生物化學(xué)課件核酸分子雜交53

1、 第一節(jié)核酸分子雜交的基本原理第一節(jié)核酸分子雜交的基本原理一一核酸的變性與復(fù)性核酸的變性與復(fù)性二二核酸分子雜交的基本原理核酸分子雜交的基本原理第二節(jié)核酸探針第二節(jié)核酸探針一一常見的核酸探針常見的核酸探針二二核酸探針的標(biāo)記核酸探針的標(biāo)記第三節(jié)核酸分子雜交相關(guān)技術(shù)第三節(jié)核酸分子雜交相關(guān)技術(shù) 一一傳統(tǒng)的核酸分子雜交技術(shù)傳統(tǒng)的核酸分子雜交技術(shù) 二二原位雜交原位雜交 一、核酸的變性與復(fù)性一、核酸的變性與復(fù)性二、核酸雜交的基本原理二、核酸雜交的基本原理n（一）變性（一）變性n當(dāng)有酸、堿、熱及某些變性劑（如尿素、乙醇、甲當(dāng)有酸、堿、熱及某些變性劑（如尿素、乙醇、甲酰胺、胍等）等變性因素存在時(shí)，酰胺、胍等）等

2、變性因素存在時(shí)，DNADNA分子雙鏈間分子雙鏈間的氫鍵斷裂，解離成兩條無規(guī)則的卷曲狀單鏈的氫鍵斷裂，解離成兩條無規(guī)則的卷曲狀單鏈DNADNA，此現(xiàn)象稱為變性（此現(xiàn)象稱為變性（denaturationdenaturation）。）。nDNA DNA 變性后，由于雙螺旋解體，堿基堆積不再變性后，由于雙螺旋解體，堿基堆積不再存在，藏于螺旋內(nèi)部的堿基暴露出來，從而使存在，藏于螺旋內(nèi)部的堿基暴露出來，從而使變性后的變性后的DNA DNA 對對260nm 260nm 紫外光的吸光率比變性紫外光的吸光率比變性前明顯增加，這種現(xiàn)象稱為增色效應(yīng)前明顯增加，這種現(xiàn)象稱為增色效應(yīng)（hyperchromic effe

3、cthyperchromic effect）。）。 n核酸在變性過程中，除紫外吸收值變化之外，核酸在變性過程中，除紫外吸收值變化之外，還有粘度下降、沉降系數(shù)增加、比旋度降低、還有粘度下降、沉降系數(shù)增加、比旋度降低、生物活性喪失等生物活性喪失等（二）復(fù)性（二）復(fù)性 n去除變性因素后，單鏈去除變性因素后，單鏈DNADNA能通過堿基互補(bǔ)重新結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈能通過堿基互補(bǔ)重新結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，此過程稱為復(fù)性（螺旋結(jié)構(gòu)，此過程稱為復(fù)性（renaturationrenaturation）。）。nDNA DNA 復(fù)性后，許多理化性質(zhì)和生物活性也得到恢復(fù)。復(fù)性過程基復(fù)性后，許多理化性質(zhì)和生物活性也得到

4、恢復(fù)。復(fù)性過程基本上符合二級反應(yīng)動力學(xué)，其中第一步是相對緩慢的，因?yàn)閮蓷l本上符合二級反應(yīng)動力學(xué)，其中第一步是相對緩慢的，因?yàn)閮蓷l鏈必須依靠隨機(jī)碰撞找到一段堿基配對部分，先形成部分雙螺旋。鏈必須依靠隨機(jī)碰撞找到一段堿基配對部分，先形成部分雙螺旋。第二步快得多，尚未配對的其他部分按堿基配對相結(jié)合，像拉鎖第二步快得多，尚未配對的其他部分按堿基配對相結(jié)合，像拉鎖鏈一樣迅速形成雙螺旋。鏈一樣迅速形成雙螺旋。n退火（退火（annealingannealing）：）：熱變性熱變性DNA DNA 在緩慢冷卻時(shí)，可以在緩慢冷卻時(shí)，可以復(fù)性，這種復(fù)性稱為退火。復(fù)性，這種復(fù)性稱為退火。n“淬火淬火”（quenchq

5、uench）：將熱變性的）：將熱變性的DNADNA驟然冷卻時(shí)，驟然冷卻時(shí)，DNA DNA 不可能復(fù)性，這是由于溫度突然降低，單鏈不可能復(fù)性，這是由于溫度突然降低，單鏈DNA DNA 分子失去碰撞的機(jī)會，因而不能復(fù)性，仍然保持單鏈分子失去碰撞的機(jī)會，因而不能復(fù)性，仍然保持單鏈變性的狀態(tài)。將熱變性變性的狀態(tài)。將熱變性DNADNA驟然冷卻的處理過程叫驟然冷卻的處理過程叫“淬淬火火” 。n利用利用“淬火淬火”的原理，在用同位素標(biāo)記的雙鏈的原理，在用同位素標(biāo)記的雙鏈DNA DNA 片片段進(jìn)行分子雜交時(shí)，為獲得單鏈的雜交探針，可將裝段進(jìn)行分子雜交時(shí)，為獲得單鏈的雜交探針，可將裝有熱變性有熱變性DNA DN

6、A 溶液的試管直接插入冰浴，使溶液在冰溶液的試管直接插入冰浴，使溶液在冰浴中驟然冷卻至浴中驟然冷卻至0 0 。n影響影響DNADNA復(fù)性的因素：復(fù)性的因素：nDNADNA的大小及復(fù)雜性。的大小及復(fù)雜性。DNADNA片段越小、序列越簡單，片段越小、序列越簡單，復(fù)性速率越快。因?yàn)槠卧酱?、?fù)雜性越高，單鏈復(fù)性速率越快。因?yàn)槠卧酱?、?fù)雜性越高，單鏈DNADNA分子相互碰撞的幾率越少。分子相互碰撞的幾率越少。nDNADNA的濃度。的濃度。DNADNA濃度越大，兩條互補(bǔ)鏈相互碰撞的濃度越大，兩條互補(bǔ)鏈相互碰撞的可能性越大，復(fù)性的速度也越快?？赡苄栽酱螅瑥?fù)性的速度也越快。n溫度。溫度過高，不利于溫度。溫

7、度過高，不利于DNADNA的復(fù)性；溫度過低，則的復(fù)性；溫度過低，則少數(shù)堿基配對形成的局部雙鏈不易解離，難以繼續(xù)尋少數(shù)堿基配對形成的局部雙鏈不易解離，難以繼續(xù)尋找正確的配對。適宜的復(fù)性溫度是比找正確的配對。適宜的復(fù)性溫度是比TmTm值低值低2525。n溶液的離子強(qiáng)度。因?yàn)辂}能中和溶液的離子強(qiáng)度。因?yàn)辂}能中和DNADNA單鏈中磷酸基團(tuán)單鏈中磷酸基團(tuán)的負(fù)電性，減少互補(bǔ)鏈的負(fù)電荷相互排斥作用，因此的負(fù)電性，減少互補(bǔ)鏈的負(fù)電荷相互排斥作用，因此增加鹽濃度，可加速兩條互補(bǔ)鏈重新結(jié)合的速度。增加鹽濃度，可加速兩條互補(bǔ)鏈重新結(jié)合的速度。n根據(jù)核酸變性和復(fù)性的原理，不同來根據(jù)核酸變性和復(fù)性的原理，不同來源的源的

8、DNADNA變性后，若這些異源變性后，若這些異源DNADNA之間之間存在某些相同序列的區(qū)域，在退火條存在某些相同序列的區(qū)域，在退火條件下則可形成件下則可形成DNA-DNADNA-DNA異源雙鏈；或異源雙鏈；或?qū)⒆冃缘膯捂湆⒆冃缘膯捂淒NADNA與與RNARNA經(jīng)復(fù)性處理可經(jīng)復(fù)性處理可以形成以形成DNA-RNADNA-RNA雜合雙鏈。這種不同雜合雙鏈。這種不同來源的單鏈核酸分子在合適的條件下，來源的單鏈核酸分子在合適的條件下，通過堿基互補(bǔ)形成雙鏈雜交體的過程通過堿基互補(bǔ)形成雙鏈雜交體的過程稱為核酸分子雜交（稱為核酸分子雜交（molecular molecular hybridizationhyb

9、ridization）。）。D N A2D N A1RNA探針DNA-RNA雜交 DNA-DNA雜交 核酸分子雜交原理示意圖核酸分子雜交原理示意圖一、常見的核酸探針一、常見的核酸探針二、核酸探針的標(biāo)記二、核酸探針的標(biāo)記三、核酸探針的檢測三、核酸探針的檢測n核酸核酸探針探針(probes)(probes)是指能與待測的靶核酸序列互補(bǔ)雜交的是指能與待測的靶核酸序列互補(bǔ)雜交的已知序列的核酸片段。它具有高度的特異性，并且一般來已知序列的核酸片段。它具有高度的特異性，并且一般來講帶有某種適當(dāng)?shù)闹v帶有某種適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物標(biāo)記物以便檢測。以便檢測。n根據(jù)標(biāo)記方法不同，核酸探針可被粗分為放射性探針和非根據(jù)標(biāo)記方法

10、不同，核酸探針可被粗分為放射性探針和非放射性探針兩大類；根據(jù)性質(zhì)及來源不同，核酸探針又可放射性探針兩大類；根據(jù)性質(zhì)及來源不同，核酸探針又可被分為基因組被分為基因組DNADNA探針、探針、cDNAcDNA探針、探針、RNARNA探針及寡核苷酸探探針及寡核苷酸探針等幾類。針等幾類。一、常見的核酸探針一、常見的核酸探針圖圖9 9 RNARNA探針制備示意圖探針制備示意圖 n由于由于RNARNA探針為單鏈，雜交時(shí)不存在第二條鏈的競爭，其探針為單鏈，雜交時(shí)不存在第二條鏈的競爭，其與待測核酸雜交的效率高，靈敏度高。與待測核酸雜交的效率高，靈敏度高。n同時(shí)由于同時(shí)由于RNA/RNARNA/RNA和和RNA/

11、DNARNA/DNA雜交體的穩(wěn)定性較雜交體的穩(wěn)定性較DNA/DNADNA/DNA雜雜交體的穩(wěn)定性高，雜交反應(yīng)可以在更為嚴(yán)格的條件下進(jìn)行，交體的穩(wěn)定性高，雜交反應(yīng)可以在更為嚴(yán)格的條件下進(jìn)行，因而因而RNARNA探針的特異性高。探針的特異性高。nRNARNA探針適合于探針適合于NorthernNorthern雜交、原位雜交等。雜交、原位雜交等。n主要缺點(diǎn)是不穩(wěn)定，易被降解。主要缺點(diǎn)是不穩(wěn)定，易被降解。二、核酸探針的標(biāo)記二、核酸探針的標(biāo)記核酸探針核酸探針1.1.放射性同位素標(biāo)記物放射性同位素標(biāo)記物n由于放射性同位素與相應(yīng)的元素之間的化學(xué)性質(zhì)完由于放射性同位素與相應(yīng)的元素之間的化學(xué)性質(zhì)完全相同，對堿基

12、配對的特異性和穩(wěn)定性無影響。檢全相同，對堿基配對的特異性和穩(wěn)定性無影響。檢測靈敏度和特異性也高于任何非放射性標(biāo)記物，特測靈敏度和特異性也高于任何非放射性標(biāo)記物，特別適用于單拷貝基因或低豐度別適用于單拷貝基因或低豐度mRNAmRNA檢測，因此放射檢測，因此放射性同位素雖然存在放射線污染、半衰期短、不能長性同位素雖然存在放射線污染、半衰期短、不能長期存放的缺點(diǎn)，但仍是目前應(yīng)用最多的一類探針標(biāo)期存放的缺點(diǎn)，但仍是目前應(yīng)用最多的一類探針標(biāo)記物。記物。(1)(1)生物素生物素n生物素生物素 生物素是一種小分子水溶性維生素，通過一條碳生物素是一種小分子水溶性維生素，通過一條碳鏈臂與鏈臂與UTPUTP或或d

13、UTPdUTP嘧啶環(huán)的第嘧啶環(huán)的第5 5位碳原子相連，對核苷酸進(jìn)位碳原子相連，對核苷酸進(jìn)行標(biāo)記。行標(biāo)記。n除除dUTPdUTP外，生物素標(biāo)記的外，生物素標(biāo)記的dATPdATP和和dCTPdCTP也已被研制和應(yīng)用。也已被研制和應(yīng)用。也可以將光敏基團(tuán)與生物素的連接臂預(yù)先連接，形成光敏也可以將光敏基團(tuán)與生物素的連接臂預(yù)先連接，形成光敏生物素，通過化學(xué)法對核酸探針進(jìn)行標(biāo)記。生物素，通過化學(xué)法對核酸探針進(jìn)行標(biāo)記。 (2) (2) 地高辛地高辛n地高辛（地高辛（digoxingenindigoxingenin，DigDig）又稱異羥基洋地黃苷配）又稱異羥基洋地黃苷配基，是一種具有半抗原性質(zhì)的化合物?；?，是

14、一種具有半抗原性質(zhì)的化合物。n地高辛配基標(biāo)記于脫氧尿嘧啶三磷酸核苷（地高辛配基標(biāo)記于脫氧尿嘧啶三磷酸核苷（dUTPdUTP）上）上形成形成Dig-11-dUTPDig-11-dUTP。n與生物素相比，地高辛探針不受組織、細(xì)胞中內(nèi)源性與生物素相比，地高辛探針不受組織、細(xì)胞中內(nèi)源性生物素的干擾，敏感性高，檢測產(chǎn)物有鮮艷顏色，反生物素的干擾，敏感性高，檢測產(chǎn)物有鮮艷顏色，反差好，背景染色低。差好，背景染色低。n不僅應(yīng)用于不僅應(yīng)用于SouthernSouthern印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、菌落雜交印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、菌落雜交等，以檢測特定基因序列，而且更普遍地應(yīng)用于原位等，以檢測特定基因序列，而且更普遍地應(yīng)

15、用于原位雜交中。雜交中。 (3) (3) 酶酶n常用堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶對核酸探常用堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶對核酸探針進(jìn)行標(biāo)記。針進(jìn)行標(biāo)記。熒光素?zé)晒馑責(zé)晒馑貥?biāo)記的核苷酸結(jié)構(gòu)熒光素標(biāo)記的核苷酸結(jié)構(gòu)熒光基團(tuán)通過碳鏈臂連接到尿嘧啶核苷的熒光基團(tuán)通過碳鏈臂連接到尿嘧啶核苷的5 5碳原子上，當(dāng)被修飾的核苷碳原子上，當(dāng)被修飾的核苷酸摻入到酸摻入到DNADNA分子中時(shí)，熒光素基團(tuán)便將分子中時(shí)，熒光素基團(tuán)便將DNADNA分子標(biāo)記。右圖是羅達(dá)明的分子標(biāo)記。右圖是羅達(dá)明的結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)。（二）（二） 核酸探針的標(biāo)記方法核酸探針的標(biāo)記方法n根據(jù)標(biāo)記物的不同分為放射性同位素標(biāo)記和非放射性根據(jù)標(biāo)記物的不同分為放射

16、性同位素標(biāo)記和非放射性同位素標(biāo)記。同位素標(biāo)記。n放射性同位素標(biāo)記中，裂變原子只是簡單地?fù)饺胩椒派湫酝凰貥?biāo)記中，裂變原子只是簡單地?fù)饺胩结樀奶烊唤Y(jié)構(gòu)而取代非放射性同系物。針的天然結(jié)構(gòu)而取代非放射性同系物。n在非放射性同位素標(biāo)記方法中，核酸中正常情況下在非放射性同位素標(biāo)記方法中，核酸中正常情況下不存在的化學(xué)基團(tuán)或復(fù)合物通過酶學(xué)、光化學(xué)或合不存在的化學(xué)基團(tuán)或復(fù)合物通過酶學(xué)、光化學(xué)或合成反應(yīng)與探針結(jié)合。當(dāng)探針與靶核酸雜交后，探針成反應(yīng)與探針結(jié)合。當(dāng)探針與靶核酸雜交后，探針上的修飾基團(tuán)可通過適當(dāng)?shù)闹甘鞠到y(tǒng)而被檢測。上的修飾基團(tuán)可通過適當(dāng)?shù)闹甘鞠到y(tǒng)而被檢測。n根據(jù)反應(yīng)方式不同可將核酸探針的標(biāo)記方法根據(jù)反

17、應(yīng)方式不同可將核酸探針的標(biāo)記方法分為化學(xué)法和酶促法兩種。分為化學(xué)法和酶促法兩種。n化學(xué)法是利用標(biāo)記物分子上的活性基團(tuán)與核酸分子上的化學(xué)法是利用標(biāo)記物分子上的活性基團(tuán)與核酸分子上的基團(tuán)（如磷酸基）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而將標(biāo)記物結(jié)合到探針基團(tuán)（如磷酸基）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而將標(biāo)記物結(jié)合到探針分子上的方法，多用于非放射性同位素的標(biāo)記，如光敏分子上的方法，多用于非放射性同位素的標(biāo)記，如光敏生物素的標(biāo)記、辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶等的標(biāo)記。生物素的標(biāo)記、辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶等的標(biāo)記。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡單、快速、標(biāo)記均勻。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡單、快速、標(biāo)記均勻。n酶促法是將標(biāo)記物（同位素或非同位素）預(yù)先標(biāo)記在核酶促

18、法是將標(biāo)記物（同位素或非同位素）預(yù)先標(biāo)記在核苷酸分子上，然后通過酶促反應(yīng)將標(biāo)記核苷酸摻入到探苷酸分子上，然后通過酶促反應(yīng)將標(biāo)記核苷酸摻入到探針分子中，或?qū)⒑塑账岱肿由系臉?biāo)記物轉(zhuǎn)移到探針分子針分子中，或?qū)⒑塑账岱肿由系臉?biāo)記物轉(zhuǎn)移到探針分子上。上。 這種方法是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的標(biāo)記方法。這種方法是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的標(biāo)記方法。n核酸探針的酶促標(biāo)記方法種類較多，如切口平核酸探針的酶促標(biāo)記方法種類較多，如切口平移法、隨機(jī)引物法、移法、隨機(jī)引物法、cDNAcDNA探針的標(biāo)記、探針的標(biāo)記、DNADNA探探針的末端標(biāo)記、針的末端標(biāo)記、RNARNA探針以及寡核苷酸探針的探針以及寡核苷酸探針的標(biāo)記等，可根據(jù)不同的

19、實(shí)驗(yàn)需要加以選擇。標(biāo)記等，可根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要加以選擇。第三節(jié)第三節(jié) 核核酸分子雜交相關(guān)技術(shù)酸分子雜交相關(guān)技術(shù) 一、傳統(tǒng)的核酸分子雜交技術(shù)一、傳統(tǒng)的核酸分子雜交技術(shù)二、原位雜交二、原位雜交SouthernSouthern一、傳統(tǒng)核酸分子雜交技術(shù)一、傳統(tǒng)核酸分子雜交技術(shù) 分離開的分離開的DNA片段電轉(zhuǎn)移至尼龍膜上片段電轉(zhuǎn)移至尼龍膜上 Southern Southern 印跡雜交步驟示意圖印跡雜交步驟示意圖 標(biāo)記探針與膜上標(biāo)記探針與膜上DNA片段雜交片段雜交 顯示與標(biāo)記探針顯示與標(biāo)記探針雜交的雜交的DNA片段片段 圖圖9 91 1-2 -2 Southern Southern 印跡雜交步驟示意圖印

20、跡雜交步驟示意圖 2.Northern 2.Northern印跡雜交印跡雜交Northern Northern 雜交示意圖雜交示意圖 從細(xì)胞中提取從細(xì)胞中提取RNARNA，在變性條件下進(jìn)在變性條件下進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。行瓊脂糖凝膠電泳。EBEB染色后可見兩染色后可見兩條條rRNArRNA條帶，另一條分子量小的條帶，另一條分子量小的rRNArRNA在電泳過程中跑出凝膠，而在電泳過程中跑出凝膠，而mRNAmRNA由于由于含量低而不能顯示條帶。印跡雜交后含量低而不能顯示條帶。印跡雜交后可見條帶?？梢姉l帶。 圖圖9-19-1 WesternWestern印跡流程圖印跡流程圖圖圖9-20 SDS-PAG

21、E 9-20 SDS-PAGE 與與Western blotWestern blot結(jié)果比較結(jié)果比較n由于免疫印跡具有由于免疫印跡具有SDS-PAGESDS-PAGE的高分辨力和固相的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，標(biāo)本可長期保免疫測定的高特異性和敏感性，標(biāo)本可長期保存，結(jié)果便于比較，故廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)存，結(jié)果便于比較，故廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)等領(lǐng)域的一種研究方法。等領(lǐng)域的一種研究方法。3. 3. 斑點(diǎn)雜交（斑點(diǎn)雜交（dot-blotdot-blot）與狹縫雜交）與狹縫雜交(slot blot)(slot blot)點(diǎn)雜交在疾病診斷中的應(yīng)用：點(diǎn)雜交在疾病診斷中的應(yīng)用：當(dāng)基因的突變部

22、位和性質(zhì)已完全明了時(shí)，根據(jù)已知的基因當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí)，根據(jù)已知的基因突變位點(diǎn)的核苷酸序列，人工合成兩種寡核苷酸探針：一突變位點(diǎn)的核苷酸序列，人工合成兩種寡核苷酸探針：一種與正?；蛐蛄型耆恢?，能與之穩(wěn)定地雜交，但不能種與正?；蛐蛄型耆恢?，能與之穩(wěn)定地雜交，但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致，能與與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致，能與突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交，突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交，從而檢測受檢者基因是否發(fā)生突變，以及是否有新的突變從而檢測受檢者基因是否發(fā)生突變，以及是否有新的突變類型。這稱

23、為類型。這稱為等位基因特異性點(diǎn)雜交（等位基因特異性點(diǎn)雜交（Allele-specific Allele-specific oligonucleotideoligonucleotide，ASOASO）。ASOASO點(diǎn)雜交檢測鐮刀形細(xì)胞基因突變點(diǎn)雜交檢測鐮刀形細(xì)胞基因突變經(jīng)典案例分析經(jīng)典案例分析 鐮刀狀細(xì)胞貧血的基因突鐮刀狀細(xì)胞貧血的基因突變的檢測變的檢測鐮刀狀細(xì)胞貧血的基因突鐮刀狀細(xì)胞貧血的基因突變可以通過變可以通過ASOASO點(diǎn)雜交進(jìn)點(diǎn)雜交進(jìn)行檢測。合成兩種寡核苷行檢測。合成兩種寡核苷酸探針?biāo)崽结楢-ASOA-ASO（正常（正常A-A-珠蛋白等位基因探針）珠蛋白等位基因探針）和和S-ASOS-ASO（鐮刀狀細(xì)胞（鐮刀狀細(xì)胞S-S-珠蛋白等位基因探珠蛋白等位基因探針），兩種探針的長度都針），兩種探針的長度都是是1919個(gè)核苷酸，序列為鐮個(gè)核苷酸，序列為鐮刀形細(xì)胞突變位點(diǎn)前后各刀形細(xì)胞突變位點(diǎn)前后各9 9個(gè)核苷酸（如圖個(gè)核苷酸（如圖9 92121）。）。 檢測結(jié)果：用檢測結(jié)果：用A-ASOA-ASO探探針檢測，正常和雜合子個(gè)針檢測，正常和雜合子個(gè)體標(biāo)本呈陽性；用體標(biāo)本呈陽性；用S-S-ASOASO探針檢測，雜合子和探針檢測，雜合子和純合子個(gè)體標(biāo)本呈陽性。純合子個(gè)體標(biāo)本呈陽性。二、核酸原位雜交二、核酸原位雜交n原位雜交是將核酸分