第三章-轉(zhuǎn)錄前調(diào)控

1、第二章：細胞分化的分子機制第二章：細胞分化的分子機制 -轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄前的調(diào)控轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄前的調(diào)控第一節(jié)：基因表達及調(diào)控的基本原理第一節(jié)：基因表達及調(diào)控的基本原理第二節(jié)：轉(zhuǎn)錄的基本過程及調(diào)控第二節(jié)：轉(zhuǎn)錄的基本過程及調(diào)控Translation基因表達基因表達 ( gene expression) 生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列遺傳信息，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成具有特定的生物學(xué)功能和過程，合成具有特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的全過程。的全過程。 基因表達的調(diào)控基因表達的調(diào)控 機體各種細胞中含有的相同遺傳機體各種細

2、胞中含有的相同遺傳信息信息( (相同的結(jié)構(gòu)基因相同的結(jié)構(gòu)基因) )，根據(jù)機體的，根據(jù)機體的不同發(fā)育階段、不同的組織細胞及不不同發(fā)育階段、不同的組織細胞及不同的功能狀態(tài)，選擇性、程序性地表同的功能狀態(tài)，選擇性、程序性地表達達特定數(shù)量特定數(shù)量的的特定基因特定基因的過程。的過程。 基因表達的調(diào)控因子：基因表達的調(diào)控因子： 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) ( 主要主要 ) 小分子小分子RNA ( 某些環(huán)節(jié)某些環(huán)節(jié) )基因表達的調(diào)控水平v 基因組基因組v 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄v 轉(zhuǎn)錄后轉(zhuǎn)錄后v 翻譯翻譯v 翻譯后翻譯后DNARNA蛋白質(zhì)復(fù)制轉(zhuǎn)錄翻譯逆轉(zhuǎn)錄RNA復(fù)制中心法則中心法則(central dogma)一、原核生物基因表達的特

3、點一、原核生物基因表達的特點 1.1.只有一種只有一種RNARNA聚合酶。聚合酶。RNARNA聚合酶聚合酶用來識別原核細胞的啟動子，催化用來識別原核細胞的啟動子，催化所有所有RNARNA的合成。的合成。2.2.基因表達以操縱子為基本單位?；虮磉_以操縱子為基本單位。原原核基因一般不含內(nèi)含子，基因是連續(xù)核基因一般不含內(nèi)含子，基因是連續(xù)的。原核基因轉(zhuǎn)錄單位多為多順反子。的。原核基因轉(zhuǎn)錄單位多為多順反子。 二、原核生物基因表達的調(diào)控機制二、原核生物基因表達的調(diào)控機制 轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控 轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控 翻譯水平的調(diào)控翻譯水平的調(diào)控 三三、真核細胞的結(jié)構(gòu)真核細胞的結(jié)構(gòu)光鏡下結(jié)構(gòu)

4、光鏡下結(jié)構(gòu)細胞膜細胞膜細胞質(zhì)細胞質(zhì)細胞核細胞核電鏡下結(jié)構(gòu)電鏡下結(jié)構(gòu)膜相結(jié)構(gòu)膜相結(jié)構(gòu)非膜相結(jié)構(gòu)非膜相結(jié)構(gòu)細胞膜細胞膜內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高爾基復(fù)合體高爾基復(fù)合體線粒體線粒體溶酶體溶酶體過氧化氫體過氧化氫體核膜核膜核糖體核糖體中心粒中心粒微管微管微絲微絲中等纖維中等纖維細胞質(zhì)基質(zhì)細胞質(zhì)基質(zhì)核仁核仁染色質(zhì)染色質(zhì)核基質(zhì)核基質(zhì)NoImagel真核生物基因表達調(diào)控的特點和種類真核生物基因表達調(diào)控的特點和種類l真核生物的基因組真核生物的基因組l真核生物真核生物DNADNA水平上的基因表達調(diào)控水平上的基因表達調(diào)控 l真核生物轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達調(diào)控真核生物轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達調(diào)控 l真核基因翻譯水平上的調(diào)控真核基因翻

5、譯水平上的調(diào)控四、真核細胞的表達調(diào)控四、真核細胞的表達調(diào)控真核生物的基因組真核生物的基因組多細胞相同基因組多細胞相同基因組細胞核控制發(fā)育的局限性細胞核控制發(fā)育的局限性基因組重組基因組重組特點特點真核生物真核生物DNADNA水平上的基因表達調(diào)控水平上的基因表達調(diào)控 染色體疏松區(qū)一轉(zhuǎn)錄活躍染色體疏松區(qū)一轉(zhuǎn)錄活躍富富AT 較富較富GC區(qū)一轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)一轉(zhuǎn)錄活躍 DNA甲基化一抑制轉(zhuǎn)錄甲基化一抑制轉(zhuǎn)錄第二節(jié)：轉(zhuǎn)錄的基本過程及調(diào)控第二節(jié)：轉(zhuǎn)錄的基本過程及調(diào)控參與轉(zhuǎn)錄的物質(zhì)參與轉(zhuǎn)錄的物質(zhì)原料原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) : NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板模

6、板:DNA:DNA酶酶: RNA: RNA聚合酶聚合酶其他蛋白質(zhì)因子其他蛋白質(zhì)因子RNA合成方向：合成方向：5 3轉(zhuǎn)錄的不對稱性：轉(zhuǎn)錄的不對稱性：l在在DNADNA分子雙鏈上某一區(qū)段，一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另分子雙鏈上某一區(qū)段，一股鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄一股鏈不轉(zhuǎn)錄 l模板鏈并非永遠在同一條單鏈上。模板鏈并非永遠在同一條單鏈上。編碼鏈與模板鏈與與mRNAmRNA序列相同的那條序列相同的那條DNADNA鏈稱為鏈稱為編碼鏈編碼鏈；將另一條根；將另一條根據(jù)堿基互補原則指導(dǎo)據(jù)堿基互補原則指導(dǎo)mRNAmRNA合成的合成的DNADNA鏈稱為鏈稱為模板鏈模板鏈，也也稱為稱為反義鏈反義鏈或或Cr

7、ick鏈鏈。結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因(structural gene): DNA分子上轉(zhuǎn)錄出分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段的區(qū)段 。GCAGTACATGTC5533DNACGTCATGTACAG編碼鏈模板鏈GCAGUACAUGUCmRNA轉(zhuǎn)錄模板鏈并非永遠在同一條單鏈上模板鏈并非永遠在同一條單鏈上轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向5 5 3 3 3 3 5 5 模板鏈模板鏈編碼鏈編碼鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈模板鏈轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向DNA分子上轉(zhuǎn)錄出分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因。的區(qū)段，稱為結(jié)構(gòu)基因。結(jié)構(gòu)基因：1. RNA1. RNA聚合酶聚合酶（1）原核細胞）原核細胞全酶=核心酶+ 因子因子因子- -特異蛋白質(zhì)因子，特異

8、蛋白質(zhì)因子，能識別能識別DNADNA模板起始位點的特異堿基順序，模板起始位點的特異堿基順序，所以所以 -因子又叫起始因子因子又叫起始因子核心酶核心酶- - 催化單個核苷酸之間形成催化單個核苷酸之間形成3535磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵 1. RNA RNA聚合酶聚合酶真核細胞真核細胞 分為分為 I、II、III三三種種RNA聚合酶聚合酶I：存于核仁中，催化：存于核仁中，催化r RNA前體的合成前體的合成 ；RNA聚合酶聚合酶II：存于核質(zhì)中，催化：存于核質(zhì)中，催化m RNA前體的合成前體的合成 ； RNA聚合酶聚合酶III：存于核質(zhì)中，：存于核質(zhì)中， 催化催化tRNA和和r RNA等小分子量前體的合

9、成等小分子量前體的合成 。（2）真核細胞）真核細胞. .轉(zhuǎn)錄的基本過程轉(zhuǎn)錄的基本過程分起始、延長及終止三個階段分起始、延長及終止三個階段原核生物的轉(zhuǎn)錄過程原核生物的轉(zhuǎn)錄過程轉(zhuǎn)錄起始需解決的問題：轉(zhuǎn)錄起始需解決的問題： RNA聚合酶必須準確地結(jié)合在聚合酶必須準確地結(jié)合在 轉(zhuǎn)錄模板的起始區(qū)域。轉(zhuǎn)錄模板的起始區(qū)域。 DNA雙鏈解開，使其中的一條鏈作為雙鏈解開，使其中的一條鏈作為 轉(zhuǎn)錄的模板。轉(zhuǎn)錄的模板。編碼鏈編碼鏈AACTGTATATTA模板鏈模板鏈TTGACATATAAT35DNA轉(zhuǎn)錄起始點轉(zhuǎn)錄起始點Probnow盒子盒子啟動子啟動子35 10 +1轉(zhuǎn)錄區(qū)轉(zhuǎn)錄區(qū)53RNA轉(zhuǎn)錄起點與新生與新生RNA

10、RNA鏈第一個核甘酸相對應(yīng)鏈第一個核甘酸相對應(yīng)DNADNA鏈上的堿基。通常將鏈上的堿基。通常將mRNAmRNA開始的開始的一個核苷酸定為一個核苷酸定為0 0點點( (即即+1+1) )由此向右常稱為由此向右常稱為下游下游(downstream)(downstream)，其，其核苷酸依次編為正序號；起始點左例稱為核苷酸依次編為正序號；起始點左例稱為上游上游(upstream)(upstream)其核苷酸其核苷酸則依次以負號表示緊接起始點左側(cè)的核昔酸為則依次以負號表示緊接起始點左側(cè)的核昔酸為-1-1。啟動子啟動子(promoter)-(promoter)-能被能被RNARNA聚合酶識別、聚合酶識別

11、、 結(jié)合并啟動基因轉(zhuǎn)錄的一段結(jié)合并啟動基因轉(zhuǎn)錄的一段DNADNA序列序列。 由由因子辨認并且結(jié)合到啟動子上，因子辨認并且結(jié)合到啟動子上，局部解鏈（局部解鏈（10-20bp），），RNA聚合酶聚合酶與與模板模板結(jié)結(jié)合合；在在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng)，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 。 原核生物轉(zhuǎn)錄起始過程原核生物轉(zhuǎn)錄起始過程典型啟動子的結(jié)構(gòu)典型啟動子的結(jié)構(gòu) -35-35 -10 -10 轉(zhuǎn)錄起點轉(zhuǎn)錄起點TTGACA 16-19bp TATAAT 5-9bpTTGACA 16-19bp TATAAT 5-9bp在在-因子存在時，因子存在時，由核心酶

12、催化，以其中的一股由核心酶催化，以其中的一股DNA 單鏈作為模板鏈，單鏈作為模板鏈，以以NTP為原料，按照堿基互補配對的原則，通常是由為原料，按照堿基互補配對的原則，通常是由5ppp嘌呤核苷嘌呤核苷（G 或或A ）開頭向著）開頭向著3延長多核苷酸鏈延長多核苷酸鏈，合成開始后，合成開始后，因子從模板上脫離下來因子從模板上脫離下來（可以重復(fù)利用）。（可以重復(fù)利用）。延長延長 ：核心酶覆蓋雙鏈核心酶覆蓋雙鏈DNADNA和和RNARNA復(fù)合物，向前推進，一邊解開螺旋，復(fù)合物，向前推進，一邊解開螺旋，一邊釋放出新合成的一邊釋放出新合成的RNARNA鏈，鏈，后面已經(jīng)轉(zhuǎn)錄的區(qū)域中分開的后面已經(jīng)轉(zhuǎn)錄的區(qū)域中分

13、開的DNADNA鏈又重新形成雙螺旋。鏈又重新形成雙螺旋。 3 6 5 1 2 決決 定定 哪哪 些些 基基 因因 被被 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 錄錄 1 5 0 6 1 8 催催 化化 功功 能能 1 5 5 6 1 3 結(jié)結(jié) 合合 D N A 模模 板板 7 0 2 6 3 辨辨 認認 起起 始始 點點亞亞 基基 分分 子子 量量功功 能能 3 6 5 1 2 決決 定定 哪哪 些些 基基 因因 被被 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 錄錄 1 5 0 6 1 8 催催 化化 功功 能能 1 5 5 6 1 3 結(jié)結(jié) 合合 D N A 模模 板板 7 0 2 6 3 辨辨 認認 起起 始始 點點亞亞 基基分分 子子 量量功功 能能轉(zhuǎn)錄的

14、終止轉(zhuǎn)錄的終止指指RNARNA聚合酶在聚合酶在DNADNA模板上停頓下來不再前進，模板上停頓下來不再前進，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNARNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來。鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來。 終止子及其結(jié)構(gòu)：終止子及其結(jié)構(gòu)：概概念：念： DNA上提供上提供轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄停止信停止信號號的一段序列的一段序列稱為終稱為終止子止子(terminator)，是一是一個個基因的末端或是一基因的末端或是一個個操操縱縱子的末端的一段特定序列。子的末端的一段特定序列。真核生物的轉(zhuǎn)錄真核生物的轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄起始轉(zhuǎn)錄起始真核生物真核生物啟動子的結(jié)構(gòu)啟動子的結(jié)構(gòu)核心啟動子核心啟動子（core promoter）：）：指保證指保證R

15、NA聚合酶聚合酶轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的、最少的轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括轉(zhuǎn)錄起始位點及轉(zhuǎn)錄起始位點上游序列，包括轉(zhuǎn)錄起始位點及轉(zhuǎn)錄起始位點上游TATA區(qū)。區(qū)。TATA 常在常在-25bp左右，相左右，相當當于原核的于原核的-10序列序列。作用：選擇正確的轉(zhuǎn)錄起始位點，保證精確起始。作用：選擇正確的轉(zhuǎn)錄起始位點，保證精確起始。上游啟動子元件上游啟動子元件（upstream promoter element，UPE）：）：包括包括CAATCAAT盒（盒（CCAATCCAAT）和）和GCGC盒（盒（GGGCGGGGGCGG）等）等CAATCAAT盒：盒：-70 - -80bp-70

16、- -80bp； GCGC盒：盒：-80 - -110bp-80 - -110bp作用：控制轉(zhuǎn)錄起始頻率作用：控制轉(zhuǎn)錄起始頻率。真核細胞轉(zhuǎn)錄的起始步驟比較復(fù)雜，真核細胞轉(zhuǎn)錄的起始步驟比較復(fù)雜，聚合酶聚合酶 II催化轉(zhuǎn)錄的催化轉(zhuǎn)錄的m RNA基因的基因的啟動子在啟動子在-25b p中心處有中心處有-10b p盒盒和和-110b p盒等。盒等。轉(zhuǎn)錄起始點轉(zhuǎn)錄起始點TATA盒盒CAAT盒盒GC盒盒 增強子增強子順式作用元件順式作用元件(cis-acting element)(cis-acting element)轉(zhuǎn)錄起始前的上游區(qū)段轉(zhuǎn)錄起始前的上游區(qū)段 AATAAA切離加尾切離加尾 轉(zhuǎn)錄終止點轉(zhuǎn)錄終

17、止點 修飾點修飾點 外顯子外顯子 翻譯起始點翻譯起始點內(nèi)內(nèi)含含子子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚體八聚體順式作用元件順式作用元件(cis-acting element) :可影響自身基因表達活性的可影響自身基因表達活性的DNA序列。序列。反式作用因子反式作用因子(trans-acting factors):能直接或間接辨認、結(jié)合順式作用元件并反式激活另一基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)。能直接或間接辨認、結(jié)合順式作用元件并反式激活另一基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)。 轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子（(transcriptional factors, TF) :引起基因的轉(zhuǎn)錄引起基因的轉(zhuǎn)錄反式作用因子中，直接或間接結(jié)合反式

18、作用因子中，直接或間接結(jié)合RNA聚合酶的，則稱為轉(zhuǎn)錄因子。聚合酶的，則稱為轉(zhuǎn)錄因子。轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物轉(zhuǎn)錄起始前復(fù)合物(pre-initiation complex, PIC):(pre-initiation complex, PIC): 真核生物真核生物RNA-polRNA-pol不與不與DNADNA分子直接結(jié)合，而需依靠眾多的轉(zhuǎn)錄因子。分子直接結(jié)合，而需依靠眾多的轉(zhuǎn)錄因子。 轉(zhuǎn)錄延長轉(zhuǎn)錄延長真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似，真核生物轉(zhuǎn)錄延長過程與原核生物大致相似，但因有核膜相隔，沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象。但因有核膜相隔，沒有轉(zhuǎn)錄與翻譯同步的現(xiàn)象。 RNA-pol前移前移處處處處都遇上核小體。都遇上核小體。 轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象。轉(zhuǎn)錄延長過程中可以觀察到核小體移位和解聚現(xiàn)象。 核小體核小體:是染色質(zhì)的基本組成單位，為染色質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)，是染色質(zhì)的基本組成單位，為染色質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)， 10nm。球狀組蛋白核心球狀組蛋白核心H4DNA雙螺旋雙螺旋(140-160bp、1.75圈）圈）H3H4H3H2AH2AH2BH