第二次討論第一題 (1)

1、蛋白質(zhì)雙蛋白質(zhì)雙向電泳向電泳原理原理蛋白質(zhì)雙蛋白質(zhì)雙向電泳向電泳方法方法蛋白質(zhì)雙向蛋白質(zhì)雙向電泳在醫(yī)學(xué)電泳在醫(yī)學(xué)的應(yīng)用的應(yīng)用Western blot 即蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗即蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗)。它是分子生。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。其法。其基本原理基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況

2、的信息?；蚪M織中表達情況的信息。 為更清楚地講清采用蛋白質(zhì)印跡法，下為更清楚地講清采用蛋白質(zhì)印跡法，下面我們通過一個實驗（用蛋白質(zhì)印跡法面我們通過一個實驗（用蛋白質(zhì)印跡法分析小鼠肝，腎兩個器官中的分析小鼠肝，腎兩個器官中的CYP1A1（細胞色素的一種）的含量。）來為大（細胞色素的一種）的含量。）來為大家介紹家介紹蛋白質(zhì)印跡法的應(yīng)用主要在于蛋白質(zhì)檢測蛋白質(zhì)印跡法的應(yīng)用主要在于蛋白質(zhì)檢測小鼠禁食過夜，斷頭處死，迅速剖開腹腔，取出肝、小鼠禁食過夜，斷頭處死，迅速剖開腹腔，取出肝、腎分別稱重腎分別稱重 按按1g組織中加入冰預(yù)冷的組織中加入冰預(yù)冷的10 ml裂解液，裂解液，10mM PMSF（苯甲基磺酰

3、氟）（苯甲基磺酰氟） 1ml 冰上制成冰上制成10的組織勻漿的組織勻漿取取1ml勻漿，勻漿，4、離心、離心30分鐘分鐘小心吸取上清液小心吸取上清液取少量上清液進行蛋白定量，余下的取少量上清液進行蛋白定量，余下的-20保存?zhèn)溆帽４鎮(zhèn)溆米⒁馐马椬⒁馐马?樣品裂解或勻漿處理不徹底，以及蛋白質(zhì)沉淀不完全，可能導(dǎo)致得率過低樣品裂解或勻漿處理不徹底，以及蛋白質(zhì)沉淀不完全，可能導(dǎo)致得率過低1.樣品制備樣品制備考馬斯亮藍考馬斯亮藍G250 是一種蛋白質(zhì)染料，最大吸收是一種蛋白質(zhì)染料，最大吸收峰在峰在465nm,當(dāng)它與蛋白質(zhì)以范德華力結(jié)合形成考當(dāng)它與蛋白質(zhì)以范德華力結(jié)合形成考馬斯亮藍馬斯亮藍G250蛋白質(zhì)復(fù)合物

4、，其最大吸收峰改蛋白質(zhì)復(fù)合物，其最大吸收峰改變?yōu)樽優(yōu)?95 nm，其吸光度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系，其吸光度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系，故可以用于蛋白質(zhì)含量的測定。按下表操作。故可以用于蛋白質(zhì)含量的測定。按下表操作。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測定管的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測定管的濃度2.蛋白質(zhì)定量（考馬斯亮藍染色法）蛋白質(zhì)定量（考馬斯亮藍染色法）裝配好制膠玻璃板裝配好制膠玻璃板按下列配方配制按下列配方配制12的分離膠：的分離膠：將表中的前四項組分混勻后，再加入將表中的前四項組分混勻后，再加入APS和和TEMED（四甲基乙二胺）。（四甲基乙二胺）。將上述溶液緩慢注入制膠玻璃片至梳齒下將上述溶液緩慢注入制膠玻璃

5、片至梳齒下1cm,操作中注意防操作中注意防止產(chǎn)生氣泡，聚膠止產(chǎn)生氣泡，聚膠30分鐘后用分鐘后用ddH2O完全洗凈封閉液。完全洗凈封閉液。3.制膠制膠 制膠所用儀器按下列配方配制按下列配方配制5的聚集膠：的聚集膠：將表中的前四項組分混勻后，再加入將表中的前四項組分混勻后，再加入APS和和TEMED。注入聚集膠前，用濾紙吸干分離膠上的水。緩慢注入聚集膠，注入聚集膠前，用濾紙吸干分離膠上的水。緩慢注入聚集膠，過程中注意防止產(chǎn)生氣泡。插入梳齒，聚膠過程中注意防止產(chǎn)生氣泡。插入梳齒，聚膠30分鐘后小心拔除分鐘后小心拔除梳齒。梳齒。用用ddH2O清洗梳孔，放入電泳槽備用。清洗梳孔，放入電泳槽備用。用用Sa

6、mple Buffer 按按1：1稀釋樣品稀釋樣品95加熱變性加熱變性5分鐘分鐘5.5.上樣及電泳上樣及電泳將電泳槽內(nèi)注滿將電泳槽內(nèi)注滿1電泳緩沖液，徹底除去點樣孔中和膠底的電泳緩沖液，徹底除去點樣孔中和膠底的氣泡。氣泡。兩邊空白的泳道點上等量的兩邊空白的泳道點上等量的 Sample Buffer ，上樣量（上樣量（20l含含40g蛋白）蛋白）向電泳外槽內(nèi)注入向電泳外槽內(nèi)注入1電泳緩沖液，蓋上蓋子，電泳開始時電電泳緩沖液，蓋上蓋子，電泳開始時電壓為壓為80V，染料進入分離膠后，將電壓增加到，染料進入分離膠后，將電壓增加到120V，穩(wěn)壓，當(dāng)染，穩(wěn)壓，當(dāng)染料抵達料抵達分離膠底部約分離膠底部約80分

7、鐘，斷開電源分鐘，斷開電源4.樣品處理樣品處理上樣示意圖以及注意事項剪剪6塊濾紙和一塊塊濾紙和一塊NC膜，其大小與膠相同膜，其大小與膠相同將濾紙預(yù)先在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡將濾紙預(yù)先在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡5分鐘，除去氣泡分鐘，除去氣泡凝膠電泳完成后取出。按照海綿凝膠電泳完成后取出。按照海綿3塊濾紙塊濾紙凝膠凝膠NC膜膜另外另外3塊濾紙塊濾紙海綿的順序依次放，應(yīng)避免氣泡海綿的順序依次放，應(yīng)避免氣泡用塑料支架夾緊上述各層，放入轉(zhuǎn)移內(nèi)槽及外槽，注入冰用塑料支架夾緊上述各層，放入轉(zhuǎn)移內(nèi)槽及外槽，注入冰預(yù)冷的轉(zhuǎn)移緩沖液。注意預(yù)冷的轉(zhuǎn)移緩沖液。注意NC膜一側(cè)靠正極，膠一側(cè)靠負(fù)極膜一側(cè)靠正極，膠一側(cè)靠負(fù)極轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移20

8、0mA穩(wěn)流，穩(wěn)流，4，1.5小時小時（時間根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量而定）（時間根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量而定）6.轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)移完成后，取出膜放在濾紙上，用鉛筆標(biāo)好正面，室溫干轉(zhuǎn)移完成后，取出膜放在濾紙上，用鉛筆標(biāo)好正面，室溫干燥數(shù)分鐘燥數(shù)分鐘用用western blotting封閉液封閉封閉液封閉NC膜，膜，室溫下振蕩室溫下振蕩1小時后小時后4過夜（過夜（NC膜正面向上）膜正面向上）8.8.一抗結(jié)合一抗結(jié)合一抗用封閉液配制（按一抗用封閉液配制（按1：20（CYP1A1）及）及1:200(-actin)配制）配制）室溫振搖室溫振搖2小時（小時（NC膜正面向上）膜正面向上）以以TBS-T洗膜洗膜3次

9、，每次次，每次5-10分鐘分鐘 注意事項，注意事項，一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預(yù)實驗確定最佳條件。白要經(jīng)過預(yù)實驗確定最佳條件。7.封閉NC膜二抗以二抗以TBS-T稀釋（按稀釋（按1：600配制）配制）室溫振搖孵育室溫振搖孵育1.5小時（小時（NC膜正面向上）膜正面向上）以以TBS-T洗膜洗膜3次，每次次，每次5-10分鐘分鐘10.顯色：辣根過氧化物酶顯色顯色：辣根過氧化物酶顯色(1)在試管中先加入在試管中先加入1mlHRP反應(yīng)緩沖液，然后依次加入試劑反應(yīng)緩沖液，然后依次加入試劑A500l、試劑、試劑B500l、C500l混勻

10、即可?；靹蚣纯?。(2)配制好的溶液應(yīng)避光存放，配制好的溶液應(yīng)避光存放，30min內(nèi)使用，染色為褐色。內(nèi)使用，染色為褐色。(3)室溫下染色時間為室溫下染色時間為530min，可根據(jù)顏色變化掌握染色時間。，可根據(jù)顏色變化掌握染色時間。(4)等目的條帶顯色后，用少量等目的條帶顯色后，用少量PBS清洗。清洗。注意事項，注意事項， 顯色液必須新鮮配置使用顯色液必須新鮮配置使用11.照相保存（另有化學(xué)發(fā)光，顯影，定影凝膠圖像分析等處照相保存（另有化學(xué)發(fā)光，顯影，定影凝膠圖像分析等處理方法）理方法）9.二抗結(jié)合二抗結(jié)合蛋白質(zhì)雙向電泳蛋白質(zhì)雙向電泳 是是等電聚焦電泳等電聚焦電泳和和SDS-PAGE（聚丙烯酰氨

11、凝膠聚丙烯酰氨凝膠電泳）電泳）的組合，即先進行的組合，即先進行等電聚焦電泳（按照等電聚焦電泳（按照pI分分離），然后再進行離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），（按照分子大小），經(jīng)染色得到的電泳圖是個經(jīng)染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質(zhì)圖。二維分布的蛋白質(zhì)圖。 等電聚焦電泳等電聚焦電泳 等電點聚焦（等電點聚焦（IEF）是在電場中分離蛋白質(zhì)技術(shù)的一個重要發(fā)）是在電場中分離蛋白質(zhì)技術(shù)的一個重要發(fā)展。展。 等電聚焦是等電聚焦是在穩(wěn)定的在穩(wěn)定的pH梯度中梯度中按等電點的不同分離按等電點的不同分離兩性大兩性大分子分子的平衡電泳方法。的平衡電泳方法。 這些分子總會是處于不斷擴散和抗擴散這些分

12、子總會是處于不斷擴散和抗擴散的平衡中，在的平衡中，在pI處得以處得以“聚焦聚焦”.等電聚焦電泳原理等電聚焦電泳原理蛋白質(zhì)是帶有電荷的兩性生物大分子，其正負(fù)電荷的蛋白質(zhì)是帶有電荷的兩性生物大分子，其正負(fù)電荷的數(shù)量隨所處環(huán)境酸堿度的變化而變化。數(shù)量隨所處環(huán)境酸堿度的變化而變化。 等電聚焦（等電聚焦（IEF）電泳就是在凝膠中加入兩性電電泳就是在凝膠中加入兩性電解質(zhì)，從而構(gòu)成從正極到負(fù)極解質(zhì)，從而構(gòu)成從正極到負(fù)極pH逐漸增加的逐漸增加的pH梯度，梯度，處在其中的蛋白分子在電場的作用下運動，最后各處在其中的蛋白分子在電場的作用下運動，最后各自停留在其等電點的位置上，測出蛋白分子聚焦位自停留在其等電點的位

13、置上，測出蛋白分子聚焦位置的置的pH值，便可以得到它的等電點。值，便可以得到它的等電點。等電聚焦電泳原理等電聚焦電泳原理 聚丙烯酰氨凝膠電泳聚丙烯酰氨凝膠電泳 作用原理：作用原理：聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)。篩效應(yīng)。 它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）及）及SDS-聚丙烯酰胺凝膠（聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程）；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小

14、、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。而而逐漸呈梯度分開。而SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。2D/MS 經(jīng)典工作流程細胞裂解細胞裂解勻漿勻漿除雜質(zhì)除雜質(zhì)濃縮濃縮定量定量差異分析差異分析雙向電泳雙向電泳第一向第一向第二向第二向圖像獲取圖像獲取圖譜分析圖譜分析銀染銀染 考染考染熒光熒光 蛋白標(biāo)記蛋白標(biāo)記樣品制備樣品制備分離分離染色染色圖譜分析圖譜分析挖點挖點酶解酶解點靶點靶蛋白鑒定蛋白鑒定體液體液植物植物微生物微生物組織組織細胞細胞樣品制備 細胞破碎細胞破碎 蛋白沉淀蛋

15、白沉淀 溶解溶解 抑制蛋白酶活性抑制蛋白酶活性 去除去除 - 核酸核酸- 脂類脂類- 鹽，緩沖液，離子性小分子鹽，緩沖液，離子性小分子- 不溶性物質(zhì)不溶性物質(zhì)2D/MS 經(jīng)典工作流程差異分析圖像獲取圖譜分析銀染 考染熒光 蛋白標(biāo)記染色圖譜分析挖點酶解點靶蛋白鑒定體液植物微生物組織細胞Separation雙向電泳第一向第二向細胞裂解勻漿預(yù)分級除雜質(zhì)濃縮定量樣品制備蛋白質(zhì)雙向電泳：傳統(tǒng)方法sample膠在SDS 緩沖液中平衡Principle according to P.H. OFarrell and J. Klose (1975)pH 10pH 10pH 3pH 3垂直膠管中進行等電聚焦 ur

16、ea, NP-40一向一向:二向二向:SDS 丙烯酰胺凝膠電泳非連續(xù)梯度膠按等電點分離（電荷）按分子量分離（質(zhì)量）使用載體兩性電解質(zhì)IEF時存在的問題 不同批次載體兩性電解質(zhì)的重現(xiàn)性不同批次載體兩性電解質(zhì)的重現(xiàn)性 載體兩性電解質(zhì)梯度不穩(wěn)定載體兩性電解質(zhì)梯度不穩(wěn)定 蛋白載量有限蛋白載量有限 重現(xiàn)性差導(dǎo)致梯度漂移重現(xiàn)性差導(dǎo)致梯度漂移 梯度漂移導(dǎo)致酸性和堿性蛋白質(zhì)丟失梯度漂移導(dǎo)致酸性和堿性蛋白質(zhì)丟失 管膠柔軟，尺寸不定管膠柔軟，尺寸不定 操作者個人技術(shù)影響結(jié)果操作者個人技術(shù)影響結(jié)果固相凝膠固相凝膠(支持膜上0.5 mm 厚凝膠)丙烯酰胺緩沖液丙烯酰胺緩沖液: Immobiline CH2=CH-CO

17、-NH-R,R ：羧基或叔胺基羧基或叔胺基固相 pH梯度 (IPG)Immobiline 干膠條的特性干膠條的特性 可重復(fù)性可重復(fù)性 無梯度漂移無梯度漂移, 真正的平衡方法真正的平衡方法 可分離酸性和堿性蛋白可分離酸性和堿性蛋白 容納蛋白樣本量更多容納蛋白樣本量更多 水平和垂直水平和垂直 SDS 凝膠中都能使用凝膠中都能使用 允許樣本水化上樣允許樣本水化上樣 機械強度和尺寸穩(wěn)定機械強度和尺寸穩(wěn)定 易操作易操作 易于對樣本跟蹤標(biāo)記易于對樣本跟蹤標(biāo)記新pH范圍的 Immobiline 干膠條 高分辨率的高分辨率的 IPG 膠條，聯(lián)合使用膠條，聯(lián)合使用DeStreak試劑試劑, 能改善極堿性區(qū)域蛋白

18、點結(jié)能改善極堿性區(qū)域蛋白點結(jié)果果。歸功于獨特的試劑。歸功于獨特的試劑。 使用使用pH范圍相互重疊的干膠條，范圍相互重疊的干膠條，可提高可提高2-D 圖譜圖譜 分析效率分析效率! 新新pH范圍范圍: Immobiline DryStrip pH 3 5.6 NLImmobiline DryStrip pH 5.3 6.5Immobiline DryStrip pH 6.2 7.5Immobiline DryStrip pH 7 11 NLImmobiline DryStrip pH 3 11 NL不同不同pH范圍膠條范圍膠條 不同長度、多種窄不同長度、多種窄pH范圍膠條可選，尤其是范圍膠條可選，

19、尤其是1個個pH范圍范圍 pH7-11NL堿性膠條堿性膠條寬pH 、窄 pH 范圍膠條寬寬pH梯度膠條應(yīng)用梯度膠條應(yīng)用:整個蛋白圖譜整個蛋白圖譜窄窄 pH梯度膠條應(yīng)用梯度膠條應(yīng)用:提高分辨率提高分辨率增加樣品上樣量增加樣品上樣量檢測分析更多蛋白檢測分析更多蛋白pH 3 4 5 6 7 8 9 10456789提高分辨率: 斑點顯現(xiàn)IPG 4-7IPG 5-6IPG 4-7IPG 5.5-6.7Mouse liver proteinsFrom A. Grg et al. (1999)不同長度的膠條7 cm 11 cm 13 cm 18 cm24cm2D/MS（蛋白質(zhì)雙向電泳） 經(jīng)典工作流程差異分

20、析圖像獲取圖譜分析蛋白標(biāo)記圖譜分析挖點酶解點靶蛋白鑒定體液植物微生物組織細胞分離細胞裂解勻漿預(yù)分級除雜質(zhì)濃縮定量樣品制備雙向電泳第一向第二向銀染銀染 考染考染熒光熒光染色染色Coomassie Blue-考馬斯亮藍染色 + 靈敏度靈敏度 ，低至低至0.01 m mg (“膠體膠體”考染考染) + 非特異性染色非特異性染色 + 染料與蛋白成比例結(jié)合染料與蛋白成比例結(jié)合 + 線性化好線性化好- 擴散速度受限，膠的厚度影響跑膠速度擴散速度受限，膠的厚度影響跑膠速度- 純度不夠純度不夠- 有限的動力學(xué)范圍有限的動力學(xué)范圍 膠體考馬斯亮藍染色 1 mg E. coli strain B Colloida

21、l CBBG250 staining銀染 + 靈敏度靈敏度 ，低至，低至0.2 ng + 在凝膠基質(zhì)中與蛋白交聯(lián)在凝膠基質(zhì)中與蛋白交聯(lián) + 自動催化反應(yīng)自動催化反應(yīng)- 線性化程度比考染低線性化程度比考染低- 步驟多，某些步驟時間控制嚴(yán)格步驟多，某些步驟時間控制嚴(yán)格Silver stained gel of E. coli Lysate IPG 4-7Silver stainedwith PlusOneKitwithout glutaraldehydeand formaldehydein the Ag sol.2D/MS 經(jīng)典工作流程差異分析蛋白標(biāo)記挖點酶解點靶蛋白鑒定體液植物微生物組織細胞分離

22、細胞裂解勻漿預(yù)分級除雜質(zhì)濃縮定量樣品制備雙向電泳第一向第二向圖像獲取圖像獲取圖譜分析圖譜分析銀染 考染熒光染色圖譜分析圖譜分析ImageScanner III圖像掃描系統(tǒng)灰度校正功能灰度校正功能平臺具有防水功能平臺具有防水功能，可直接掃描，可直接掃描SDS-PAGE濕膠。濕膠。3.7OD高動態(tài)范圍，保證高、低豐度高動態(tài)范圍，保證高、低豐度蛋白的準(zhǔn)確定量。蛋白的準(zhǔn)確定量。掃描平臺大，掃描平臺大，A3掃描面積掃描面積，一次可掃一次可掃描描2塊塊24cm凝膠。凝膠。Gray 256 scaleTransmissive300dpi 由由SIB, GeneBio和和GE Healthcare合作開發(fā)，合

23、作開發(fā)，為為SwissProt推薦分析軟件。推薦分析軟件。 高效能參數(shù)自動找點，全自動蛋白定量計高效能參數(shù)自動找點，全自動蛋白定量計算方法，不受背景影響。算方法，不受背景影響。 在原始數(shù)據(jù)上進行分析，結(jié)果可靠。界面在原始數(shù)據(jù)上進行分析，結(jié)果可靠。界面窗口可隨意設(shè)計，界面極其友好。窗口可隨意設(shè)計，界面極其友好。 全自動凝膠匹配，采用先進的算法。根據(jù)全自動凝膠匹配，采用先進的算法。根據(jù)點的相關(guān)因素、形狀、位置、周圍情況，點的相關(guān)因素、形狀、位置、周圍情況，膠間匹配效率高。膠間匹配效率高。 多種統(tǒng)計學(xué)分析工具，快速找到膠間蛋白多種統(tǒng)計學(xué)分析工具，快速找到膠間蛋白表達差異。表達差異。 可直接鏈接到可直

24、接鏈接到ExPASy 和和 SwissProt 數(shù)數(shù)據(jù)庫，進行網(wǎng)上檢索。據(jù)庫，進行網(wǎng)上檢索。 全部操作過程都可以撤銷全部操作過程都可以撤銷/重作操作，每一重作操作，每一步驟都附有說明，使用方便。步驟都附有說明，使用方便。 全面支持全面支持DIGE技術(shù)，源自技術(shù)，源自DeCyder 2D軟件。軟件。ImageMaster 2D雙向電泳分析軟件雙向電泳分析軟件2D/MS 經(jīng)典工作流程差異分析蛋白標(biāo)記蛋白鑒定體液植物微生物組織細胞分離細胞裂解勻漿預(yù)分級除雜質(zhì)濃縮定量樣品制備雙向電泳第一向第二向圖像獲取圖譜分析銀染 考染熒光染色挖膠挖膠圖譜分析自動斑點切取Spot picker切點針頭膠盤蛋白質(zhì)雙向電泳在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用柳淼1，蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀綜述，蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀綜述1.1雙向電泳技術(shù)在病原微生物藥物抗性基因功能研究中雙向電泳技術(shù)在病原微生物藥物抗性基因功能研究中的應(yīng)用的應(yīng)用 1.2 雙向電泳技術(shù)在人類惡性腫瘤研究中的進展雙向電泳技術(shù)在人類惡性腫瘤研究中的進展 1.3 雙向電泳技術(shù)在藥物作用機制研究的進展雙向電泳技術(shù)在藥物作用機制研究的進展1.1雙向電泳技術(shù)在病原微生物藥物抗性基因功能研究中的應(yīng)用 雙向電泳技術(shù)可以進行微生物抗性機理雙向電泳技術(shù)可以進行微生物抗性機理的研究的研究1.2 雙向電泳技術(shù)