nèi)的單菌落最為合適。劃線或涂布后的培養(yǎng)基應(yīng)置于適宜溫度的中培養(yǎng)12-24h,可觀察到。兩種分離方法中，操作相對簡單的是法；單菌落更易分開的是法。劃線法也是在固體培養(yǎng)基上進行接種的常用方法；涂布法還可用于菌種計數(shù)，獲得的單菌落數(shù)往往比菌液中微生物實際數(shù)量。5 .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是微生物生存的和。成分：由于“喜葷，喜素”，故通常配制細菌培養(yǎng)基要用和來配制，還要加入一定量的氯化鈉，以;霉菌培養(yǎng)基則一般用配制或即可。pH:細菌通常要求在環(huán)境中生長，霉菌則要求環(huán)境，因此，在制備培養(yǎng)基時需調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿度。培養(yǎng)基的分類

4、：a.按物理狀態(tài)分為固體或半固態(tài)培養(yǎng)基（菌種的純化分離、鑒定、計數(shù)、菌種保存）、液體培養(yǎng)基（工業(yè)生產(chǎn)、擴大培養(yǎng)）。b.按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入或減除某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，將所需要的微生物的選出；鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。6 .無菌操作：器皿：無菌操作的首要條件是。培養(yǎng)皿、三角瓶、取樣器的頭、移液管、三角刮刀、接種環(huán)、鐐子等通常用法滅菌。滅菌前各種用品均需用一或包好，實驗中用白棉花不能是棉（易,容易引起）。在C壓力下滅菌15min,然后將實驗用

5、具放入C的烘箱中烘干。超凈臺：打開燈和，滅菌30min。無超凈臺時，可制作一個雙手在內(nèi)操作，又可在外觀看，并有燈滅菌的箱子。培養(yǎng)基：加入培養(yǎng)基的三角瓶、試管也需在C下滅菌15min;但如果培養(yǎng)基中有葡萄糖，為防止其,要用壓力（C）滅菌min;有些不能加熱的化合物如尿素，只能用過濾，該器具使用前也要經(jīng)過滅菌，用過之后需用1mol/L的浸泡，并,再用蒸儲水洗至,干燥后保存。如何知道培養(yǎng)基滅菌是否充分?。其他無菌操作：a.將培養(yǎng)基加到各種器皿中時，不能將培養(yǎng)基沾到器皿的上，否則易發(fā)生。因此，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基時必須用。b.接種環(huán)在每次使用前需進行滅菌。倒平板、接種、劃線分離等操作都應(yīng)在旁進行。c.實驗者的雙

6、手、超凈臺的桌面可用擦拭消毒。d.三角瓶和試管塞子制作的好壞是控制發(fā)生的關(guān)鍵，一般要求棉塞放入三角瓶或試管口后，周圍沒有,容易，但用手提著棉塞時三角瓶或試管不能。如果有條件，可以用代替棉塞。7 .大腸桿菌的培養(yǎng)與分離操作步驟：配制培養(yǎng)基：50mL的LB液體培養(yǎng)基：0.5g,0.25g,0.5g,加50mL。若配制LB固體培養(yǎng)基，則再加入1g。滅菌：將裝有培養(yǎng)基的三角瓶加上,將培養(yǎng)皿用包好，放入滅菌鍋內(nèi)，1kg壓力滅菌15min。如使用高壓鍋滅菌，則后開始計時滅菌15min。滅菌后，待高壓鍋或滅菌鍋時（即沒有壓力了）再打開鍋蓋。倒平板：待固體培養(yǎng)基冷卻到C時（手放上還有些熱的時候），在旁將三角瓶

7、中的培養(yǎng)基（10-12mL）倒入培養(yǎng)皿中，每倒入一個培養(yǎng)皿后立即將其置于位置，并輕輕晃動，使培養(yǎng)基鋪滿底部，待凝固后即形成。擴大培養(yǎng)：用接種環(huán)將中的菌體接種到三角瓶中的培養(yǎng)基中。三角瓶置于C每分鐘轉(zhuǎn)的上振蕩培養(yǎng)12h。注意：接種前，應(yīng)先將在酒精燈火焰上燒紅的接種環(huán)以達到冷卻的目的，再取菌體。劃線分離：接種環(huán)蘸取菌液，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，接種環(huán)只在菌液中蘸菌液次，劃線后蓋好培養(yǎng)皿。最后，將培養(yǎng)皿,在C的中培養(yǎng)1224h后，可看到在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的,表明菌體己被分離。恒溫培養(yǎng)過程中將培養(yǎng)皿倒置的原因是。保存菌種：將恒溫培養(yǎng)后培養(yǎng)皿中的用接種環(huán)取出，再用法接種在上，C培養(yǎng)24h后，放

8、在C冰箱中保存。實驗完成后，接觸過細菌的器皿應(yīng)。實驗2分離以尿素為氮源的微生物1 .土壤環(huán)境中有一些細菌含有,它們可以通過降解月尿（尿素）作為其生長的,在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上有利于。尿素分解的反應(yīng)式：。2 .本實驗需設(shè)置對照，即以為對照組，以為實驗組。實驗組的菌落數(shù)目對照組的菌落數(shù)目。3 .本實驗用法分離細菌，實驗前要玻璃刮刀浸泡在中進行消毒，使用時要先放在酒精燈火焰上，待刮刀上,再使用。4 .培養(yǎng)基：全營養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基：0.25g,0.12g,0.25g,0.5g,水25mL;尿素固體培養(yǎng)基：0.025g,0.12g,0.12gK2HPO4,0.5g,0.25g,水15mL;加上后滅菌，待冷卻至C時

9、，加入通過過濾的10mL溶液，搖動，混勻后待用。兩種培養(yǎng)基配置時均使用瓊脂糖代替瓊脂來作為凝固劑，原因是在尿素固體培養(yǎng)基中加入指示劑，如有含月尿酶細菌存在，這些細菌會向外分泌月尿酶，使培養(yǎng)基中的尿素分解后產(chǎn)生，使培養(yǎng)基PH，菌落周圍出現(xiàn),并可根據(jù)其大小判斷細菌分解尿素的能力強弱。5 .實驗用的土樣一般從的地方取得。6 .制備細菌懸液：在條件下，將1g土樣加到有99mL的三角瓶中，振蕩10min,即成10-2土壤稀釋液，依此法制備其他濃度土壤稀釋液。取樣時，盡量只取。7 .與全營養(yǎng)培養(yǎng)基相比，尿素培養(yǎng)基上菌落要少得多，這表明。8 .尿素固體培養(yǎng)基上形成的菌落(是/否)一定都能產(chǎn)生月尿酶?！就卣褂?xùn)

10、練】1. (2018年綠色評價聯(lián)盟)經(jīng)人工誘變獲得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌體自身不能合成天冬氨酸，必須從外界環(huán)境中獲取天冬氨酸才能生長繁殖。下圖是科研人員利用影印法”篩選天冬氨酸缺陷型菌株的部分過程(注：基本培養(yǎng)基中不含氨基酸，完全培養(yǎng)基中含所有種類的氨基酸)?；卮鹣铝袉栴}：(1)過程接種時必需使用的工具是;待測培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是(填基本”或完全”)培養(yǎng)基。(2)過程是將印在同一塊絲絨布上的菌落，先后轉(zhuǎn)印至兩個不同的平板上。該過程應(yīng)該先轉(zhuǎn)印到培養(yǎng)基上，原因是(3)經(jīng)過程，完全培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落A和菌落B中，不可能含天冬氨酸缺陷型菌株的是菌落；為了進一步鑒定篩選到的菌株確實是天冬氨酸缺陷型菌株，

11、科研人員又制備了甲、乙兩個平板，這兩個平板培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的差異是c(4)下列對上述影印法”篩選冬氨酸缺陷型菌株過程的敘述，錯誤的是A.過程接種前還需對菌液進行梯度稀釋，每次接種時取菌液0.1mLB.過程、中菌落培養(yǎng)時應(yīng)將平板倒置并放在28c恒溫培養(yǎng)箱中C.過程絲絨布在兩個培養(yǎng)基上覆蓋的方向和角度可不必相同D.影印和接種等操作均最好在超凈臺的酒精燈火焰旁進行2. (2018年3月，稽陽卷)生物技術(shù)實踐的實驗中，需對微生物進行一定的處理，請回答下列相關(guān)問題：(1)在含哺乳動物排泄物的土壤中有較多含月尿酶的細菌，在無菌條件下，將土木與混合，制成不同稀釋度的細胞懸液，進行涂布分離。制備尿素為氮源的培

12、養(yǎng)基平板時，下列操作不是必須的是A.高壓蒸汽滅菌法B.過濾滅菌C.對蒸儲水滅菌D.加瓊脂糖(2)用葡萄制作葡萄酒時，放入發(fā)酵瓶前的酵母懸液的制作方法是：用將適量干酵母溶解成糊狀；加入極少量蔗糖，目的是(3)用果酒制果醋時，一定體積的的酒水混合物和醋化醋桿菌附著在鋸末上，發(fā)酵瓶中幾乎沒有游離的液體存在，通入空氣并發(fā)酵約48h后，會流出酸性液體，原因是(請用反應(yīng)式表示)(4)大腸桿菌、醋化醋桿菌進行擴大培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中相同的成分是蛋白月東、酵母提取物和,都用搖床振搖培養(yǎng)的目的是3.炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。對炭疽病疑似患者，可通過甲圖所示鑒定炭疽桿菌的實驗進行確診，其中實驗組中的噬菌體能特異性地

13、侵染炭疽桿菌。對釉1加入等量,制片，依在0生理金水。/*3s七，孫時照可，接并也”/里磕&、主螂缺牛.較水泥制翻梃觸身齊金、。制1洌睛情©，酬)醇油)5玩而Jo甲(1)若要從炭疽病疑似患者體內(nèi)分離出炭疽桿菌，可將患者皮膚膿胞滲出物稀釋后滴于培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀涂勻,該接種方法稱為。乙圖所示的四種菌落分布圖中，該接種方法不能得到的是。(2)制備甲圖中的液體培養(yǎng)基時需采取法滅菌。接種可疑菌后，需將三角瓶置于35c下的搖床上培養(yǎng)24小時，可疑菌會大量繁殖，液體培養(yǎng)基變渾濁。(3)甲圖中，對照組與實驗組試管同時培養(yǎng)6小時后，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對照組(高/低)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。此判斷的依4.(2018年浙江省十校聯(lián)考)回答與微生物的培養(yǎng)和利用有關(guān)的問題：(1)微生物在試管中培養(yǎng)時通常加棉塞，周圍沒有皺褶和縫隙，容易拔出，但用手提著