第五章DNA重組

1、第五章 DNA重組同源重組同源重組Homologous recombination 位點(diǎn)專一性重組位點(diǎn)專一性重組Site-specific recombination 轉(zhuǎn)座重組轉(zhuǎn)座重組Transpositionn生物進(jìn)化需要可遺傳的變異不斷產(chǎn)生生物進(jìn)化需要可遺傳的變異不斷產(chǎn)生,變變化的根本原因是突變化的根本原因是突變,但就每個(gè)個(gè)體而言但就每個(gè)個(gè)體而言發(fā)生突變的幾率畢竟很低。涉及到的基發(fā)生突變的幾率畢竟很低。涉及到的基因數(shù)目非常有限，如果只有突變而沒(méi)有因數(shù)目非常有限，如果只有突變而沒(méi)有不同個(gè)體間的基因交流，則生物體難以不同個(gè)體間的基因交流，則生物體難以迅速組裝產(chǎn)生最能適應(yīng)環(huán)境條件的基因迅速組裝產(chǎn)

2、生最能適應(yīng)環(huán)境條件的基因組合。組合。n而且，通過(guò)不同個(gè)體間的基因交換，可而且，通過(guò)不同個(gè)體間的基因交換，可以保證遺傳的多樣性，從而為選擇奠定以保證遺傳的多樣性，從而為選擇奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。物質(zhì)基礎(chǔ)。第一節(jié)第一節(jié) 同源重組同源重組Homologous recombination n同源重組指由兩條同源區(qū)的同源重組指由兩條同源區(qū)的DNA分子，通過(guò)配分子，通過(guò)配對(duì)、鏈斷裂和再連接，而產(chǎn)生的片段間交換的對(duì)、鏈斷裂和再連接，而產(chǎn)生的片段間交換的過(guò)程。過(guò)程。n真核生物非姐妹染色單體之間的交換，姐妹染真核生物非姐妹染色單體之間的交換，姐妹染色單體的交換，細(xì)菌及某些低等真核生物的轉(zhuǎn)色單體的交換，細(xì)菌及某些低等真核

3、生物的轉(zhuǎn)化，細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、噬菌體的重組都屬于化，細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合、噬菌體的重組都屬于這一類型。其中，這一類型。其中，E.coli等細(xì)菌的同源重組又等細(xì)菌的同源重組又稱為依賴稱為依賴RecA的重組。的重組。n真核生物同源重組也稱交換（真核生物同源重組也稱交換（crossing over），是指減數(shù)分裂（），是指減數(shù)分裂（meiosis）過(guò)）過(guò)程中染色體間遺傳物質(zhì)的交換。程中染色體間遺傳物質(zhì)的交換。n其特征是發(fā)生在同源其特征是發(fā)生在同源DNA序列之間。重序列之間。重組酶能以兩個(gè)組酶能以兩個(gè)DNA分子中任何一對(duì)同源分子中任何一對(duì)同源序列作底物進(jìn)行交換。序列作底物進(jìn)行交換。特征特征涉及同源序列間的

4、聯(lián)會(huì)配對(duì)，且交換的片段較大涉及同源序列間的聯(lián)會(huì)配對(duì)，且交換的片段較大涉及涉及DNA分子在特定的交換位點(diǎn)發(fā)生分子在特定的交換位點(diǎn)發(fā)生斷裂和錯(cuò)接斷裂和錯(cuò)接的生化過(guò)程的生化過(guò)程異源雙鏈區(qū)的生成異源雙鏈區(qū)的生成存在重組熱點(diǎn)存在重組熱點(diǎn)需要重組酶需要重組酶單鏈單鏈DNA分子或單鏈分子或單鏈DNA末端是交換發(fā)生的重末端是交換發(fā)生的重要信號(hào)要信號(hào)一、同源重組一、同源重組的分子模型的分子模型n1、斷裂、斷裂-復(fù)合復(fù)合nBreakage and reunion2、異源雙鏈、異源雙鏈在重組位點(diǎn)上，每在重組位點(diǎn)上，每個(gè)雙鏈都有一個(gè)由個(gè)雙鏈都有一個(gè)由兩個(gè)親本兩個(gè)親本DNA分分子中的一股單鏈共子中的一股單鏈共同組成的雙

5、鏈區(qū)域，同組成的雙鏈區(qū)域，這段區(qū)域稱為異源這段區(qū)域稱為異源雙鏈雙鏈DNA（heteroduplex DNA）3、分支遷移、分支遷移兩個(gè)雙螺旋形成的交叉連接很容易以拉鏈?zhǔn)叫?yīng)擴(kuò)散，也就是鏈交換可沿著雙鏈滑動(dòng)，這個(gè)過(guò)程稱為分支遷移（branch migration）4、Holliday結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)n重組中連接兩個(gè)重組中連接兩個(gè)DNA雙鏈的交換雙鏈的交換中間物含有中間物含有4股股DNA鏈，在其連鏈，在其連接處為了轉(zhuǎn)換配接處為了轉(zhuǎn)換配對(duì)所形成交叉鏈對(duì)所形成交叉鏈的連接點(diǎn)稱為的連接點(diǎn)稱為Holliday結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)。5、連接分子的拆分、連接分子的拆分n鏈交換形成的連接分子必須拆分鏈交換形成的連接分子必須拆分（

6、resolution），），彼此分離為雙鏈彼此分離為雙鏈DNA分子。由于交聯(lián)在一起的兩條雙鏈分子。由于交聯(lián)在一起的兩條雙鏈DNA分子實(shí)際上處在不斷地異構(gòu)化中，切口分子實(shí)際上處在不斷地異構(gòu)化中，切口可能在兩對(duì)同源鏈中任意一對(duì)上發(fā)生?？赡茉趦蓪?duì)同源鏈中任意一對(duì)上發(fā)生。n根據(jù)鏈裂斷切開(kāi)的方式不同，得到的重組產(chǎn)物也不根據(jù)鏈裂斷切開(kāi)的方式不同，得到的重組產(chǎn)物也不同。如果切開(kāi)的鏈并非原來(lái)斷裂的鏈，重組體異源同。如果切開(kāi)的鏈并非原來(lái)斷裂的鏈，重組體異源雙鏈區(qū)的兩側(cè)來(lái)自不同親本雙鏈區(qū)的兩側(cè)來(lái)自不同親本DNA，則稱為拼接重組，則稱為拼接重組體（體（splice recombinant），此種重組又叫做），此種重

7、組又叫做交交互重組互重組（reciprocal recombination）。）。n但如果切開(kāi)的鏈與原來(lái)斷裂的是同一條鏈，重組體但如果切開(kāi)的鏈與原來(lái)斷裂的是同一條鏈，重組體含有一段異源雙鏈區(qū)，其兩側(cè)來(lái)自同一親本含有一段異源雙鏈區(qū)，其兩側(cè)來(lái)自同一親本DNA，則稱為則稱為片段重組體片段重組體（patch recombinant）。）。 n連接分子可以以兩種交替方式進(jìn)行拆分，兩連接分子可以以兩種交替方式進(jìn)行拆分，兩側(cè)基因或是發(fā)生交互重組，或是無(wú)重組發(fā)生。側(cè)基因或是發(fā)生交互重組，或是無(wú)重組發(fā)生。n但無(wú)論哪種拆分方式都說(shuō)明一個(gè)原則，即鏈但無(wú)論哪種拆分方式都說(shuō)明一個(gè)原則，即鏈交換后總會(huì)在兩條交換后總會(huì)在兩

8、條DNA分子上留下一段異源分子上留下一段異源雙鏈區(qū)，但側(cè)翼序列的重組未必與之同時(shí)發(fā)雙鏈區(qū)，但側(cè)翼序列的重組未必與之同時(shí)發(fā)生。生。n不同生物體同源重組的具體過(guò)程雖有不同，不同生物體同源重組的具體過(guò)程雖有不同，但基本步驟大致相同。兩但基本步驟大致相同。兩DNA分子只要含有分子只要含有一段堿基序列大體類似的同源區(qū)，就可以發(fā)一段堿基序列大體類似的同源區(qū)，就可以發(fā)生重組。生重組。 二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組n細(xì)菌可以通過(guò)多種途徑進(jìn)行細(xì)胞間基因細(xì)菌可以通過(guò)多種途徑進(jìn)行細(xì)胞間基因轉(zhuǎn)移，并通過(guò)基因重組以適應(yīng)隨時(shí)改變轉(zhuǎn)移，并通過(guò)基因重組以適應(yīng)隨時(shí)改變的環(huán)境。細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移主要有的環(huán)境。細(xì)菌

9、的基因轉(zhuǎn)移主要有4種機(jī)制：種機(jī)制：接合（接合（conjugation）、）、n轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)化（transformation）、）、n轉(zhuǎn)導(dǎo)（轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）、）、n細(xì)胞融合（細(xì)胞融合（cell fusion）。）。 1、細(xì)菌的接合作用細(xì)菌的接合作用 細(xì)菌的細(xì)胞相互接觸時(shí)遺傳信息可由一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一細(xì)胞，稱為接合作細(xì)菌的細(xì)胞相互接觸時(shí)遺傳信息可由一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一細(xì)胞，稱為接合作用。供體細(xì)胞為雄性，受體為雌性。通過(guò)接合而轉(zhuǎn)移用。供體細(xì)胞為雄性，受體為雌性。通過(guò)接合而轉(zhuǎn)移DNA的能力由接合質(zhì)粒的能力由接合質(zhì)粒提供，與接合功能有關(guān)的蛋白質(zhì)均由接合質(zhì)粒所編碼。能夠促使染色體基因提供，與接合

10、功能有關(guān)的蛋白質(zhì)均由接合質(zhì)粒所編碼。能夠促使染色體基因轉(zhuǎn)移的接合質(zhì)粒稱為轉(zhuǎn)移的接合質(zhì)粒稱為致育因子致育因子（fertility factor），簡(jiǎn)稱性因子或），簡(jiǎn)稱性因子或F因子。因子。 致育因子（致育因子（F因子）通過(guò)結(jié)合作用由因子）通過(guò)結(jié)合作用由F+細(xì)胞向細(xì)胞向F-細(xì)胞轉(zhuǎn)移，細(xì)胞轉(zhuǎn)移，F(xiàn)質(zhì)粒約質(zhì)粒約1/3的基因的基因與轉(zhuǎn)移有關(guān)，與轉(zhuǎn)移有關(guān)，traS和和traT基因編碼表面排斥蛋白，阻止基因編碼表面排斥蛋白，阻止F+細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)移，細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)移，F(xiàn)+細(xì)胞的性菌毛與細(xì)胞的性菌毛與F-細(xì)胞結(jié)合后收縮，使二者靠近，細(xì)胞結(jié)合后收縮，使二者靠近，TraD蛋白構(gòu)成轉(zhuǎn)移的通道，蛋白構(gòu)成轉(zhuǎn)移的通道，在在T

11、raI在在TraY的幫助下結(jié)合到轉(zhuǎn)移起點(diǎn)的幫助下結(jié)合到轉(zhuǎn)移起點(diǎn)oriT上，切開(kāi)一條鏈，使其上，切開(kāi)一條鏈，使其5端進(jìn)入受端進(jìn)入受體細(xì)胞，并合成其互補(bǔ)鏈，使體細(xì)胞，并合成其互補(bǔ)鏈，使F-細(xì)胞轉(zhuǎn)化為細(xì)胞轉(zhuǎn)化為F+細(xì)胞，給體細(xì)胞中的單鏈也可以細(xì)胞，給體細(xì)胞中的單鏈也可以合成互補(bǔ)鏈。合成互補(bǔ)鏈。 在細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移在細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移的不同時(shí)間將配對(duì)細(xì)的不同時(shí)間將配對(duì)細(xì)胞分開(kāi)，可以確定基胞分開(kāi)，可以確定基因在染色體上的位置。因在染色體上的位置。F F質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA可以通過(guò)重可以通過(guò)重組整合到受體的染色組整合到受體的染色體中，使受體菌成為體中，使受體菌成為高頻重組（高頻重組（HrfHrf) )菌株，菌株，若

12、若F F質(zhì)粒的質(zhì)粒的DNADNA未能完未能完整地進(jìn)入受體菌，則整地進(jìn)入受體菌，則受體菌不能轉(zhuǎn)化為受體菌不能轉(zhuǎn)化為F F+ +, , F F質(zhì)粒的質(zhì)粒的DNADNA可以被切可以被切割出來(lái)，有時(shí)可攜帶割出來(lái)，有時(shí)可攜帶宿主菌的染色體宿主菌的染色體DNADNA，稱作稱作F F因子，因子， F F因因子攜帶的基因可在受子攜帶的基因可在受體菌表達(dá)。體菌表達(dá)。2、遺傳轉(zhuǎn)化、遺傳轉(zhuǎn)化 n遺傳轉(zhuǎn)化遺傳轉(zhuǎn)化（genetic transformation）是指）是指細(xì)菌品系由于吸收了外源細(xì)菌品系由于吸收了外源DNA（轉(zhuǎn)化因子）（轉(zhuǎn)化因子）而發(fā)生遺傳性狀的改變現(xiàn)象。而發(fā)生遺傳性狀的改變現(xiàn)象。n具有攝取周圍環(huán)境中游離

13、具有攝取周圍環(huán)境中游離DNA分子能力的細(xì)分子能力的細(xì)菌細(xì)胞稱為菌細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞（competent cell）。）。n自然條件下感受態(tài)的形成需要自然條件下感受態(tài)的形成需要10多種蛋白質(zhì)多種蛋白質(zhì)參與，實(shí)驗(yàn)室常用高濃度的參與，實(shí)驗(yàn)室常用高濃度的Ca2+處理使細(xì)菌處理使細(xì)菌形成感受態(tài)。形成感受態(tài)。3、細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)n轉(zhuǎn)導(dǎo)（轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）是通）是通過(guò)噬菌體將細(xì)菌基因從供體過(guò)噬菌體將細(xì)菌基因從供體轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的過(guò)程。轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的過(guò)程。4、細(xì)菌的細(xì)胞融合、細(xì)菌的細(xì)胞融合在有些細(xì)菌的種屬中可發(fā)生由在有些細(xì)菌的種屬中可發(fā)生由細(xì)胞質(zhì)膜融合導(dǎo)致的基因轉(zhuǎn)細(xì)胞質(zhì)膜融合導(dǎo)

14、致的基因轉(zhuǎn)移和重組。移和重組。 三、大腸桿菌重組的分子基礎(chǔ)大腸桿菌重組的分子基礎(chǔ)n在細(xì)菌重組反應(yīng)中活性最為明顯的是由在細(xì)菌重組反應(yīng)中活性最為明顯的是由大腸桿菌染色體上大腸桿菌染色體上rec 基因和基因和ruv 基因基因編碼的一些酶。編碼的一些酶。n其中，主要有其中，主要有Rec A 蛋白，蛋白，Rec BCD酶，酶，Ruv ABC酶等到。酶等到。1、Rec A 蛋白nRec A蛋白是催化重組基本反應(yīng)的酶。蛋白是催化重組基本反應(yīng)的酶。RecA有有兩個(gè)主要的功能：誘發(fā)兩個(gè)主要的功能：誘發(fā)SOS反應(yīng)和促進(jìn)反應(yīng)和促進(jìn)DNA單單鏈的同化（鏈的同化（assimilation）。）。單鏈同化單鏈同化是一個(gè)分

15、是一個(gè)分子的單鏈侵入到另一個(gè)分子的雙螺旋上，通過(guò)取子的單鏈侵入到另一個(gè)分子的雙螺旋上，通過(guò)取代雙螺旋上的原始鏈而形成異源雙鏈。代雙螺旋上的原始鏈而形成異源雙鏈。n當(dāng)當(dāng)RecA與與DNA單鏈結(jié)合時(shí)，數(shù)千單鏈結(jié)合時(shí)，數(shù)千RecA單體協(xié)單體協(xié)同聚集在單鏈上形成螺旋狀纖絲（同聚集在單鏈上形成螺旋狀纖絲（helical filament）。）。Rec F、Rec O和和Rec R蛋白調(diào)節(jié)蛋白調(diào)節(jié)Rec A纖絲的裝配和拆卸。纖絲的裝配和拆卸。 Rec A催化的單鏈同化nRecA蛋白分子質(zhì)量為蛋白分子質(zhì)量為38 000da，它與單鏈它與單鏈DNA結(jié)合形成的螺旋纖絲結(jié)合形成的螺旋纖絲每圈含每圈含6個(gè)單體，螺旋

16、直徑個(gè)單體，螺旋直徑10nm，堿基間距堿基間距0.5nm。此復(fù)合物可以與。此復(fù)合物可以與雙鏈雙鏈DNA作用，部分解旋以便閱讀作用，部分解旋以便閱讀堿基序列，迅速掃掠尋找與單鏈互堿基序列，迅速掃掠尋找與單鏈互補(bǔ)的序列。互補(bǔ)序列一旦被找到，補(bǔ)的序列?；パa(bǔ)序列一旦被找到，雙鏈進(jìn)一步被解旋以允許轉(zhuǎn)換堿基雙鏈進(jìn)一步被解旋以允許轉(zhuǎn)換堿基配對(duì)，使單鏈與雙鏈中的互補(bǔ)鏈配配對(duì)，使單鏈與雙鏈中的互補(bǔ)鏈配對(duì)，同源鏈被置換出來(lái)對(duì)，同源鏈被置換出來(lái) RecA蛋白引起蛋白引起DNA同源重組同源重組的模型的模型2、Rec BCD酶n亦稱核酸外切酶亦稱核酸外切酶V，它通過(guò)，它通過(guò)chi序列識(shí)別序列識(shí)別靶位點(diǎn)，這種酶的各個(gè)亞基

17、是由靶位點(diǎn)，這種酶的各個(gè)亞基是由rec B，rec C，rec D基因編碼的產(chǎn)物。它是一基因編碼的產(chǎn)物。它是一種有效降解種有效降解DNA的核酸酶，可以在單鏈的核酸酶，可以在單鏈結(jié)合蛋白的存在下松開(kāi)結(jié)合蛋白的存在下松開(kāi)DNA雙鏈，同時(shí)雙鏈，同時(shí)還具有還具有ATP酶活性，它在重組中的作用酶活性，它在重組中的作用是提供具有是提供具有3-末端的單鏈區(qū)域。末端的單鏈區(qū)域。Chi 位點(diǎn)位點(diǎn)GCTGGTGGCGACCACCsites3、Ruv A B CnRuv A 識(shí)別識(shí)別Holliday結(jié)構(gòu)連接點(diǎn)。結(jié)構(gòu)連接點(diǎn)。nRuv B 是一種是一種ATP酶，為分支遷移提供酶，為分支遷移提供動(dòng)力。動(dòng)力。nRuv C

18、是專一識(shí)別是專一識(shí)別Holliday結(jié)構(gòu)連接點(diǎn)結(jié)構(gòu)連接點(diǎn)的核酸內(nèi)切酶，它在體外切斷連接點(diǎn)以的核酸內(nèi)切酶，它在體外切斷連接點(diǎn)以拆分重組中間體。拆分重組中間體。 在大腸桿菌中由在大腸桿菌中由RuvA,RuvBRuvA,RuvB和和RuvCRuvC蛋白參與蛋白參與的同源重組。的同源重組。 （a a） RuvARuvA四聚體的圖解。四個(gè)亞基形成的結(jié)構(gòu)四聚體的圖解。四個(gè)亞基形成的結(jié)構(gòu)像四個(gè)花瓣的花。像四個(gè)花瓣的花。 （b b） RuvA/RuvBRuvA/RuvB的作用：的作用： （左）（左）RuvARuvA四聚體結(jié)合到四聚體結(jié)合到HollidayHolliday位點(diǎn)；位點(diǎn)； （中）（中）RuvBRuv

19、B六聚體結(jié)合到雜合雙螺旋的兩對(duì)面，六聚體結(jié)合到雜合雙螺旋的兩對(duì)面，DNADNA穿過(guò)其中心，穿過(guò)其中心， RuvBRuvB六聚體的作用像馬達(dá)，促進(jìn)超六聚體的作用像馬達(dá)，促進(jìn)超螺旋分叉點(diǎn)通過(guò)復(fù)合體移動(dòng)。螺旋分叉點(diǎn)通過(guò)復(fù)合體移動(dòng)。 （右）（右）RuvCRuvC結(jié)合到結(jié)合到HollidayHolliday位點(diǎn)，由其核酸酶活位點(diǎn)，由其核酸酶活性切斷核酸鏈，切割位點(diǎn)由剪切體辨認(rèn)。性切斷核酸鏈，切割位點(diǎn)由剪切體辨認(rèn)。 （c c） RuvARuvA四聚體的電荷分布，藍(lán)色表示正電荷，四聚體的電荷分布，藍(lán)色表示正電荷，紅色表示負(fù)電荷，注意正電荷位于四聚體的表面，有紅色表示負(fù)電荷，注意正電荷位于四聚體的表面，有四個(gè)

20、負(fù)電荷區(qū)域位于其中心。四個(gè)負(fù)電荷區(qū)域位于其中心。 （d d） 假設(shè)的假設(shè)的RuvARuvA四聚體與四聚體與HollidayHolliday位點(diǎn)結(jié)合的位點(diǎn)結(jié)合的結(jié)構(gòu)模型。結(jié)構(gòu)模型。RecBCD 和和RecA 的共同作用的共同作用n單鏈侵入單鏈侵入Single-strand uptaken鏈交換鏈交換Single-strand assimilation重組修復(fù)重組修復(fù)在復(fù)制叉處在復(fù)制叉處重組水平的重組水平的修復(fù)修復(fù)第二節(jié)位點(diǎn)特異性重組第二節(jié)位點(diǎn)特異性重組n位點(diǎn)特異性重組位點(diǎn)特異性重組（Site-specific recombination）需要在特定的位點(diǎn)上發(fā)生斷裂和重接，從而產(chǎn)生精確需要在特定的

21、位點(diǎn)上發(fā)生斷裂和重接，從而產(chǎn)生精確的重排。的重排。n 位點(diǎn)特異性重組廣泛存在于各類細(xì)胞中，起著十分位點(diǎn)特異性重組廣泛存在于各類細(xì)胞中，起著十分特殊的作用，彼此有很大的不同。它們的作用包括某特殊的作用，彼此有很大的不同。它們的作用包括某些基因表達(dá)的調(diào)節(jié)、發(fā)育過(guò)程中程序性些基因表達(dá)的調(diào)節(jié)、發(fā)育過(guò)程中程序性DNA重排，重排，以及有些病毒和質(zhì)粒以及有些病毒和質(zhì)粒DNA復(fù)制循環(huán)過(guò)程中發(fā)生的整復(fù)制循環(huán)過(guò)程中發(fā)生的整合與切除等。此過(guò)程往往發(fā)生在一個(gè)特定的短合與切除等。此過(guò)程往往發(fā)生在一個(gè)特定的短（20200bp）DNA序列內(nèi)（重組位點(diǎn)），并且有序列內(nèi)（重組位點(diǎn)），并且有特異的酶（重組酶）和輔助因子對(duì)其識(shí)別和

22、作用。特異的酶（重組酶）和輔助因子對(duì)其識(shí)別和作用。 位點(diǎn)特異性重組的結(jié)果決定于重組位點(diǎn)的位置和方向。如果重組位點(diǎn)特異性重組的結(jié)果決定于重組位點(diǎn)的位置和方向。如果重組位點(diǎn)以相反方向存在于同一位點(diǎn)以相反方向存在于同一DNA分子上，重組結(jié)果發(fā)生倒位。重分子上，重組結(jié)果發(fā)生倒位。重組位點(diǎn)以相同方向存在于同一組位點(diǎn)以相同方向存在于同一DNA分子上，重組發(fā)生切除；在不分子上，重組發(fā)生切除；在不同分子上，重組發(fā)生整合同分子上，重組發(fā)生整合 一、噬菌體噬菌體DNA的整合與切除的整合與切除n噬菌體噬菌體DNA進(jìn)入宿主大腸桿菌細(xì)胞后存在溶原和裂進(jìn)入宿主大腸桿菌細(xì)胞后存在溶原和裂解兩條途徑，二者的最初過(guò)程是相同的，

23、都要求早期解兩條途徑，二者的最初過(guò)程是相同的，都要求早期基因的表達(dá)，為溶原和裂解途徑的歧化做好準(zhǔn)備。兩基因的表達(dá)，為溶原和裂解途徑的歧化做好準(zhǔn)備。兩種生活周期的選擇取決于種生活周期的選擇取決于CI和和Cro蛋白相互拮抗的結(jié)蛋白相互拮抗的結(jié)果。果。CI蛋白抑制除自身外所有噬菌體基因的轉(zhuǎn)錄，如蛋白抑制除自身外所有噬菌體基因的轉(zhuǎn)錄，如果果CI蛋白占優(yōu)勢(shì)，溶原狀態(tài)就得到建立和維持。蛋白占優(yōu)勢(shì)，溶原狀態(tài)就得到建立和維持。Cro蛋白抑制蛋白抑制CI基因的轉(zhuǎn)錄，它占優(yōu)勢(shì)噬菌體即進(jìn)入繁殖基因的轉(zhuǎn)錄，它占優(yōu)勢(shì)噬菌體即進(jìn)入繁殖周期，并導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解。周期，并導(dǎo)致宿主細(xì)胞裂解。噬菌體的整合發(fā)生在噬噬菌體的整合發(fā)生

24、在噬菌體和宿主染色體的特定位點(diǎn)，因此是一種特異位點(diǎn)菌體和宿主染色體的特定位點(diǎn)，因此是一種特異位點(diǎn)重組。整合的原噬菌體隨宿主染色體一起復(fù)制并傳遞重組。整合的原噬菌體隨宿主染色體一起復(fù)制并傳遞給后代。但在紫外線照射或升溫等因素誘導(dǎo)下，原噬給后代。但在紫外線照射或升溫等因素誘導(dǎo)下，原噬菌體可被切除下來(lái)，進(jìn)入裂解途徑，釋放出噬菌體顆菌體可被切除下來(lái)，進(jìn)入裂解途徑，釋放出噬菌體顆粒。粒。 整合和切除過(guò)程是在細(xì)菌DNA和噬菌體DNA專一性的附著位點(diǎn)(attachment site ,att)上進(jìn)行的n細(xì)菌的附著點(diǎn)稱att B,由序列BOB組成,噬菌體的附著位點(diǎn)稱att P,由序列POP組成。n其中O序列是

25、att B和att P所共有的，所以稱為核心序列（core sequence)n重組后形成兩個(gè)新att位點(diǎn)，att L (BOP) 和att R (POB)n位點(diǎn)專一性重組反應(yīng)的定向特征取決于重組位點(diǎn)的識(shí)別。盡管整合和切除過(guò)程是可逆的，但反應(yīng)導(dǎo)向則由不同條件決定的。n整合過(guò)程要求在att B和 att P之間進(jìn)行識(shí)別,而切除過(guò)程則在att L 和 att R之間識(shí)別1、整合反應(yīng)n噬菌體編碼一種酶噬菌體編碼一種酶整合酶整合酶（ integrase, INT)，它能切斷，并它能切斷，并能使它重新連接從而直接將噬菌體能使它重新連接從而直接將噬菌體插入大腸桿菌染色體中，通過(guò)兩條插入大腸桿菌染色體中，通

26、過(guò)兩條的專一位點(diǎn)上的重組合并成一個(gè)的專一位點(diǎn)上的重組合并成一個(gè)環(huán)狀分子整合作用需要由大腸桿菌編環(huán)狀分子整合作用需要由大腸桿菌編碼的整合宿主因子碼的整合宿主因子（integration host factor）的共同作用的共同作用模型說(shuō)明模型說(shuō)明att P和和 att B部位進(jìn)行了交叉斷裂，部位進(jìn)行了交叉斷裂，互補(bǔ)單鏈末端進(jìn)行交叉雜交。互補(bǔ)單鏈末端進(jìn)行交叉雜交。 DNA交換點(diǎn)交換點(diǎn)之間的距離為之間的距離為7bp，n在位點(diǎn)專一性重組中，有關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)合在位點(diǎn)專一性重組中，有關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)合在在att部位的特定位點(diǎn)上。部位的特定位點(diǎn)上。n當(dāng)當(dāng)INT和和IHF蛋白結(jié)合在蛋白結(jié)合在att P位點(diǎn)時(shí)形位點(diǎn)時(shí)形成

27、的復(fù)合物稱為整合體（成的復(fù)合物稱為整合體（intasome）。）。整合體就是捕獲整合體就是捕獲att B的中間體。的中間體。nINT蛋白分子可能作為整合體的一部分蛋白分子可能作為整合體的一部分結(jié)合到結(jié)合到att B 的核心位點(diǎn)上，說(shuō)明的核心位點(diǎn)上，說(shuō)明att P和和att B的最初識(shí)別不是直接取決于的最初識(shí)別不是直接取決于DNA的同源性，而是由的同源性，而是由INT蛋白識(shí)別兩個(gè)蛋白識(shí)別兩個(gè)att序列的能力來(lái)決定的，當(dāng)需要鏈交換反序列的能力來(lái)決定的，當(dāng)需要鏈交換反應(yīng)時(shí)，同源序列在此階段才顯得重要。應(yīng)時(shí)，同源序列在此階段才顯得重要。2、切除反應(yīng)（excision）n當(dāng)誘發(fā)原噬菌體生長(zhǎng)時(shí)，整合作用發(fā)

28、生當(dāng)誘發(fā)原噬菌體生長(zhǎng)時(shí)，整合作用發(fā)生逆轉(zhuǎn)，這個(gè)過(guò)程稱為切除逆轉(zhuǎn)，這個(gè)過(guò)程稱為切除（excise）。n切除需要切除需要Xis蛋白，它抑制整合作用。蛋白，它抑制整合作用。nINT，XIS，IHF連在一起覆蓋了全部連在一起覆蓋了全部att P，從而不利于進(jìn)行整合反應(yīng)。，從而不利于進(jìn)行整合反應(yīng)。n當(dāng)噬菌體進(jìn)入溶源狀態(tài)時(shí)優(yōu)先發(fā)生整合當(dāng)噬菌體進(jìn)入溶源狀態(tài)時(shí)優(yōu)先發(fā)生整合反應(yīng)。而當(dāng)噬菌體進(jìn)入裂解周期時(shí)則切反應(yīng)。而當(dāng)噬菌體進(jìn)入裂解周期時(shí)則切除反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，通過(guò)控制除反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，通過(guò)控制INT和和XIS的存的存量發(fā)生適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)。量發(fā)生適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)。二、細(xì)菌的特異位點(diǎn)重組二、細(xì)菌的特異位點(diǎn)重組n鼠傷寒沙門氏桿菌（鼠傷寒

29、沙門氏桿菌（Salmonella typhimurium）由）由鞭毛蛋白決定的鞭毛蛋白決定的H抗原有兩種，分別為抗原有兩種，分別為H1鞭毛蛋白和鞭毛蛋白和H2鞭毛蛋白。鞭毛蛋白。n遺傳分析表明，這種抗原相位的改變是由一段遺傳分析表明，這種抗原相位的改變是由一段995bp的的DNA，稱為，稱為H片段（片段（H segment）發(fā)生倒位所決定。）發(fā)生倒位所決定。hix基因編碼特異的重組酶，基因編碼特異的重組酶，即倒位酶（即倒位酶（invertase）Hin。該酶為相對(duì)分子質(zhì)量。該酶為相對(duì)分子質(zhì)量22 000亞基的二聚體，分亞基的二聚體，分別結(jié)合在兩個(gè)別結(jié)合在兩個(gè)hix位點(diǎn)上，位點(diǎn)上，并由反向刺激因

30、子并由反向刺激因子Fis（factor for inversion stimulation）促使）促使DNA彎彎曲而將兩個(gè)曲而將兩個(gè)hix位點(diǎn)聯(lián)結(jié)在位點(diǎn)聯(lián)結(jié)在一起，一起，DNA片段經(jīng)斷裂和再片段經(jīng)斷裂和再連接而發(fā)生倒位。連接而發(fā)生倒位。rH 1表達(dá)表達(dá)產(chǎn)物為產(chǎn)物為H1阻遏蛋白，當(dāng)阻遏蛋白，當(dāng)H2基因表達(dá)時(shí)，基因表達(dá)時(shí)，Hl基因被阻遏；基因被阻遏；反之，反之，H2基因不表達(dá)時(shí)，基因不表達(dá)時(shí)，H1基因才得以表達(dá)基因才得以表達(dá) 免疫球蛋白基因的重組第三節(jié)第三節(jié) Transposition ( 轉(zhuǎn)座作用）轉(zhuǎn)座作用）n基因組可通過(guò)獲得新序列而進(jìn)化，也可基因組可通過(guò)獲得新序列而進(jìn)化，也可通過(guò)現(xiàn)存序列的重排

31、實(shí)現(xiàn)這一目的。無(wú)通過(guò)現(xiàn)存序列的重排實(shí)現(xiàn)這一目的。無(wú)論是原核生物還是真核生物，轉(zhuǎn)座子或論是原核生物還是真核生物，轉(zhuǎn)座子或轉(zhuǎn)座元件轉(zhuǎn)座元件（transposon or transposable element)的移動(dòng)提供了的移動(dòng)提供了基因組變化的潛在可能?；蚪M變化的潛在可能。一、轉(zhuǎn)座子（一、轉(zhuǎn)座子（transposon，Tn）n基因組上不必借助同源序列就可移動(dòng)的基因組上不必借助同源序列就可移動(dòng)的DNA片段，它們可以直接從基因組內(nèi)的片段，它們可以直接從基因組內(nèi)的一個(gè)位點(diǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)。一個(gè)位點(diǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)。n在原核生物和真核生物中都發(fā)現(xiàn)了經(jīng)由在原核生物和真核生物中都發(fā)現(xiàn)了經(jīng)由DNA移動(dòng)的轉(zhuǎn)座子。

32、移動(dòng)的轉(zhuǎn)座子。轉(zhuǎn)座過(guò)程有以下特征：轉(zhuǎn)座過(guò)程有以下特征： n能從基因組的一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)，從一個(gè)復(fù)能從基因組的一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位點(diǎn)，從一個(gè)復(fù)制子轉(zhuǎn)移到另一個(gè)復(fù)制子；制子轉(zhuǎn)移到另一個(gè)復(fù)制子；n不以獨(dú)立的形式存在（如噬菌體或質(zhì)粒不以獨(dú)立的形式存在（如噬菌體或質(zhì)粒DNA），而），而是在基因組內(nèi)由一個(gè)部位直接轉(zhuǎn)移到另一部位；是在基因組內(nèi)由一個(gè)部位直接轉(zhuǎn)移到另一部位；n轉(zhuǎn)座子編碼其自身的轉(zhuǎn)座酶，每次移動(dòng)時(shí)攜帶轉(zhuǎn)座必轉(zhuǎn)座子編碼其自身的轉(zhuǎn)座酶，每次移動(dòng)時(shí)攜帶轉(zhuǎn)座必需的基因一起在基因組內(nèi)躍遷，所以轉(zhuǎn)座子又稱跳躍基需的基因一起在基因組內(nèi)躍遷，所以轉(zhuǎn)座子又稱跳躍基因；因；n轉(zhuǎn)座的頻率很低，且插入是隨機(jī)的

33、，不依賴于轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座的頻率很低，且插入是隨機(jī)的，不依賴于轉(zhuǎn)座子（供體）和靶位點(diǎn)（受體）之間的任何序列同源性；（供體）和靶位點(diǎn)（受體）之間的任何序列同源性；n轉(zhuǎn)座子可插入到一個(gè)結(jié)構(gòu)基因或基因調(diào)節(jié)序列內(nèi)，引轉(zhuǎn)座子可插入到一個(gè)結(jié)構(gòu)基因或基因調(diào)節(jié)序列內(nèi)，引起基因表達(dá)內(nèi)容的改變，如使該基因失活，如果是重要起基因表達(dá)內(nèi)容的改變，如使該基因失活，如果是重要的基因則可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。的基因則可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。二、轉(zhuǎn)座子的類型和結(jié)構(gòu)特征n所有的轉(zhuǎn)座子都有兩個(gè)結(jié)構(gòu)特征：所有的轉(zhuǎn)座子都有兩個(gè)結(jié)構(gòu)特征：n（1）兩端有）兩端有20-40bp的反向重復(fù)序列的反向重復(fù)序列（inverted repetitive seque

34、nce, IR)n（）具有編碼轉(zhuǎn)座酶（）具有編碼轉(zhuǎn)座酶（transposase) 的基因的基因,這種酶催化轉(zhuǎn)座子插入新的位置。這種酶催化轉(zhuǎn)座子插入新的位置。n在原核生物中已發(fā)現(xiàn)兩種類型的轉(zhuǎn)座子：在原核生物中已發(fā)現(xiàn)兩種類型的轉(zhuǎn)座子：n（1）簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子）簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)座子（simple transposon）又稱又稱為插入序列（為插入序列（insertion sequence，IS）。）。n（2）復(fù)合轉(zhuǎn)座子）復(fù)合轉(zhuǎn)座子（composite transposon）（1）插入序列（IS）n插入序列是最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，插入序列是最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座子，IS因子是一種較小的轉(zhuǎn)因子是一種較小的轉(zhuǎn)座因子，長(zhǎng)度為座因子，長(zhǎng)度為7

35、501550bp，只含有與轉(zhuǎn)座有關(guān)的，只含有與轉(zhuǎn)座有關(guān)的酶基因，不含抗藥性等其他基因，其兩端都具有酶基因，不含抗藥性等其他基因，其兩端都具有1525bp的反向重復(fù)序列（的反向重復(fù)序列（inverted repeat，IR）?？桑？梢栽诓煌膹?fù)制子間轉(zhuǎn)移位置，以非正常重組的方式從以在不同的復(fù)制子間轉(zhuǎn)移位置，以非正常重組的方式從一個(gè)位點(diǎn)插入到另一個(gè)位點(diǎn)，從而對(duì)該位點(diǎn)的基因的結(jié)一個(gè)位點(diǎn)插入到另一個(gè)位點(diǎn)，從而對(duì)該位點(diǎn)的基因的結(jié)構(gòu)與表達(dá)產(chǎn)生多種遺傳效應(yīng)。每一類型都以構(gòu)與表達(dá)產(chǎn)生多種遺傳效應(yīng)。每一類型都以IS加鑒定加鑒定類型的編號(hào)來(lái)表示。類型的編號(hào)來(lái)表示。但后來(lái)的類型編號(hào)只反映它們的但后來(lái)的類型編號(hào)只反

36、映它們的分離歷史，并不表示至今所分離的插入序列的總數(shù)分離歷史，并不表示至今所分離的插入序列的總數(shù)nIS因子本身不具有表型效應(yīng)，只有當(dāng)它轉(zhuǎn)座到因子本身不具有表型效應(yīng)，只有當(dāng)它轉(zhuǎn)座到某一基因附近或插入某一基因內(nèi)部后，引起該某一基因附近或插入某一基因內(nèi)部后，引起該基因失活或產(chǎn)生極性效應(yīng)時(shí)，才能判斷其存在?；蚴Щ罨虍a(chǎn)生極性效應(yīng)時(shí)，才能判斷其存在。所引起的效應(yīng)與其插入的位置和方向有關(guān)。轉(zhuǎn)所引起的效應(yīng)與其插入的位置和方向有關(guān)。轉(zhuǎn)座時(shí)，宿主靶部位雙鏈被交錯(cuò)切開(kāi)，經(jīng)修復(fù)后座時(shí)，宿主靶部位雙鏈被交錯(cuò)切開(kāi)，經(jīng)修復(fù)后插入序列兩側(cè)形成短的正向重復(fù)。靶序列通常插入序列兩側(cè)形成短的正向重復(fù)。靶序列通常是任意的，但交錯(cuò)切

37、開(kāi)的長(zhǎng)度是固定的，一般是任意的，但交錯(cuò)切開(kāi)的長(zhǎng)度是固定的，一般為為59bp。 （2）復(fù)合轉(zhuǎn)座子（）復(fù)合轉(zhuǎn)座子（Tn）n一些轉(zhuǎn)座子除了除了有轉(zhuǎn)座酶基因外，還攜帶一些轉(zhuǎn)座子除了除了有轉(zhuǎn)座酶基因外，還攜帶藥物抗性藥物抗性(或其他或其他)標(biāo)記。這些轉(zhuǎn)座子以標(biāo)記。這些轉(zhuǎn)座子以Tn和數(shù)和數(shù)碼來(lái)命名。其中一類是由攜帶藥物標(biāo)記的中央碼來(lái)命名。其中一類是由攜帶藥物標(biāo)記的中央?yún)^(qū)域和兩側(cè)的臂區(qū)域和兩側(cè)的臂(arms)組成的復(fù)合因子組成的復(fù)合因子(composite elements)。n有的轉(zhuǎn)座子的重復(fù)順序就是有的轉(zhuǎn)座子的重復(fù)順序就是IS，復(fù)合轉(zhuǎn)座子也，復(fù)合轉(zhuǎn)座子也和和IS一樣，能從一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)座到另一個(gè)位點(diǎn)。一樣，

38、能從一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)座到另一個(gè)位點(diǎn)。二、轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座機(jī)制轉(zhuǎn)座的機(jī)制n轉(zhuǎn)座作用的機(jī)制仍可分為三種不同類型：轉(zhuǎn)座作用的機(jī)制仍可分為三種不同類型：即即n復(fù)制型，非復(fù)制型，保守型復(fù)制型，非復(fù)制型，保守型n其中復(fù)制型轉(zhuǎn)座需要兩種酶，其中復(fù)制型轉(zhuǎn)座需要兩種酶，轉(zhuǎn)座酶轉(zhuǎn)座酶 和和解離酶解離酶復(fù)制轉(zhuǎn)座作用引起了轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制，它插入到一個(gè)復(fù)制轉(zhuǎn)座作用引起了轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制，它插入到一個(gè)接受位點(diǎn)。捐贈(zèng)位點(diǎn)保持不變，以致捐贈(zèng)者和接受者都接受位點(diǎn)。捐贈(zèng)位點(diǎn)保持不變，以致捐贈(zèng)者和接受者都有轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制有轉(zhuǎn)座子的一個(gè)復(fù)制非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用允許一個(gè)轉(zhuǎn)座子像物體一樣從捐非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用允許一個(gè)轉(zhuǎn)座子像物體一樣從捐贈(zèng)們點(diǎn)移動(dòng)到接受

39、位點(diǎn)，這樣就在捐贈(zèng)位點(diǎn)留下贈(zèng)們點(diǎn)移動(dòng)到接受位點(diǎn)，這樣就在捐贈(zèng)位點(diǎn)留下了一個(gè)斷裂。了一個(gè)斷裂。保守的轉(zhuǎn)座作用描述了另一種非復(fù)制結(jié)果，因子保守的轉(zhuǎn)座作用描述了另一種非復(fù)制結(jié)果，因子在捐贈(zèng)位點(diǎn)被切除，然后通過(guò)一連串的反應(yīng)插入在捐贈(zèng)位點(diǎn)被切除，然后通過(guò)一連串的反應(yīng)插入到一個(gè)靶位，這樣每一個(gè)核苷粘合都被保留。到一個(gè)靶位，這樣每一個(gè)核苷粘合都被保留。復(fù)制轉(zhuǎn)座作用通過(guò)一個(gè)共合體進(jìn)行復(fù)制轉(zhuǎn)座作用通過(guò)一個(gè)共合體進(jìn)行非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用借助斷裂和重聚進(jìn)行非復(fù)制轉(zhuǎn)座作用借助斷裂和重聚進(jìn)行TnATnA轉(zhuǎn)座作用：轉(zhuǎn)座作用：復(fù)制型轉(zhuǎn)座需要轉(zhuǎn)座酶和分解酶復(fù)制型轉(zhuǎn)座需要轉(zhuǎn)座酶和分解酶ntnpAtnpA基因產(chǎn)物是一個(gè)轉(zhuǎn)座酶基因產(chǎn)物是

40、一個(gè)轉(zhuǎn)座酶nTnpRTnpR基因的產(chǎn)物具有二重功能，蛋白擔(dān)任著基因的產(chǎn)物具有二重功能，蛋白擔(dān)任著基因抑制子表達(dá)和供應(yīng)分解酶的功能?；蛞种谱颖磉_(dá)和供應(yīng)分解酶的功能。nTnpRTnpR抑制了所有抑制了所有tnpAtnpA和自己的基因的轉(zhuǎn)錄。和自己的基因的轉(zhuǎn)錄。共合體結(jié)構(gòu)的解離共合體結(jié)構(gòu)的解離部位稱為部位稱為resres，即是，即是解離酶的結(jié)合部位。解離酶的結(jié)合部位。位點(diǎn)位點(diǎn)I I是遺傳上作為是遺傳上作為resres部位的區(qū)域，它部位的區(qū)域，它的缺失將使解離反的缺失將使解離反應(yīng)完全不能進(jìn)行。應(yīng)完全不能進(jìn)行。然而解離反應(yīng)也與然而解離反應(yīng)也與部位部位II II和和IIIIII有關(guān)。有關(guān)。因?yàn)槠渲腥魏我?/p>

41、個(gè)因?yàn)槠渲腥魏我粋€(gè)部位缺失，解離反部位缺失，解離反應(yīng)都變得很弱。應(yīng)都變得很弱。三、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座的特征轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座的特征n（1）轉(zhuǎn)座不依賴于靶序列的同源性）轉(zhuǎn)座不依賴于靶序列的同源性n（2）轉(zhuǎn)座后靶序列重復(fù)）轉(zhuǎn)座后靶序列重復(fù)n（3）轉(zhuǎn)座子的插入具有專一性）轉(zhuǎn)座子的插入具有專一性n（4）轉(zhuǎn)座具有排他性）轉(zhuǎn)座具有排他性n（5）轉(zhuǎn)座具有極性效應(yīng)）轉(zhuǎn)座具有極性效應(yīng)n（6）活化臨近的沉默基因）活化臨近的沉默基因n（7）區(qū)域性優(yōu)先）區(qū)域性優(yōu)先轉(zhuǎn)座頻率的調(diào)控轉(zhuǎn)座頻率的調(diào)控n對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō)，控制轉(zhuǎn)座子調(diào)換的頻率對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō)，控制轉(zhuǎn)座子調(diào)換的頻率是很重要的，轉(zhuǎn)座子必須能維持某一最是很重要的，轉(zhuǎn)座子必須能維持某一最小的移動(dòng)頻率，因?yàn)樘蟮念l率會(huì)破壞小的移動(dòng)頻率，因?yàn)樘蟮念l率會(huì)破壞宿主細(xì)胞，研究表明每一個(gè)轉(zhuǎn)座子都有宿主細(xì)胞，研究表明每一個(gè)轉(zhuǎn)座子都有控制它自身調(diào)換頻率的機(jī)制。控制它自身調(diào)換頻率的機(jī)制。通過(guò)反義通過(guò)反義RNA的翻譯水平控制的翻譯水平控制IS10R外側(cè)邊緣兩個(gè)啟動(dòng)子外側(cè)邊緣兩個(gè)啟動(dòng)子PIN弱啟動(dòng)子弱啟動(dòng)子控制控制IS10R的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄POUT強(qiáng)啟動(dòng)子強(qiáng)啟動(dòng)子右向轉(zhuǎn)錄宿主右向轉(zhuǎn)錄宿主DNAINRNA和和OUTRNA有