蛋白質(zhì)酶工程課堂問題整理

1、蛋白質(zhì)酶工程，課堂提問整理第一章1、酶：酶是生物體內(nèi)進(jìn)行新陳代謝不可缺少的受多種因素調(diào)節(jié)控制 的具有催化能力的生物催化劑。2、酶工程的研究主要分為三個部分：酶的生產(chǎn)，酶的改性，酶的應(yīng)用3、蛋白類酶可以分為六大類，分別是 （如圖） 4、酶的命名有兩種方法：系統(tǒng)名（包括所有底物的名稱和反應(yīng)類型）、慣用名（只取一個較重要的底物名稱和反應(yīng)類型）判斷：（1）寡聚酶：由幾個或多個亞基組成，亞基牢固地聯(lián)在一起，單個亞基沒有催化活性。亞基之間以非共價鍵結(jié)合。（ ）（2）酶活力指在一定條件下酶所催化的反應(yīng)速度，反應(yīng)速度越大，意味著酶活力越高。（ ）（3）青霉素酰化酶不但能催化青霉素側(cè)鏈的水解作用，而且也能催化逆

2、反應(yīng)。（ ）（4）不同細(xì)胞最適PH不同，細(xì)胞產(chǎn)酶的最適PH與生長最適PH往往有所不同，同一種細(xì)胞，生產(chǎn)不同酶的最適PH不同。（ ）5、酶的必需基團(tuán)包括：（如圖）6、酶的專一性：指酶對底物及其催化反應(yīng)的嚴(yán)格選擇性。（可分為結(jié)構(gòu)專一性和立體異構(gòu)專一性）7、溫度對酶的雙重影響：溫度升高，酶促反應(yīng)速度升高；由于酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，溫度升高，可引起酶的變性，從而反應(yīng)速度降低 。 8、最適溫度：酶促反應(yīng)速度最快時的環(huán)境溫度。9、最適PH: 酶催化活性最大時的環(huán)境pH。10、酶促反應(yīng)速度：在適宜的反應(yīng)條件下，用單位時間內(nèi)底物的消耗或產(chǎn)物的生成量來表示。11、酶活力測定的一般步驟：(P8 )1. 根據(jù)酶催化的專

3、一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。2. 根據(jù)酶的動力學(xué)性質(zhì)，確定酶催化反應(yīng)的溫度、pH、底物濃度、激活劑濃度等反應(yīng)條件。3. 在一定的條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時記下反應(yīng)開始的時間。4. 反應(yīng)到一定的時間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測技術(shù)，測定產(chǎn)物的生成量或底物的減少量。PS:酶的活力的國際單位是IU12、酶工程：是酶的生產(chǎn)與應(yīng)用的技術(shù)過程，主要任務(wù)是通過預(yù)先設(shè)計，經(jīng)過人工操作，獲得所需的酶，并通過各種方法使酶充分發(fā)揮其催化功能。第二章1酶的生產(chǎn)方法：提取分離法，生物合成法，化學(xué)合成法2遺傳密碼子的特點(diǎn)：連續(xù)性，簡并性，普遍性與特殊性3酶的生物合成 法根

4、據(jù)使用的細(xì)胞不同分類：微生物發(fā)酵產(chǎn)酶，植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶，動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶4葡萄糖效應(yīng)的概念：細(xì)菌在含有葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上生長，優(yōu)先利用葡萄糖。待葡萄糖耗盡后才開始利用乳糖，產(chǎn)生了兩個對數(shù)生長期中間隔開一個生長延滯期的“二次生長現(xiàn)象”，這一現(xiàn)象稱葡萄糖效應(yīng)。產(chǎn)生的原因是由于葡萄糖降解物阻遏了分解乳糖酶系的合成。5實驗室中常用于表達(dá)蛋白質(zhì)的微生物：細(xì)菌，酵母菌，放線菌，霉菌6培養(yǎng)基五大要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子、水7培養(yǎng)基：是人工配制的，用于細(xì)胞培養(yǎng)和發(fā)酵的各種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。8溫度對微生物的發(fā)酵產(chǎn)酶有何影響：1、影響酶的活性2、 影響微生物細(xì)胞的生長3、影響發(fā)酵方向4、影響發(fā)酵液的

5、黏度5、溶氧和傳氧速率、反應(yīng)速率9溶氧 速率略大于耗氧速率？（等于或稍高于）10細(xì)胞對溶解氧的需求（如圖）11簡述酶生物合成的四種模式，什么是酶最理想的合成模式，為什么?通過分析比較細(xì)胞生長與酶產(chǎn)生的關(guān)系, 可以把酶生物合成的模式分為4種類型。即同步合成型，延續(xù)合成型，中期合成型和滯后合成型。（詳見P53）在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中， 為了提高產(chǎn)酶率和縮短發(fā)酵周期，最理想的合成模式應(yīng)是延續(xù)合成型。因為屬于延續(xù)合成型的酶，在發(fā)酵過程中沒有生長期和產(chǎn)酶期的明顯差別。細(xì)胞一開始生長就有酶產(chǎn)生，直至細(xì)胞生長進(jìn)入平衡期以后，酶還可以繼續(xù)合成一段較長的時間。12、影響酶生物合成的模式的主要因素是：（1）mRNA的穩(wěn)

6、定性;（2）培養(yǎng)基中阻遏物存在與否。補(bǔ)：13、利用微生物產(chǎn)酶的優(yōu)點(diǎn)1、種類多，酶種豐富，易篩選突變株2、生長周期短3、培養(yǎng)基便宜，條件簡單4、基因工程第三章1細(xì)胞破碎的方法1）機(jī)械破碎2）物理破碎3）化學(xué)破碎4）酶解破碎2酶的提取主要包括哪些方法提取方法提取對象鹽溶液提取用于提取在低濃度鹽溶液中溶解度較大的酶酸溶液提取用于提取在稀酸溶液中溶解度大，且穩(wěn)定性較好的酶堿溶液提取用于提取在稀堿溶液中溶解度大且穩(wěn)定性較好的酶有機(jī)溶劑提取用于提取那些與脂質(zhì)結(jié)合牢固或含有較多非極性基團(tuán)的酶3酶的分離純化的主要方法，依據(jù)是（1）沉淀分離：通過改變某一條件或者添加某種物質(zhì)，使酶在溶液中的溶解度降低，從溶液中析

7、出沉淀，而與其它溶質(zhì)分離（2）離心分離：離心分離是借助于離心機(jī)旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，使不同大小、不同密度 不同特性的物質(zhì)分離的技術(shù)過程（常速，高速。超速離心機(jī)）（3）過濾與膜分離：借助于過濾介質(zhì)將不同大小、不同形狀的物質(zhì)分離的技術(shù)過程。（4）層析分離：利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩個相中（5）電泳分離：根據(jù)各種蛋白質(zhì)解離、電學(xué)性質(zhì)上的差異，利用它們在電場中的遷移方向與遷移速度不同而進(jìn)行純化的一類方法。（6）萃取分離：利用物質(zhì)在水和有機(jī)溶劑的溶解度不同而分離。4什么是鹽溶鹽析鹽溶現(xiàn)象：大多數(shù)蛋白類酶都溶于水，而且在低濃度的鹽存在的條件下，酶的溶解度隨鹽濃度的升高

8、而增加的現(xiàn)象。鹽析：鹽濃度達(dá)到一定界限后，酶的溶解度隨鹽濃度的升高而降低 5什么是等電點(diǎn)沉淀法，原理是什么原理：利用兩性電解質(zhì)在等電點(diǎn)時溶解度最低和不同的電解質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)的特性，通過調(diào)節(jié)溶液的PH，使酶或蛋白質(zhì)沉淀析出，從而使酶和蛋白質(zhì)分離的方法。（等電點(diǎn)時，兩性電解質(zhì)分子的靜電荷為零，分子間的靜電斥力消除，使分子能聚集在一起而沉淀下來。）6離心方法主要包括哪些差速離心：采用不同的離心速度和離心時間，分離大小和密度相差較大的顆粒。密度梯度離心：不同物質(zhì)按沉降速度的大小形成區(qū)帶。介質(zhì)為蔗糖、甘油。分離密度相近大小不同的樣品，如蛋白。等密度梯度：介質(zhì)的梯度有適當(dāng)陡度，最大密度大于樣品的最大密

9、度，樣品各組分移動到與各自密度相同的位置。介質(zhì)為CsCl。常用于分離大小相近密度不同的樣品，如核酸。7電泳帶電粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的過程稱為電泳。（顆粒在電場中的移動速度主要決定于其本身所帶的凈電荷量，同時受顆粒形狀和顆粒大小的影響。此外，還受到電場強(qiáng)度、溶液pH值、離子強(qiáng)度及支持體的特性等外界條件的影響。 ）8什么是蛋白質(zhì)雙向電泳（自己查閱資料哦，根據(jù)個人筆記大概是說：雙向電泳是二維的，先根據(jù)等電點(diǎn)原理水平分布，后根據(jù)分子量大小垂直分布，所以雙向就是水平和垂直兩方向，這樣可以使酶分離更加徹底）9為什么SDS凝膠不受蛋白質(zhì)所帶電荷及分子形狀的影響（P106）10膜過濾

10、技術(shù)：借助于一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、不同形狀和不同特性的物質(zhì)顆粒或分子進(jìn)行分離的技術(shù)。11根據(jù)過濾介質(zhì)截留的物質(zhì)顆粒大小不同，過濾可以分為：粗慮，微濾，超濾，反滲透12層析技術(shù)利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩個相中，其中一個相為固定的(稱為固定相)，另一個相則流過此固定相(稱為流動相)并使各組分以不同速度移動，從而達(dá)到分離。13反膠束： 又稱反膠團(tuán)，是表面活性劑分布于連續(xù)有機(jī)相中形成的納米尺度的一種聚集體。（油包水）14超臨界流體是什么，有哪些性質(zhì)？是指物質(zhì)的壓力和溫度同時超過其臨界壓力(Pc)和臨界溫度(Tc)時的流體。性質(zhì)：（1）密度接近于液體，

11、這使它具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)妮腿∧芰?。?）黏度和擴(kuò)散系數(shù)與氣體相近似，而溶劑的低黏度和高擴(kuò)散系數(shù)的性質(zhì)是有利于傳質(zhì)的，具有很高的傳質(zhì)速度。（3）該流體隨著溫度與壓力的連續(xù)變化，對物質(zhì)的萃取具有選擇性。15根據(jù)超臨界萃取方法不同，分為1、等壓分離2、等溫分離3、吸附分離 16結(jié)晶三部曲第一步：形成過飽和溶液稍微越過飽和狀態(tài)，處于介穩(wěn)態(tài)， 濃縮、降溫（少有升溫）、調(diào)節(jié)pH至pI，可使溶液趨于過飽和。第二步：形成晶核過飽和溶液在一定條件下可形成極微小的有序排列的固相物，成為后續(xù)晶體生長的核心，稱為晶核。振蕩、攪拌、快速降溫可促使過飽和溶液形成晶核，有時可投入少量“晶種”微粒。第三步：晶體生長溶質(zhì)在晶

12、核周邊不斷有序排列，晶體逐步長大?？刂茥l件，如緩慢攪拌、適當(dāng)升溫使細(xì)小晶體溶解，溶質(zhì)到大晶體周圍集結(jié)生長。17、等電點(diǎn)沉淀：利用兩性電解質(zhì)在等電點(diǎn)時溶解度最低，以及不同的兩性電解質(zhì)有不同的等電點(diǎn)這一特性，通過調(diào)節(jié)溶液的pH值，使酶或雜質(zhì)沉淀析出，從而使酶與雜質(zhì)分離補(bǔ)：在固體酶制劑的生產(chǎn)過程中，為了提高酶的穩(wěn)定性，便于保存、運(yùn)輸和使用，一般都必須進(jìn)行干燥。常用的干燥方法有：真空干燥/冷凍干燥/噴霧干燥/氣流干燥/吸附干燥第四章1、什么是酶分子修飾？通過物理、化學(xué)或生物化學(xué)等方法直接使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而改變酶的某些特性的技術(shù)過程。 2、酶分子的修飾方法 金屬離子置換修飾, 大分子結(jié)合修

13、飾(共價/非共價) 側(cè)鏈基團(tuán)修飾 肽鏈有限水解修飾 氨基酸置換修飾 酶分子的物理修飾 3. 酶分子修飾的意義 提高酶的活力 、增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性 、降低或消除酶的抗原性、研究和了解酶分子中主鏈、側(cè)鏈、組成單位、金屬離子和各種物理因素對酶分子空間構(gòu)象的影響 4. 酶分子修飾的基本要求和條件 酶的穩(wěn)定性. 酶活性中心的狀況 條件：修飾反應(yīng)盡可能在酶穩(wěn)定條件下進(jìn)行，并盡量不破壞酶活性功能的必需基團(tuán)，使修飾率高，同時酶的活力回收高。（1）pH與離子強(qiáng)度 pH決定了酶蛋白分子中反應(yīng)基團(tuán)的解離狀態(tài)。由于它們的解離狀態(tài)不同，反應(yīng)性能也不同。（2）修飾反應(yīng)的溫度與時間 嚴(yán)格控制溫度和時間可以減少以至消除一些非專一

14、性的修飾反應(yīng)。（3）反應(yīng)體系中酶與修飾劑的比例 5. 酶修飾后的性質(zhì)變化熱穩(wěn)定性：提高； 抗原性：降低或消除各類失活因子的抵抗力：修飾酶對蛋白酶、抑制劑均有一定的抵抗能力，從而提高其穩(wěn)定性。半衰期：一般在體內(nèi)的半衰期得到有效延長。最適pH：大部分酶經(jīng)化學(xué)修飾后，酶的最適pH發(fā)生了變化， Km的變化：大多數(shù)酶經(jīng)修飾后，Vm沒有明顯變化，但有些酶經(jīng)修飾后，Km值變大。6.酶分子的定向進(jìn)化：是模擬自然進(jìn)化的過程，在體外進(jìn)行基因的隨機(jī)突變，建立突變基因文庫，通過人工控制條件的特殊環(huán)境。定向選擇得到具有優(yōu)良特性的酶的突變體的技術(shù)過程。7.體外定向進(jìn)化的意義理論上，蛋白質(zhì)分子蘊(yùn)藏著很大的進(jìn)化潛力，很多功能

15、有待于開發(fā)，這是酶的體外定向進(jìn)化的基本先決條件。1、 天然酶在生物體內(nèi)存在的環(huán)境與商業(yè)用酶的實際應(yīng)用環(huán)境不同。2、 人們需要某些酶的進(jìn)化性質(zhì)與生物體內(nèi)的生化反應(yīng)無關(guān)，而只是與人們的商業(yè)需求有關(guān)，這種性質(zhì)只能通過體外進(jìn)化來實現(xiàn)。8.酶分子定向進(jìn)化的方法主要包括易錯PCR技術(shù)、DNA重排技術(shù)、基因家族重排技術(shù)、9. DNA改組（DNA shuffling）技術(shù)又稱DNA重排技術(shù)，是從兩種以上的同源正突變基因出發(fā)，用酶切成隨機(jī)片段，經(jīng)過不加引物的多次PCR循環(huán)，使DNA的堿基序列重新排布而引起基因突變的技術(shù)過程。10. 突變文庫的組裝是將重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞或包裝成有感染活性的重組噬菌體的過程。1

16、1. 簡述平板篩選法及其依據(jù)平板篩選方法是將含有隨機(jī)突變基因的重組細(xì)胞，涂布在平板培養(yǎng)基上，在一定條件下培養(yǎng)，依據(jù)重組菌細(xì)胞的表型鑒定出有效突變基因的篩選方法。依據(jù)：重組細(xì)胞的表型、細(xì)胞生長情況、顏色變化情況、透明圈情況12.提高酶穩(wěn)定性的方法：分子修飾、固定化、非水相介質(zhì)催化、定向進(jìn)化13.酶的金屬離子置換修飾：把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變的修飾方法稱為金屬離子置換修飾。過程：a. 酶的分離純化：首先將欲進(jìn)行修飾的酶經(jīng)過分離純化，除去雜質(zhì)，獲得具有一定純度的酶液。 b. 除去原有的金屬離子：在經(jīng)過純化的酶液中加入一定量的金屬螯合劑，如乙二胺四乙酸（EDTA

17、）等，使酶分子中的金屬離子與EDTA等形成螯合物。通過透析、超濾、分子篩層析等方法，將EDTA-金屬螯合物從酶液中除去。此時，酶往往成為無活性狀態(tài)。 c. 加入置換離子：于去離子的酶液中加入一定量的另一種金屬離子，酶蛋白與新加入的金屬離子結(jié)合，除去多余的置換離子，就可以得到經(jīng)過金屬離子置換后的酶。14.什么是側(cè)鏈基團(tuán)修飾：將肽鏈上的某一個氨基酸換成另一個氨基酸，引起酶蛋白空間構(gòu)象的改變，從而改變酶的某些特性和功能的方法。所謂的側(cè)鏈基團(tuán)主要包括？酶蛋白的側(cè)鏈基團(tuán)是指組成蛋白質(zhì)的氨基酸殘基上的功能團(tuán)。主要包括氨基、羧基、巰基、胍基、酚基等15.什么是氨基酸置換修飾：采用某些化合物使酶蛋白側(cè)鏈上的氨

18、基發(fā)生改變，從而改變酶蛋白的空間構(gòu)象的方法稱為氨基修飾。作用：提高酶的活力，穩(wěn)定性，使酶專一性發(fā)生改變常用的方法：定點(diǎn)突變技術(shù)指在DNA序列中的某一特定位點(diǎn)上進(jìn)行堿基的改變從而獲得突變基因的操作技術(shù)16、判斷酶分子定向進(jìn)化包括隨機(jī)突變和定向選擇兩個步驟，屬于蛋白質(zhì)合理設(shè)計。（ ）第五章1. 什么是固定化酶固定化酶就是把原來游離的水溶性酶，固定于某一局部的空間或者固定于載體上，制備固定化酶的技術(shù)過程。2. 固定化酶出現(xiàn)的原因因為傳統(tǒng)的游離酶有以下缺點(diǎn)：穩(wěn)定性較差：除了某些耐高溫的酶，如-淀粉酶、Taq酶等；和胃蛋白酶等可以耐受較低的pH條件以外，大多數(shù)的酶在高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和重金屬離子等外界因素

19、影響下，都容易變性失活。 酶的一次性使用：酶一般都是在溶液中與底物反應(yīng)，這樣酶在反應(yīng)系統(tǒng)中，與底物和產(chǎn)物混在一起，反應(yīng)結(jié)束后，即使酶仍有很高的活力，也難于回收利用。這種一次性使用酶的方式，不僅使生產(chǎn)成本提高，而且難于連續(xù)化生產(chǎn)。 產(chǎn)物的分離純化較困難：酶反應(yīng)后成為雜質(zhì)與產(chǎn)物混在一起，無疑給產(chǎn)物的進(jìn)一步的分離純化帶來一定的困難。 3. 固定化酶的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：1.不溶于水，易于與產(chǎn)物分離；2可反復(fù)使用；3可連續(xù)化生產(chǎn)；4穩(wěn)定性好。缺點(diǎn)：1.固定化過程中往往會引起酶的失活2.首次投入成本較高3.大分子底物較困難4. 傳統(tǒng)酶固定化方法有哪些 以及優(yōu)缺點(diǎn)1、吸附法 利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在

20、其表面上，而使酶固定化的方法。 常用的固體吸附劑有活性炭、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅膠、羥基磷灰石等。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，條件溫和，不會引起酶變性失活，載體廉價易得，而且可反復(fù)使用。 缺點(diǎn)：由于靠物理吸附作用，結(jié)合力較弱，酶與載體結(jié)合不牢固而容易脫落，所以使用受到一定的限制2.包埋法優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，適用于大多數(shù)酶；包埋時不改變酶的結(jié)構(gòu)，不影響酶的活性。 缺點(diǎn)：在發(fā)生化學(xué)聚合反應(yīng)時包埋，酶容易失活，必須小心設(shè)計反應(yīng)條件。包埋法只適合于固定那些底物和產(chǎn)物均為小分子的酶，對于那些作用于大分子的酶來說是不合適的，因為只有小分子底物和產(chǎn)物才能通過高分子凝膠的網(wǎng)格及半透膜擴(kuò)散，而大分子底物無法與

21、網(wǎng)格中或微囊中的酶或細(xì)胞接觸。 3離子結(jié)合法優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，處理條件溫和，酶的高級結(jié)構(gòu)和活性中心的氨基酸殘基不易被破壞，能得到酶活回收率較高的固定化酶。缺點(diǎn)：載體和酶的結(jié)合力較弱，容易受緩沖液種類或pH的影響，在離子強(qiáng)度較高的條件下進(jìn)行反應(yīng)時，往往會發(fā)生酶從載體上脫落的現(xiàn)象。4.交聯(lián)法優(yōu)點(diǎn)：交聯(lián)法制備的固定化酶或固定化菌體結(jié)合牢固，可以長時間使用。缺點(diǎn)：由于交聯(lián)反應(yīng)條件較激烈，酶分子的多個基團(tuán)被交聯(lián)，致使酶活力損失較大，而且制備成的固定化酶或固定化菌體的顆粒較小，給使用帶來不便。為此，可將交聯(lián)法與吸附法或包埋法聯(lián)合使用，以取長補(bǔ)短。 5. 固定化細(xì)胞及其原理固定在載體上，并在一定空間范圍內(nèi)進(jìn)行

22、生命活動的細(xì)胞，稱為固定化細(xì)胞。原理：密集而有一定程度分化的、生長緩慢的細(xì)胞能比分散而無結(jié)構(gòu)的、生長迅速的細(xì)胞積累更多的次生代謝產(chǎn)物。補(bǔ)：優(yōu)點(diǎn)與懸浮培養(yǎng)相比 1可以消除或極大地減弱營養(yǎng)液流動引起的切變力；2細(xì)胞生長緩慢，使次級代謝物（對人類有用）的產(chǎn)量增高；3固定化之后使細(xì)胞間的接觸緊密，氣體和營養(yǎng)供應(yīng)形成梯度，有利于次生代謝進(jìn)行；4通過培養(yǎng)液的循環(huán)供應(yīng)，一方面可以保障細(xì)胞的營養(yǎng)需要；另一方面可以避免由于代謝產(chǎn)物的積累而對細(xì)胞代謝造成反饋抑制；5便于操作培養(yǎng)基的組分和比例次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量 ；調(diào)節(jié)較成批培養(yǎng)簡單：避免細(xì)胞受損和污染 ；容易建立化學(xué)和物理上的梯度6便于次生代謝物的收集l 缺點(diǎn) 必須

23、保持菌體的完整，需防止菌體的自溶，否則影響產(chǎn)物的純度； 必須抑制細(xì)胞內(nèi)蛋白酶對目的酶的分解； 胞內(nèi)多酶的存在，會形成副產(chǎn)物； 載體、細(xì)胞膜或細(xì)胞壁會造成底物滲透與擴(kuò)散的障礙等。6. 酶固定化后，性質(zhì)會發(fā)生哪些改變，原因是什么1、固定化后酶活力降低：原因 酶分子在固定化過程中，空間構(gòu)象會有所變化，甚至影響了活性中心的氨基酸； 固定化后，酶分子空間自由度受到限制(空間位阻)，會直接影響到活性中心對底物的定位作用； 內(nèi)擴(kuò)散阻力使底物分子與活性中心的接近受阻； 包埋時酶被高分子物質(zhì)半透膜包圍，大分子底物不能透過膜與酶接近。2、酶穩(wěn)定性提高：表現(xiàn)：（1）熱穩(wěn)定性提高（2）對有機(jī)試劑及酶抑制劑的穩(wěn)定性提高

24、；（3）對pH、蛋白酶、貯存和操作條件的穩(wěn)定性提高原因：固定化后酶分子與載體多點(diǎn)連接，可防止酶分子伸展變形；酶活力的緩慢釋放；抑制酶的自降解。將酶與固態(tài)載體結(jié)合后，由于酶失去了分子間相互作用的機(jī)會，從而抑制了降解。3. 固定化酶的最適溫度提高：與固定化方法和載體有關(guān)4. 固定化酶的最適pH變化 ：原因：載體的帶點(diǎn)性質(zhì)，酶催化反應(yīng)產(chǎn)物的性質(zhì)（一般說來，用帶負(fù)電荷載體(陰離子聚合物)制備的固定化酶，其最適pH較游離酶偏高）5. 固定化酶的專一性變化 原因：由于空間位阻作用引起的。第六章1、酶非水相催化：酶在非水介質(zhì)中的催化作用2、酶非水相催化類型主要包括：有機(jī)介質(zhì)的酶催化；氣相介質(zhì)的酶催化；超臨界

25、流體介質(zhì)中的酶催化；離子液介質(zhì)中的酶催化3、必需水:維持酶分子完整空間構(gòu)象所必需的最低水量;4、最適水量：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的動力學(xué)剛性和熱力學(xué)穩(wěn)定性之間的最佳點(diǎn)平衡點(diǎn)，酶活性最大時酶的含水量。5、水活度：體系中水的逸度與純水逸度之比說明：水活度與溶劑極性大小無關(guān)，最適含水量與溶劑極性成正比，故采用水活度作參數(shù)更確切；6、有機(jī)介質(zhì)中含兩類水：游離水和結(jié)合水7、判斷：1、同一種酶，反應(yīng)系統(tǒng)的最適水量與有機(jī)溶劑的種類，酶的純度，固定化酶的載體性質(zhì)和修飾性質(zhì)有關(guān)。（ ）2、一般認(rèn)為，酶在疏水性大的介質(zhì)中反應(yīng)活性高，酶催化反應(yīng)在非極性，疏水性有機(jī)溶劑中更易進(jìn)行。（ ）3、酶在不同的有機(jī)溶劑中其活性、穩(wěn)定性與底物專一性均保持不變。（ ）