信號肽在基因工程中的應(yīng)用ppt課件

1、信號肽在基因工程中的應(yīng)用什么是信號肽？ 指新合成多肽鏈中用于指導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)移定位的N-末端的氨基酸序列 一般有16-26個氨基酸殘基，其中包括疏水核心區(qū)信號肽的 C 端和 N 端3部分 信號肽似乎沒有嚴(yán)格的專一性。信號肽的功能指導(dǎo)分泌型蛋白在糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成的決定因素是蛋白質(zhì)N端的信號肽。 信號識別顆粒和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的信號識別顆粒的受體等因子協(xié)助完成這一過程。信號肽假說 信號肽假說認(rèn)為，編碼分泌蛋白的mRNA在翻譯時首先合成的是N 末端帶有疏水氨基酸殘基的信號肽，它被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的受體識別并與之相結(jié)合。信號肽經(jīng)由膜中蛋白質(zhì)形成的孔道到達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔，隨即被位于腔表面的信號肽酶水解，由于它的引導(dǎo)，

2、新生的多肽就能夠通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜進(jìn)入腔內(nèi)，最終被分泌到胞外。翻譯結(jié)束后，核糖體亞基解聚、孔道消失，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜又恢復(fù)原先的脂雙層結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的運轉(zhuǎn)離不開信號肽蛋白質(zhì)的運轉(zhuǎn)離不開信號肽跨膜運輸和鑲?cè)肽?nèi)的幾種主要蛋白質(zhì)跨膜運輸和鑲?cè)肽?nèi)的幾種主要蛋白質(zhì) 新生蛋白質(zhì)通過同步轉(zhuǎn)運途徑進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)腔的主要過程 信號肽可使正在翻譯的核糖體附著到RER膜上。在信號肽指引下蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的輸運 核糖體是通過信號肽的功能而附著并合成分泌蛋白的。因此游離的核糖體和膜結(jié)合核糖體之間本身并無差異。 信號肽是作為一種附著到ER膜上的信號識別，此可能通過開始合成出的N-端頭幾個氨基酸的疏水功能。然后蛋白鏈插進(jìn)膜中，信號肽埋在膜

3、中的一種蛋白酶所剪切這時核糖體已完成翻譯，蛋白已延著導(dǎo)肽途經(jīng)穿過膜。鹽沖洗過的膜不能啟動核糖體的結(jié)合，它的能力又可以恢復(fù)。信號肽序列 蛋白質(zhì)跨膜運轉(zhuǎn)信號也是由mRNA編碼的。在起始密碼子后，有一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域，這個氨基酸序列就被稱為信號序列。信號序列在結(jié)合核糖體上合成后便與膜上特定受體相互作用，產(chǎn)生通道，允許這段多肽在延長的同時穿過膜結(jié)構(gòu)，因此，這種方式是邊翻譯邊跨膜運轉(zhuǎn)。信號肽在基因工程技術(shù)與應(yīng)用融合gp67 信號肽的慈菇蛋白酶抑制劑基因在蠶體內(nèi)表達(dá)1.重組轉(zhuǎn)移載體 pBacPAK-gpAPI2 的構(gòu)建pBacPAK-gpAPI2 的 ph. p、gp67 信號肽序列和

4、A PI2 基因的連接處序列為:2.重組病毒的篩選及表達(dá)產(chǎn)物分子量測定3.血淋巴中表達(dá)產(chǎn)物含量的測定 表達(dá)產(chǎn)物經(jīng) SDS-PAGE電泳 ,脫色后用凝膠干燥儀干燥 ,用Bio-Rad GS-670 圖像分析儀進(jìn)行掃描處理。測得 CrBK-API4 感染的血淋巴上清液中表達(dá)的 API占可溶性蛋白含量的 9 %,CrBK-gpAPI2 感染的血淋巴上清液中表達(dá)的 API占可溶性蛋白含量的 7 %。血淋巴中可溶性蛋白總量測定表明:CrBK-API4 感染的血淋巴上清液中為 40mg/ mL ,CrBK-gpAPI2 感染的血淋巴上清液中為 55mg/ mL。從而得到血淋巴中表達(dá)的慈菇蛋白酶抑制劑的絕對

5、含量:CrBK-API4 感染的血淋巴中為 3.6mg/ mL ,CrBK-gpAPI2 感染的血淋巴中為3.8mg/ mL。兩者的絕對表達(dá)量差別不大。4 .表達(dá)的慈菇蛋白酶抑制劑的活性測定參考文獻(xiàn)生 物 技 術(shù) 通 訊堵國成。陳堅，等大腸桿菌高效表達(dá)重組蛋白策略中國生物工程雜志，2019，27(9)：103龍建銀，王會信生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，）：楊運桂，徐京寧，等生物化學(xué)與生物物理學(xué)專有名詞 RER：粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 信號識別顆粒signal recognition particle （SRP） ER；內(nèi)質(zhì)網(wǎng) ribosome receptor 核糖體受體 SPR receptor 信號識別顆粒受體 signal peptidase 信號肽酶 Association of