CELL基本培養(yǎng)方法實用教案

1、二、培養(yǎng)操作中注意：動作準(zhǔn)確敏捷有序；培養(yǎng)用液開口后應(yīng)45度傾斜，不再重復(fù)使用的應(yīng)立即封口；一個吸管只能吸一種液體；不能面向操作臺講話(jing hu)或咳嗽。第1頁/共38頁第一頁，共39頁。基本(jbn)的培養(yǎng)方法懸滴培養(yǎng)方法：第2頁/共38頁第二頁，共39頁。懸滴培養(yǎng)(piyng)用的凹載玻片 單位：mm第3頁/共38頁第三頁，共39頁。（一）單蓋玻片培養(yǎng)(piyng)方法第4頁/共38頁第四頁，共39頁。左圖；凹載玻片支架(zhji)右圖：單蓋玻片培養(yǎng)法操作圖解 1、胚胎浸出液2、血漿3、心肌塊 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣壓7熱溶石蠟(sh l)密封 a為正確操作 b錯誤操作第5

2、頁/共38頁第五頁，共39頁。8、將密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)9、培養(yǎng)7-8個小時，組織塊向外生長，培養(yǎng)24小時在組織塊外周形成生長暈（一圈薄而透明的細胞(xbo)圈），48小時候生長減慢甚至停止。需要重新加入雞胚浸出液。第6頁/共38頁第六頁，共39頁。蓋玻片法再培養(yǎng) 1、2、眼科刀切除生長(shngzhng)暈 3 方型培養(yǎng)物切為兩到四片 4、5培養(yǎng)物漂洗 6、7、再培養(yǎng)第7頁/共38頁第七頁，共39頁。（二）雙蓋玻片懸滴培養(yǎng)(piyng)法第8頁/共38頁第八頁，共39頁。 雙蓋玻片圖解：1、載體(zit)蓋玻片 2、帶培養(yǎng)物蓋玻片 第9頁/共38頁第九頁，共39頁

3、。與單蓋玻片不同之處：1、載體蓋玻片加一滴消毒純水貼到帶有組織塊的另一面。2、再培養(yǎng)時：直接取下帶培養(yǎng)物的蓋玻片漂洗，換一張新的載體蓋玻片,可減少(jinsho)污染。第10頁/共38頁第十頁，共39頁。二、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)方法20世紀(jì)50年代(nindi)Carrel設(shè)計了卡氏瓶Earle設(shè)計了T-培養(yǎng)瓶第11頁/共38頁第十一頁，共39頁。用血漿固定(gdng)組織塊的培養(yǎng)方法第12頁/共38頁第十二頁，共39頁。 圖:卡氏瓶培養(yǎng)組織塊 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略燒瓶口 3.取少量血漿(xujing)加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接種組織塊 7.上蓋 8.消毒 9加入培養(yǎng)液 10.通氣第

4、13頁/共38頁第十三頁，共39頁。用透明紙固定組織(zzh)塊的培養(yǎng)方法第14頁/共38頁第十四頁，共39頁。圖:內(nèi)放有孔透明紙的培養(yǎng)瓶培養(yǎng) a. 一個(y )T培養(yǎng)瓶內(nèi)放有有孔透明紙b.卡氏瓶接種后圖解 1.有孔透明紙 2.組織塊 3.培養(yǎng)液第15頁/共38頁第十五頁，共39頁。旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法：與前兩種培養(yǎng)方法不同之處：細胞或組織塊交替(jiot)與培養(yǎng)液和空氣直接接觸，有利于細胞的生長。第16頁/共38頁第十六頁，共39頁。旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)方法用具(yngj) a.簡易旋轉(zhuǎn)鼓，可放入培養(yǎng)箱內(nèi) b.帶旋轉(zhuǎn)鼓裝置的培養(yǎng)箱 c.培養(yǎng)用的旋轉(zhuǎn)管 1.示血漿的高度 2.示接種組織間間距 3.示加培養(yǎng)液 4

5、.示可放旋轉(zhuǎn)鼓內(nèi)培養(yǎng) d.放旋轉(zhuǎn)管的支架.(1.接種組織塊時用 2.觀察時用)第17頁/共38頁第十七頁，共39頁。四.灌注(gunzh)小室培養(yǎng)法優(yōu)點1.連續(xù)觀察活細胞的動態(tài)變化2.研究理化性質(zhì)對培養(yǎng)細胞的影響和作用3.活細胞的反應(yīng).第18頁/共38頁第十八頁，共39頁。不銹鋼培養(yǎng)小室圖 A 中央(zhngyng)切面圖 B側(cè)面圖(mm)第19頁/共38頁第十九頁，共39頁。灌注小室及灌注系統(tǒng)示意圖 A.排液瓶 B.受液瓶 C.不銹鋼灌注小室 D.扁錐型小孔道 E、F、J .2號注射針頭 G、H.塑料導(dǎo)管(dogun) I玻璃導(dǎo)管(dogun) K、L.14號注射針頭(塞以棉花)第20頁/共

6、38頁第二十頁，共39頁。五.培養(yǎng)(piyng)板培養(yǎng)(piyng)方法第21頁/共38頁第二十一頁，共39頁。第22頁/共38頁第二十二頁，共39頁。培養(yǎng)培養(yǎng)(piyng)過程：過程： 1、取材并制備擬用于培養(yǎng)的細胞懸液 2、接種細胞，取下培養(yǎng)板的蓋子，用吸管吸取一定量的細胞懸液，加到培養(yǎng)板的各孔內(nèi) 3、給培養(yǎng)板各孔補加足夠的培養(yǎng)液 4、加蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（貼壁能力弱的細胞在接種后放置于CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5小時，使細胞黏附牢靠后再補加充足的營養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)） 5、每隔2-3天換液，換液時先將舊的培養(yǎng)液吸出，加入平衡(pnghng)鹽溶液洗滌，吸出平衡(pnghng)鹽溶液，

7、再加入新的培養(yǎng)液。蓋上蓋子繼續(xù)培養(yǎng)。第23頁/共38頁第二十三頁，共39頁。六、轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)(piyng)第24頁/共38頁第二十四頁，共39頁。第25頁/共38頁第二十五頁，共39頁。第26頁/共38頁第二十六頁，共39頁。第27頁/共38頁第二十七頁，共39頁。第28頁/共38頁第二十八頁，共39頁。第29頁/共38頁第二十九頁，共39頁。第30頁/共38頁第三十頁，共39頁。第31頁/共38頁第三十一頁，共39頁。生物(shngw)觀測臺第32頁/共38頁第三十二頁，共39頁。第33頁/共38頁第三十三頁，共39頁。第34頁/共38頁第三十四頁，共39頁。第35頁/共38頁第三十五頁，共39頁。第36頁/共38頁第三十六頁，共39頁。第37頁/共38頁第三十七頁，共39頁。感謝您的觀賞(gunshng)！第38頁/共38頁第三十八頁，共39頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)二、培養(yǎng)操作(cozu)中注意：。第1頁/共38頁。第2頁/共38頁。8、將密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。2、再培養(yǎng)時：直接取下帶培養(yǎng)物的蓋玻片