多肽合成詳細(xì)解說

1、多肽合成詳細(xì)解說1 .多肽化學(xué)合成概述：1963年,R.B.Merrifield1創(chuàng)立了將氨基酸的C末端固定在不溶性樹脂上,然后在此樹脂上依次縮合氨基酸,延長(zhǎng)肽鏈、合成蛋白質(zhì)的固相合成法,在固相法中,一每步反響后只需簡(jiǎn)單地洗滌樹脂,便可到達(dá)純化目的.克服了經(jīng)典液相合成法中的每一步產(chǎn)物都需純化的困難,為自動(dòng)化合成肽奠定了根底.為此,Merrifield獲彳導(dǎo)1984年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng).今天,固相法得到了很大開展.除了Merrifield所建立的Boc法Boc:叔丁氧厥基之外,又開展了Fmoc固相法Fmoc:9-藥甲氧?；?以這兩種方法為根底的各種肽自動(dòng)合成儀也相繼出現(xiàn)和開展,并仍在不斷得到改造和完善

2、.Merrifield所建立的Boc合成法2是采用TFA三氟乙酸可脫除的Boc為“-氨基保護(hù)基,側(cè)鏈保護(hù)采用節(jié)醇類.合成時(shí)將一個(gè)Boc-氨基酸衍生物共價(jià)交聯(lián)到樹脂上,用TFA脫除Boc,用三乙胺中和游離的氨基末端,然后通過Dcc活化、耦聯(lián)下一個(gè)氨基酸,最終脫保護(hù)多采用HF法或TFMSA三氟甲磺酸法.用Boc法已成功地合成了許多生物大分子,如活性酶、生長(zhǎng)因子、人工蛋白等.多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì).它是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物,由多種氨基酸根據(jù)一定的排列順序通過肽鍵結(jié)合而成.到現(xiàn)在,人們已發(fā)現(xiàn)和別離出一百多種存在于人體的肽,對(duì)于多肽的研究和利用,出現(xiàn)了一個(gè)空前

3、的繁榮景象.多肽的全合成不僅具有很重要的理論意義,而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值.通過多肽全合成可以驗(yàn)證一個(gè)新的多肽的結(jié)構(gòu)；設(shè)計(jì)新的多肽,用于研究結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系；為多肽生物合成反響機(jī)制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽藥物等.多肽的化學(xué)合成技術(shù)無論是液相法還是固相法都已成熟.近幾十年來,固相法合成多肽更以其省時(shí)、省力、省料、便于計(jì)算機(jī)限制、便于普及推廣的突出優(yōu)勢(shì)而成為肽合成的常規(guī)方法并擴(kuò)展到核甘酸合成等其它有機(jī)物領(lǐng)域.本文概述了固相合成的根本原理、實(shí)驗(yàn)過程,對(duì)其現(xiàn)狀進(jìn)行分析并展望了今后的開展趨勢(shì).從1963年Merrifield開展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改良和完善,到今天固相法

4、已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法無法比較的優(yōu)點(diǎn).其根本原理是：先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基以共價(jià)鍵的結(jié)構(gòu)同一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連,然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份經(jīng)過脫去氨基保護(hù)基并同過量的活化竣基組分反響,接長(zhǎng)肽鏈.重復(fù)縮合一洗滌一去保護(hù)一中和及洗滌一下一輪縮合操作,到達(dá)所要合成的肽鏈長(zhǎng)度,最后將肽鏈從樹脂上裂解下來,經(jīng)過純化等處理,即得所要的多肽.其中“-氨基用BOC叔丁氧默基保護(hù)的稱為BOC固相合成法,a-氨基用FMOC9-藥甲氧?；Ｗo(hù)的稱為FMOC固相合成法,2 .固相合成的根本原理多肽合成是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程,固相合成順序

5、一般從C端蝮基端向N端氨基端合成.過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法.現(xiàn)在多采用固相合成法,從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度.為了預(yù)防副反響的發(fā)生,參加反響的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的.竣基端是游離的,并且在反響之前必須活化.化學(xué)合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc.由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢(shì),現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,如圖:具體合成由以下幾個(gè)循環(huán)組成:一、去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑piperidine去除氨基的保護(hù)基團(tuán).二、激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的竣基被一種活化劑所活化.活化的單體與游離的氨基反響交聯(lián),形成肽鍵.在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反響

6、完成.循環(huán)：這兩步反響反復(fù)循環(huán)直到合成完成.三、洗脫和脫保護(hù)：多肽從柱上洗脫下來,其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑TFA洗脫和脫保護(hù).2.1 樹脂的選擇及氨基酸的固定將固相合成與其他技術(shù)分開來的最主要的特征是固相載體,能用于多肽合成的固相載體必須滿足如下要求：必須包含反響位點(diǎn)或反響基團(tuán),以使肽鏈連在這些位點(diǎn)上,并在以后除去；必須對(duì)合成過程中的物理和化學(xué)條件穩(wěn)定；載體必須允許在不斷增長(zhǎng)的肽鏈和試劑之間快速的、不受阻礙的接觸；另外,載體必須允許提供足夠的連接點(diǎn),以使每單位體積的載體給出有用產(chǎn)量的肽,并且必須盡量減少被載體束縛的肽鏈之間的相互作用.用于固相法合成多肽的高分子載體主要有三類：聚苯乙烯-苯二乙烯

7、交聯(lián)樹脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇類樹脂及衍生物,這些樹脂只有導(dǎo)入反響基團(tuán),才能直接連上第一個(gè)氨基酸.根據(jù)所導(dǎo)入反響基團(tuán)的不同,又把這些樹脂及樹脂衍生物分為氯甲基樹脂、竣基樹脂、氨基樹脂或酰腫型樹脂.BOC合成法通常選擇氯甲基樹脂,如Merrifield樹脂；FMOC合成法通常選擇竣基樹脂如王氏樹脂.氨基酸的固定主要是通過保護(hù)氨基酸的竣基同樹脂的反響基團(tuán)之間形成的共價(jià)鍵來實(shí)現(xiàn)的,形成共價(jià)鍵的方法有多種：氯甲基樹脂,通常先制得保護(hù)氨基酸的四甲俊鹽或鈉鹽、鉀鹽、葩鹽,然后在適當(dāng)溫度下,直接同樹脂反響或在適宜的有機(jī)溶劑如二氧六環(huán)、DMF或DMSO中反響；竣基樹脂,那么通常參加適當(dāng)?shù)目s合劑如DCC或

8、竣基二咪口坐,使被保護(hù)氨基酸與樹脂形成共酯以完成氨基酸的固定；氨基樹脂或酰腫型樹脂,卻是加入適當(dāng)?shù)目s合劑如DCC后,通過保護(hù)氨基酸與樹脂之間形成的酰胺鍵來完成氨基酸的固定.氨基、竣基、側(cè)鏈的保護(hù)及脫除要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽,需要對(duì)暫不參與形成酰胺鍵的氨基和竣基加以保護(hù),同時(shí)對(duì)氨基酸側(cè)鏈上的活性基因也要保護(hù),反響完成后再將保護(hù)基因除去.同液相合成一樣,固相合成中多采用烷氧玻基類型作為“氨基的保護(hù)基,由于這樣不易發(fā)生消旋.最早是用茉氧?；?由于它需要較強(qiáng)的酸解條件才能脫除,所以后來改為叔丁氧厥基BOC保護(hù),用TFA三氟乙酸脫保護(hù),但不適用含有色氨酸等對(duì)酸不穩(wěn)定的肽類的合成.1978年

9、,changMeienlofer和Atherton等人采用Carpino報(bào)道的Fmoc9-藥甲氧玻基作為a氨基保護(hù)基,Fmoc基對(duì)酸很穩(wěn)定,但能用哌咤-CH2CL2或哌咤-DMF脫去,近年來,Fmoc合成法得到了廣泛的應(yīng)用.竣基通常用形成酯基的方法進(jìn)行保護(hù).甲酯和乙酯是逐步合成中保護(hù)竣基的常用方法,可通過皂化除去或轉(zhuǎn)變?yōu)槟[以便用于片斷組合；叔丁酯在酸性條件下除去；節(jié)酯常用催化氫化除去.對(duì)于合成含有半胱氨酸、組氨酸、精氨酸等帶側(cè)鏈功能基的氨基酸的肽來說,為了預(yù)防由于側(cè)鏈功能團(tuán)所帶來的副反響,一般也需要用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基將側(cè)鏈基團(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來.保護(hù)基的選擇既要保證側(cè)鏈基團(tuán)不參與形成酰胺的反響,又要保證

10、在肽合成過程中不受破壞,同時(shí)又要保證在最后肽鏈裂解時(shí)能被除去.如用三苯甲基保護(hù)半胱氨酸的S-,用酸或銀鹽、汞鹽除去；組氨酸的咪陛環(huán)用2,2,2-三氟-1-茉氧厥基和2,2,2-三氟-1-叔丁氧玻基乙基保護(hù),可通過催化氫化或冷的三氟乙酸脫去.精氨酸用金剛烷氧?；鵄doc保護(hù),用冷的三氟乙酸脫去.固相中的接肽反響原理與液相中的根本一致,將兩個(gè)相應(yīng)的氨基被保護(hù)的及竣基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經(jīng)常用的手段是將竣基活化,變成混合酸酎、活潑酯、酰氯或用強(qiáng)的失去劑如碳二亞氨形成對(duì)稱酸酎等方法來形成酰胺鍵.其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對(duì)稱酸酎法、活化酯法接肽應(yīng)用最廣

11、.一|裂解及合成肽鏈的純化BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護(hù)基,FMOC法直接用TFA,有時(shí)根據(jù)條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護(hù)方法也被采用.合成肽鏈進(jìn)一步的精制、別離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等.4 .固相合成的特點(diǎn)及存在的主要問題固相合成法對(duì)于肽合成的顯著的優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)化并加速了多步驟的合成；因反響在一簡(jiǎn)單反應(yīng)器皿中便可進(jìn)行,可預(yù)防因手工操作和物料重復(fù)轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的損失；固相載體共價(jià)相聯(lián)的肽鏈處于適宜的物理狀態(tài),可通過快速的抽濾、洗滌未完成中間的純化,預(yù)防了液相肽合成中冗長(zhǎng)的重結(jié)晶或分柱步驟,可預(yù)防中間體別離純化時(shí)大量的損失；使用過量反響物,迫使個(gè)別反響完全

12、,以便最終產(chǎn)物得到高產(chǎn)率；增加溶劑化,減少中間的產(chǎn)物聚焦；固相載體上肽鏈和輕度交聯(lián)的聚合鏈緊密相混,彼此產(chǎn)生一種相互的溶劑效應(yīng),這對(duì)肽自聚集熱力學(xué)不利而對(duì)反響適宜.固相合成的主要存在問題是固相載體上中間體雜肽無法別離,這樣造成最終產(chǎn)物的純度不如液相合成物,必需通過可靠的別離手段純化.5 .固相合成的研究開展前景固相多肽合成已經(jīng)有40年的歷史了,然而到現(xiàn)在,人們還只能合成一些較短的肽鏈,更談不上隨心所欲地合成蛋白質(zhì)了,同時(shí)合成中的試劑毒性,昂貴費(fèi)用,副產(chǎn)物等一直都是令人頭痛的問題,而在生物體內(nèi),核糖體上合成肽鏈的速度和產(chǎn)率都是驚人的,那么,是否能從生物體合成蛋白質(zhì)的原理上得到一些啟發(fā),應(yīng)用在固相

13、多肽合成樹脂上,這是一個(gè)令人感興趣的問題,也許是今后多肽合成的開展.在Boc合成法中,反復(fù)地用酸來脫保護(hù),這種處理帶來了一些問題：如在肽與樹脂的接頭處,當(dāng)每次用50%TFA脫Boc基時(shí),有約1.4%的肽從樹脂上脫落,合成的肽越大,這樣的喪失越嚴(yán)重；此外,酸催化會(huì)引起側(cè)鏈的一些副反響.Boc合成法尤其不適于合成含有色氨酸等對(duì)酸不穩(wěn)定的肽類.1978年,Chang、Meienlofer和Atherton等人采用Carpino3報(bào)道的Fmoc9-藥甲氧玻基基團(tuán)作為一氨基保護(hù)基,成功地進(jìn)行了多肽的Fmoc固相合成.Fmoc法與Boc法的根本區(qū)別在于采用了堿可脫除的Fmoc為廠氨基的彳護(hù)基.側(cè)鏈的保護(hù)采

14、用TFA可脫除的叔丁氧基等,樹脂采用90%TFA可切除的對(duì)烷氧茉醇型樹脂和1%TFA可切除的二烷氧茉醇型樹脂,最終的脫保護(hù)預(yù)防了強(qiáng)酸處理6 .HPLC分析和純化分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng),可以經(jīng)受傳遞高壓,這樣可以用極細(xì)的微粒3-10Wm做填料.由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析.HPLC分兩類：離子交換和反相.離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用.柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷.別離是一種電荷相互作用,通過可變PH,離子強(qiáng)度,或兩者洗脫出多肽,通常,先用低離子強(qiáng)度的溶液,以后逐漸增強(qiáng)或一步一步增強(qiáng),直到多肽火柱中洗

15、脫出.離子交換別離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽離子交換柱.如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來別離.反相HPLC條件與正常層析正相反.多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強(qiáng)度洗脫,如增加洗脫劑的疏水性.通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成,這種鏈長(zhǎng)度為G4-G8碳原子.由于洗脫是一種疏水作用.大的疏水肽用短鏈柱洗脫好.然而,總體實(shí)踐中,這兩類柱互變無多少顯著差異,別類載體由碳水化合物構(gòu)成,比方苯基.典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80%acetonitrile0.1%TFA-H2o稀acetonitrile.用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速

16、度混合.常見分析和純化用柱為4.6X250mm3-10科m和22X250mm10科m.如果用徑向填柱,那么大小是8X1003-10科m和25X250mm10科m大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比方heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸,稀Heformic酸5-6%,pH2-4,10-100mMNH4HCO3,醋酸鈉/氨,TFA/TEA,磷酸鈉或鉀,異戊酚.這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點(diǎn)：硅反相柱料不能長(zhǎng)時(shí)間暴露于高pH,甚至微堿pH,由于這樣會(huì)破壞柱子.7 .Fmoc一氨基酸的制備和側(cè)鏈保護(hù)Fmoc基團(tuán)是在有NaHCO3或Na2CO3存在的二氧六環(huán)溶液中,通過以下反響引

17、入到氨基酸中的：理想的Fmoc-氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基應(yīng)在堿性條件下穩(wěn)定,在酸性條件下脫除.下面對(duì)其做一介紹.7.1 Asp和GluAsp和Glu側(cè)鏈竣基常用t-Bu保護(hù).可用TFA、TMSBr等脫除.但是用t-Bu保護(hù)仍有側(cè)鏈環(huán)化形成酰亞胺的副反響發(fā)生.近年來,開展了一些新的保護(hù)基如環(huán)烷醇酯、金剛烷醇酯等可減輕這一副反響,這些保護(hù)基可用TMSOTf三氟甲磺酸三甲硅烷酯除去.7.2 Ser、Thr和Tyrser、Thr的羥基及Tyr的酚羥基通常用t-Bu保護(hù).叔丁基的引入比較麻煩,首先ser制成茉氧?；?再在酸催化下與異丁烯反響.Ser和Thr還可用茉基保護(hù),Ser用茉醇引入茉基、Thr用澳茉引

18、入茉基.7.3 Asn和GlnAsn和Gln側(cè)鏈的酰胺鍵在肽合成中一般不加以保護(hù).但合成大肽時(shí),Asn和Gln的一竣基活化時(shí)可能會(huì)發(fā)生分子內(nèi)月氫反響生成氟基化合物.堿性時(shí)Gln的側(cè)鏈可以環(huán)化生成酰胺.而且不保護(hù)的Fmoc-Gln和Fmoc-Asn在DCM中溶解度很差.為了預(yù)防這些問題,可以用9-咕噸基,2,4,6-三甲氧茉基,4,4'一二甲氧二苯甲基或三苯甲基等保護(hù),這四種基因均可用TFA脫除.7.4 HisHis是最容易發(fā)生消旋化的氨基酸,必須加以保護(hù)對(duì)咪陛環(huán)的非兀-N開始用芳基(Bzl)和甲基磺?；?TOS)保護(hù).但這兩種保護(hù)基均不太理想.TOS對(duì)親核試劑不穩(wěn)定,Bzl需要用氫解或

19、Na/NHs除去,并且產(chǎn)生很大程度消旋.Boc基團(tuán)是一個(gè)較理想的保護(hù)基,降低了咪陛環(huán)的堿性,抑制了消旋,成功地進(jìn)行了一些合成.但是當(dāng)反復(fù)地用堿處理時(shí),也表現(xiàn)出一定的不穩(wěn)定性.哌咤厥基在堿中穩(wěn)定,但是沒能很好地抑制消旋,而且脫保護(hù)時(shí)要用很強(qiáng)的親核試劉如對(duì)咪口坐環(huán)兀-N保護(hù),可以完全抑制消旋,兀-N可以用茉氧甲基(Bom)和叔丁氧甲基(Bum)保護(hù),(Bum)可以用TFA脫除,Bom更穩(wěn)定些,需用催化氫解或強(qiáng)酸脫保護(hù),Bum是目前很有開展前途的His側(cè)鏈保護(hù)基,其缺乏之處在于Fmoc(His)Bum在DCM和DMF中的溶解度較差.7.5 CysCys的SH具有強(qiáng)親核性,易被酰化成硫醛,也易被氧化為

20、二硫鍵,必須加以保護(hù).常用保護(hù)基有三類：一類用TFA可脫除,如對(duì)甲茉基、對(duì)甲氧茉基和三苯甲基等；第二類可用(CF3CO)3T1/TFA脫除,對(duì)TFA穩(wěn)定.如t-Bu、Bom和乙酰胺甲基等.第三類對(duì)弱酸穩(wěn)定,如芳基和叔丁硫基(stBu)等,Cys(StBu)可用前基試劑和磷試劑復(fù)原,Cys(Bzl)可用Na/NH3(1)脫保護(hù).7.6 ArgArg的月瓜基具有強(qiáng)親核性和堿性,必須加以保護(hù).理想的情況是三個(gè)氮都加以保護(hù),實(shí)際上保護(hù)1或2個(gè)月瓜基氮原子.保護(hù)基分四類：(1)硝基(2)烷氧?；?3)磺酰基(4)三苯甲基.硝基在制備、酰化裂解中產(chǎn)生很多副反響,應(yīng)用不廣.烷氧?；鶓?yīng)主要有Boc和二金剛烷氧

21、厥基(Adoc)2、Fmoc(Arg)Boc的耦聯(lián)反效率不高,哌咤理時(shí)不處穩(wěn)定,會(huì)發(fā)生副反響；Adoc保護(hù)了兩個(gè)非兀N,但有同樣的副反響發(fā)生.對(duì)磺?；Ｗo(hù),其中TOS應(yīng)用最廣,但它較難脫除.近年來2,3,6-三甲基-4-甲氧苯橫?；?Mtr)較受歡送,在TFA作用下,30分鐘即可脫除,但是它們都不能完全抑制側(cè)鏈的?；l(fā)生.三苯甲基保護(hù)基可用TFA脫除.缺點(diǎn)是反響較慢,側(cè)鏈仍有?；错?且其在DCM、DMF中溶解度不好.7.7 LysLys的£-NH2必須加以保護(hù).但與a-NH2的保護(hù)方式應(yīng)不同,該保護(hù)基要到肽鏈合成后除去.£-NH2的保護(hù)無消旋問題,可以采用?；Ｗo(hù)基,其它

22、常用的保護(hù)基有節(jié)氧碳基和Boc.7.8 Fmoc基團(tuán)的脫除Fmoc基團(tuán)的藥環(huán)系的吸電子作用使9-H具有酸性,易被較弱堿除去,反響條件很溫和反響過程可表示如下：哌咤進(jìn)攻9-H,3消除形成二苯藥烯,很容易被二級(jí)環(huán)胺進(jìn)攻形成穩(wěn)定的加成物.Fmoc基團(tuán)對(duì)不同的堿穩(wěn)定性不同,可根據(jù)實(shí)際條件選用7.9 耦聯(lián)反響固相中的接肽反響原理與液相中根本一致.將兩個(gè)相應(yīng)的氨基被保護(hù)的及竣基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi),并不形成肽鍵.要形成酰胺鍵,經(jīng)常用的手段是將竣基活化,其方法是將它變成混合酸酎,或者將它變?yōu)榛顫婖?、酰?或者用強(qiáng)的失去劑(碳二亞胺)也可形成酰胺鍵,耦聯(lián)反響可表示如下：(A:默基活潑試劑)碳二亞胺是常用的

23、活化試劑,其中Dcc使用范圍最廣,其缺點(diǎn)是形成了不溶于DCM的DCH,過濾時(shí)又難于除盡.其他一些如二異丙基碳二亞胺DCI、甲基叔丁基碳二亞胺也用于固相合成中,它們形成的月尿溶于DCM中,經(jīng)洗滌可以除去.其他活化試劑,還有BopBopC1、氯甲酸異丙酯、氯甲酸異丁酯、SOC12等.其中Dcc、Bop活化形成對(duì)稱酸酎、SOC12形成酰氯,其余三種形成不對(duì)稱酸酎.7.10 對(duì)稱酸酎法用Dcc形成對(duì)稱酸酎的方法使用較廣.其缺點(diǎn)是有些氨基酸在DCM中不易溶解,生成的Fmoc氨基酸酎溶解度更差.同時(shí)還有些副反響,如形成二肽、消旋等7.11混合酸酎法最常用試劑是氯甲酸的異丙基酯和異丁基酯.前者得到的酸酎穩(wěn)定性好.只產(chǎn)生很少消旋,在適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)計(jì)量及溶劑條件下,耦聯(lián)反響很快.而且,在此反響中使用的N-甲基嗎咻和N-甲基哌咤對(duì)Fmoc基團(tuán)無影響7.12酰氯法在Boc法中不常用的酰氯,由于比較劇烈,一些保護(hù)基如Boc不穩(wěn)定.但是,Fmoc基團(tuán)可以耐受酰氯處理,生成的Fmoc氨基酰氯也很穩(wěn)定.在三甲基乙酸/三胺或苯并三氮陛