第二章_固相萃取技術(shù)(1)

1、第二章第二章 固相萃取固相萃取概概 述述固相萃取的基本原理、分離模式及操固相萃取的基本原理、分離模式及操作步驟作步驟固相萃取方法的建立及應(yīng)用固相萃取方法的建立及應(yīng)用 固相萃取的操作步驟固相萃取的操作步驟固相萃取的裝置固相萃取的裝置所謂萃取法所謂萃取法 , ,就是從樣品中提取組分就是從樣品中提取組分 , ,傳統(tǒng)的方傳統(tǒng)的方法是液法是液- -液萃取法液萃取法 ( LLE) , ( LLE) ,即用液體作為提取劑即用液體作為提取劑。固相萃?。ü滔噍腿。⊿olid Phase Extraction, SPESolid Phase Extraction, SPE） 是是1919世紀(jì)世紀(jì)7070年代后期發(fā)

2、展起來(lái)的樣品前處理技術(shù)。年代后期發(fā)展起來(lái)的樣品前處理技術(shù)。與液液萃取相比，固相萃取具有如下優(yōu)點(diǎn)：與液液萃取相比，固相萃取具有如下優(yōu)點(diǎn)：回收率和富集倍數(shù)高有機(jī)溶劑消耗量低，可回收率和富集倍數(shù)高有機(jī)溶劑消耗量低，可減少對(duì)環(huán)境的污染采用高效、高選擇性的吸附減少對(duì)環(huán)境的污染采用高效、高選擇性的吸附劑，能更有效的將分析物與干擾組分分離無(wú)相劑，能更有效的將分析物與干擾組分分離無(wú)相分離操作過(guò)程，容易收集分析物能處理小體積分離操作過(guò)程，容易收集分析物能處理小體積試樣操作簡(jiǎn)便、快速，費(fèi)用低，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)試樣操作簡(jiǎn)便、快速，費(fèi)用低，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化及與其他分析儀器連用?；芭c其他分析儀器連用。Survey resp

3、onse %固相萃取（固相萃?。⊿PESPE）是利用固體吸附劑將液體樣品中）是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和和富集分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和和富集的目的。先使液體樣品通過(guò)一裝有吸附劑（固相）的目的。先使液體樣品通過(guò)一裝有吸附劑（固相）小柱，保留其中某些組分，再選用適當(dāng)?shù)娜軇_小柱，保留其中某些組分，再選用適當(dāng)?shù)娜軇_洗雜質(zhì)，然后用少量溶劑迅速洗脫，從而達(dá)到快洗雜質(zhì)，然后用少量溶劑迅速洗脫，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。速分離凈化與濃縮的目的。一個(gè)完整的固相萃取步驟包

4、括固相萃取柱的一個(gè)完整的固相萃取步驟包括固相萃取柱的預(yù)處預(yù)處理、上樣、洗去干擾物質(zhì)、洗脫及收集分析物四理、上樣、洗去干擾物質(zhì)、洗脫及收集分析物四個(gè)步驟。個(gè)步驟。將樣品倒入活化后的SPE 小柱，然后利用加壓、抽真空或離心的方法使樣品進(jìn)入吸附劑。采取手動(dòng)或泵以正壓推動(dòng)或負(fù)壓抽吸方式，使液體樣品以適當(dāng)流速通過(guò)固相萃取柱，此時(shí)，樣品中的目標(biāo)萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。（1）固相萃取柱商品化的固相萃取柱（cartridge）外形類(lèi)似于一個(gè)注射器針筒。還可自行填裝固相萃取柱。（2）固相萃取過(guò)濾裝置固相萃取加樣過(guò)程中，需通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ箻悠啡芤和ㄟ^(guò)固相萃取柱，使待分析物吸附在填料上。洗脫過(guò)程中，同樣需要

5、使溶劑通過(guò)固相萃取住，使待分析物解析。以上步驟需借助于固相萃取過(guò)濾裝置完成，采用柱前加壓或柱后加負(fù)壓抽吸的方式實(shí)現(xiàn)。a.固相萃取過(guò)濾-加壓操作固相萃取加壓操作可通過(guò)在液體樣品儲(chǔ)液槽上方用高壓空氣或氮?dú)馐┘右欢▔毫?lái)實(shí)現(xiàn)的。如果樣品較少，可以用手動(dòng)加壓的方式實(shí)現(xiàn)。b. 固相萃取過(guò)濾-負(fù)壓抽吸負(fù)壓抽吸是在固相萃取柱的出口用注射器手動(dòng)抽負(fù)壓，或與水泵或真空泵相連，用泵施加適當(dāng)真空度，從而使樣品溶液抽吸通過(guò)固相萃取柱。最常用的是用抽濾瓶實(shí)現(xiàn)負(fù)壓抽吸。也可以采用固相萃取過(guò)濾裝置同時(shí)處理多個(gè)樣品也可以采用固相萃取過(guò)濾裝置同時(shí)處理多個(gè)樣品c. 固相萃取過(guò)濾-離心法全自動(dòng)固相萃取儀全自動(dòng)固全自動(dòng)固相萃取儀相萃

6、取儀能自動(dòng)完能自動(dòng)完成固相萃成固相萃取的全部取的全部步驟步驟固相萃取聯(lián)用裝置鍵和硅膠吸附劑鍵和硅膠吸附劑常用的鍵合硅膠常用的鍵合硅膠吸附劑表面積在吸附劑表面積在5050500m500m2 2/g /g 之間，之間，孔徑為孔徑為5 550nm 50nm ，粒徑大于粒徑大于40m 40m 。一般應(yīng)選擇粒徑一般應(yīng)選擇粒徑小、比表面積大小、比表面積大的吸附劑，以獲的吸附劑，以獲得更好的萃取效得更好的萃取效果。但要注意若果。但要注意若粒徑過(guò)細(xì)，萃取粒徑過(guò)細(xì)，萃取時(shí)阻力增加，萃時(shí)阻力增加，萃取速度下降。取速度下降。應(yīng)根據(jù)分析對(duì)象、檢測(cè)手段及實(shí)驗(yàn)室條件合理選擇。應(yīng)根據(jù)分析對(duì)象、檢測(cè)手段及實(shí)驗(yàn)室條件合理選擇。

7、2. 2.固相萃取溶劑的選擇固相萃取溶劑的選擇在固相萃取固定相活化、上樣富集、淋洗雜質(zhì)、分析物洗脫過(guò)程中，都涉及到溶劑選擇問(wèn)題。a. a.固定相活化溶劑的選擇固定相活化溶劑的選擇一般使用兩種活化溶劑。第一種溶劑（初始溶劑）用于凈化固定相，對(duì)于常用的C18鍵和硅膠固定相，可用甲醇有效地除去其所含雜質(zhì)。第二種溶劑（終溶劑）使固定相溶劑化，以便樣品中的分析物能更好的保留。b. b.上樣萃取溶劑的選擇上樣萃取溶劑的選擇為了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上為了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上樣萃取時(shí)應(yīng)采用盡可能弱得溶劑。樣萃取時(shí)應(yīng)采用盡可能弱得溶劑。c. c.淋洗溶劑的選擇淋洗溶劑的選擇淋洗溶劑用于洗去吸附在固定相上的干擾組分。淋洗溶劑用于洗去吸附在固定相上的干擾組分。淋洗溶劑的強(qiáng)度選擇非常重要，其強(qiáng)度不能太淋洗溶劑的強(qiáng)度選擇非常重要，其強(qiáng)度不能太高，也不能太低，應(yīng)大于或等于上樣溶劑，又高，也不能太低，應(yīng)大于或等于上樣溶劑，又小于洗脫溶劑。淋洗溶劑的選擇原則：盡可能小于洗脫溶劑。淋洗溶劑的選擇原則：盡可能將干擾組分從固定相上洗脫完全，但又不能洗將干擾組分從固定相上洗脫完全，但又不能洗脫任何分析物。脫任何分析物。1 1）固相萃取測(cè)定生物檢材中安眠酮（導(dǎo)數(shù)紫外）固相萃取測(cè)定生物檢材中安眠酮（導(dǎo)數(shù)紫外