無菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查標準操作規(guī)程

1、無菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查標準操作規(guī)程目的：建立無菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查標準操作規(guī)程。范圍：適用于無菌檢查使用培養(yǎng)基的適用性檢查。依據(jù)：中國藥典2015年版藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010年修訂中國藥品檢驗標準操作規(guī)程2010年版責任：QC化驗員對實施本規(guī)程負責。內(nèi)容:1、概要：無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應符合培養(yǎng)基的無菌檢查及靈敏度檢查要求。本檢查可在供試品的檢查前或與供試品的檢查同時進行。2、材料及設備2.1 生化培養(yǎng)箱2.2 生物安全柜2.3 中國濁度標準管（由中國藥品生物制品檢定所提供）2.4 滅菌試管、滅菌注射器2.5 0.9%無菌氯化鈉溶液2.6 0.

2、05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%氯化鈉至100ml，混勻，滅菌即可。3、無菌檢查培養(yǎng)基的適用性檢查3.1無菌性檢查取新鮮配制滅菌的培養(yǎng)基各5瓶，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置2025，培養(yǎng)14天，應無菌生長。3.2靈敏度檢查菌種培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus C

3、MCC(B) 26003 銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104 枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis CMCC(B) 63501 生孢梭菌Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941 白色念珠菌Candida albicans CMCC(F) 98001 黑曲霉Aspergillus niger CMCC(F) 980033.2.2菌液制備3.2.2.1 金黃色葡萄球菌菌懸液制備3.2.2.1.1 取金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上， 3035培養(yǎng)1824小時，取新鮮傳代菌種

4、一支待用。取一支滅菌中試管，加入3ml 0.9%無菌氯化鈉溶液，把新鮮傳代菌種培養(yǎng)物用接種環(huán)輕輕刮取，在加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的試管壁上研磨，使之成為均勻懸液。3.2.2.1.2 取菌懸液1ml于比濁管中，用0.9%無菌氯化鈉溶液逐步稀釋至與標準管的濁度一致。記錄下所加入的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的量，余下的2ml菌液蓋上試管塞以備用。3.2.2.1.3 打開試管塞，取1ml菌液于中試管中，加入比濁時所需的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的量一致的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌

5、氯化鈉溶液，此時試管中的細菌濃度與標準比濁管相一致。根據(jù)細菌濁度標準菌數(shù)表的菌數(shù)，將菌懸液用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9無菌氯化鈉溶液系列稀釋至不大于100cfu/ml。3.2.2.1.4 銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的菌懸液制備方法同金黃色葡萄球菌。3.2.2.2 生孢梭菌菌懸液的制備取生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基上， 3035培養(yǎng)1824小時， 取一支滅菌中試管，用滅菌注射器吸取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中底部三分之二處的新鮮菌液1ml，加入3mlpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液，輕輕混勻，使之成為均勻懸液。3.2.2.2.2 比濁稀釋方法同

6、金黃色葡萄球菌，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液系列稀釋至不大于100cfu/ml。3.2.2.3 白色念珠菌菌懸液的制備3.2.2.3.1 取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上， 2025培養(yǎng)2448小時，取新鮮傳代菌種一支待用。取一支滅菌中試管，加入3mlpH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液，把新鮮傳代菌種培養(yǎng)物用接種環(huán)輕輕刮取，在加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的試管壁上研磨， 使之成為均勻懸液。3.2.2.3.2 取菌懸液1ml于比濁管中，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩

7、沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液逐步稀釋至與標準管的濁度一致。記錄下所加入的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的量，余下的2ml菌液蓋上試管塞以備用。3.2.2.3.3 打開試管塞，取1ml菌液于中試管中，加入比濁時所需的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液的量一致的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，此時試管中的細菌濃度與標準比濁管相一致。根據(jù)細菌濁度標準菌數(shù)表的菌數(shù)，將菌懸液用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9無菌氯化鈉溶液系列稀釋至不小于100cfu/ml。3.2.2.4 黑曲霉菌懸液的制備3.2.2.4.1 取黑

8、曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025培養(yǎng)57天，取新鮮傳代菌種一支待用，打開試管塞，加入35ml 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，輕輕振蕩，用滅菌注射器吹打，將孢子洗脫。3.2.2.4.2 然后用注射器吸出孢子懸液至無菌中試管內(nèi)，與比濁管進行比濁，并用0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液系列稀釋至小于100cfu/ml。.5.菌懸液制備后若在室溫下放置，應在2小時內(nèi)使用；若保存在28，可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。3.2.3培養(yǎng)基接種及培養(yǎng).1.按硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨培養(yǎng)基固體粉末的處方量配制成液體培養(yǎng)基，并按規(guī)定的溫度和時間進行濕熱滅菌，待用。.2.取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對照，3035培養(yǎng)3天，逐日觀察結(jié)果。.3.取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，2025培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果。結(jié)果判定： .1 空白對照管應無菌生長，若