反向高壓制備教材

1、分析送樣要求分析送樣要求 分析部分析部12.30內(nèi)容內(nèi)容一一 反向制備液相反向制備液相二二 HPLC、LC-MS和和GC-MS三三 NMR一一 反相高壓制備反相高壓制備 1、 什么樣的化合物可送反相置備什么樣的化合物可送反相置備 一、離子型化合物。一、離子型化合物。 二、正相系統(tǒng)不能分離的化合物。二、正相系統(tǒng)不能分離的化合物。 三、自己進行分離純化達不到純度要求。三、自己進行分離純化達不到純度要求。 A、樣品應(yīng)在甲醇、乙腈、樣品應(yīng)在甲醇、乙腈、DMF、DMSO或或THF中有中有 良好的溶解性。良好的溶解性。 B、該化合物、該化合物LC/MS保留時間在保留時間在1.4-6min之間。之間。 C、

2、LC/MS圖上能看出與相鄰雜質(zhì)峰有一定分離度。圖上能看出與相鄰雜質(zhì)峰有一定分離度。2、常用的反相體系、常用的反相體系一、反相體系的選擇與化合物的性質(zhì)有關(guān)。一、反相體系的選擇與化合物的性質(zhì)有關(guān)。二、通常為水二、通常為水-有機相有機相(甲醇、乙腈甲醇、乙腈)。為獲得良好的。為獲得良好的色譜分離效果，有時會加入后處理可除去的酸、色譜分離效果，有時會加入后處理可除去的酸、堿、鹽。堿、鹽。3、后處理、后處理 一、用水一、用水-有機相進行的制備有機相進行的制備 A、用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機相。 B、凍干。 二、用水二、用水-有機相及一定的酸、堿、鹽進行的制備有機相及一定的酸、堿、鹽進行的制備 A、用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

3、除去有機相。 B、加入相應(yīng)的酸、堿，使化合物呈非離子 狀態(tài)，再用有機溶劑進行萃取。 C、旋干有機溶劑。 有的酸、堿、鹽可直接凍干除去。4、送樣要求、送樣要求 一、先送一、先送LC-MS，得到相應(yīng)的圖譜。，得到相應(yīng)的圖譜。 二、確定該化合物的分子量、有紫外吸收及一定的分離二、確定該化合物的分子量、有紫外吸收及一定的分離 度。度。 三、按默認的組別進行送樣，需填寫送樣單。三、按默認的組別進行送樣，需填寫送樣單。 四、送樣單上必須注明該化合物的樣品編號、結(jié)構(gòu)式、重四、送樣單上必須注明該化合物的樣品編號、結(jié)構(gòu)式、重 量、在酸堿條件下的穩(wěn)定性、溶解性較好的溶劑、有沒有成量、在酸堿條件下的穩(wěn)定性、溶解性較

4、好的溶劑、有沒有成 鹽、送樣人、聯(lián)系電話等內(nèi)容。鹽、送樣人、聯(lián)系電話等內(nèi)容。 五、送制備的樣品，目標化合物的含量應(yīng)在五、送制備的樣品，目標化合物的含量應(yīng)在20%以上。以上。 六、送制備的樣品量超過六、送制備的樣品量超過10g以上盡量自己處理。如果非得以上盡量自己處理。如果非得送制備，必須有組長、項目負責人（張永亮、郭子紅）、分送制備，必須有組長、項目負責人（張永亮、郭子紅）、分析室主管（王永紅）三人的簽字。析室主管（王永紅）三人的簽字。 七、樣品如果非常急，必須要插隊的，按上面的第六條操作。七、樣品如果非常急，必須要插隊的，按上面的第六條操作。 二二HPLC、LCMS、GC-MS 送樣要求送樣

5、要求(1). 常用溶劑：甲醇、乙腈、水、四氫呋喃常用溶劑：甲醇、乙腈、水、四氫呋喃(均需色譜級均需色譜級)。(2). 送樣要求：固體約為送樣要求：固體約為2mg，液體，液體10ul放入離心管，加放入離心管，加 入色譜級溶劑溶解，入色譜級溶劑溶解，0.45um微孔濾膜過濾到微孔濾膜過濾到2ml的送樣的送樣 玻璃瓶里（送玻璃瓶里（送UPLC的樣品必須用的樣品必須用0.22um微孔濾膜過微孔濾膜過 濾）濾）, 樣品量需樣品量需1ml 以上，樣品濃度約為以上，樣品濃度約為24mg/ml并在并在 送樣單上注明。送樣單上注明。(3).若需使用特殊溶劑（如若需使用特殊溶劑（如DMSO、 DMF）需注明，且含

6、量）需注明，且含量 10%; 不得含有正相試劑如乙酸乙酯、石油醚、二氯甲不得含有正相試劑如乙酸乙酯、石油醚、二氯甲 烷等，強酸強堿如硫酸、三乙銨等以免對系統(tǒng)造成污染。烷等，強酸強堿如硫酸、三乙銨等以免對系統(tǒng)造成污染。(4).樣品若需要回收，請在送樣單上注明。樣品若需要回收，請在送樣單上注明。(5).如果是最終出貨樣品，請在送樣單上注明。如果是最終出貨樣品，請在送樣單上注明。LC-MS/ HPLCGC-MS（1）常規(guī)正相、反相溶劑（除水外）均可，但需）常規(guī)正相、反相溶劑（除水外）均可，但需注明，尤其沸點較高的溶劑必須注明。注明，尤其沸點較高的溶劑必須注明。（2）固體約為）固體約為2mg，液體，液

7、體10ul放入離心管，加入放入離心管，加入色譜級溶劑溶解，過濾到色譜級溶劑溶解，過濾到2ml的送樣玻璃瓶里。的送樣玻璃瓶里。樣品量樣品量1ml 以上，樣品濃度約為以上，樣品濃度約為24mg/ml并在并在送樣單上注明。送樣單上注明。（3）如果是檢測純?nèi)軇┑募兌龋〖內(nèi)軇┤绻菣z測純?nèi)軇┑募兌?，取純?nèi)軇?1.5ml以以上直接放入送樣玻璃瓶里，并注明是純?nèi)軇?。上直接放入送樣玻璃瓶里，并注明是純?nèi)軇?。?） 規(guī)范填寫送樣單，務(wù)必注明組別、分子式、規(guī)范填寫送樣單，務(wù)必注明組別、分子式、準確分子量、化學結(jié)構(gòu)式。樣品沸點需小于準確分子量、化學結(jié)構(gòu)式。樣品沸點需小于300度，請務(wù)必注明沸點！度，請務(wù)必注明沸

8、點！ 三三NMR儀器儀器VARIAN MERCURY300 可以做的實驗可以做的實驗 氫譜，氫譜，19F、31P-NMR，13C-NMR, DEPT45, DEPT90, DEPT135， COSY, HSQC, HMBC, NOESY常規(guī)常規(guī)1H-NMR 響應(yīng)時間：響應(yīng)時間：2h送樣要求送樣要求1. 1. 核磁管上無裂痕，管壁干凈清透。核磁管上無裂痕，管壁干凈清透。2. 2. 送樣時，為避免氘代溶劑揮發(fā)送樣時，為避免氘代溶劑揮發(fā), ,建議用建議用PARAFILMPARAFILM密封核磁管帽口。密封核磁管帽口。3. 3. 樣品最好能完全溶解，溶液澄清。樣品最好能完全溶解，溶液澄清。4. 4.

9、氘代試劑體積約為氘代試劑體積約為0.6ml0.6ml。5. 5. 氫譜樣品量為氫譜樣品量為5-10mg5-10mg，碳譜樣品量為，碳譜樣品量為30mg30mg。6. 6. 樣品標志請用記號筆標明，不要用標簽紙，帽上寫各組項目名稱的樣品標志請用記號筆標明，不要用標簽紙，帽上寫各組項目名稱的第一個字母（如第一個字母（如Merck寫）管壁上的標記請盡量寫于管口處。寫）管壁上的標記請盡量寫于管口處。7.最終化合物，請在送樣單上注明。最終化合物，請在送樣單上注明。 8.樣品如要回收或有其它要求，請在送樣單上注明，并于看到圖譜兩樣品如要回收或有其它要求，請在送樣單上注明，并于看到圖譜兩天之內(nèi)取走，否則后果自負。天之內(nèi)取走，否則后果自負。9請按送樣單的要求逐項正確完整地填寫，氘代溶劑請注明。請按送樣單的要求逐項正確完整地填寫，氘代溶劑請注明。圖例圖例核磁管外表干凈無污漬，管壁無明顯裂紋核磁管外表干凈無污漬，管壁無明顯裂紋樣品約樣品約5mg，溶于，溶于0.5ml氘代試劑，溶液澄清氘代試劑，溶液澄清無沉淀或懸浮物無沉淀或懸浮物樣品標記于核磁管上部靠管口處樣品標記于核磁管上部靠管口處貼樣品處貼樣品處 上上 海海 睿睿 智智 化化 學學 研研 究究 有有 限限 公公 司司 送樣地點： 核磁共振送樣卡核磁共