武漢大學考研歷年真題部分答案 分類介紹

1、第一類：諾貝爾獎及發(fā)展趨勢1、2002簡1#分別以一句話簡介1999和2001年諾貝爾獎獲獎項目中有關(guān)細胞生物學的內(nèi)容2、2005簡1#簡介2002和2004年諾貝爾獎獲獎項目中有關(guān)細胞生物學的內(nèi)容主題3、2004簡6#請談?wù)勅绾卫斫饽壳吧飳W研究中分子生物學向細胞生物學回歸的現(xiàn)象4、2006簡3#什么是干細胞？概述干細胞的類型與功能，并簡要敘述干細胞研究的意義和前景5、2008簡6#最近美國和日本科學家分別將人體皮膚細胞改造成類似胚胎干細胞，這一成果在理論上、實踐上有何意義？6、2009問答4#-綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)現(xiàn)及研究者獲得了2008年諾貝爾化學獎，他們的具體貢獻是什么？該成果在

2、細胞生物學有關(guān)領(lǐng)域研究中有何應(yīng)用？簡述應(yīng)用的原理與主要步驟。參考答案：諾貝爾獎獲獎項目中有關(guān)細胞生物學的內(nèi)容主題1、1999年，美國科學家甘特·布洛貝爾。他發(fā)現(xiàn)了蛋白質(zhì)內(nèi)控制蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)傳輸和定位的信號。獲得諾貝爾醫(yī)學及生理學獎。2、2000年瑞典科學家阿爾維德·卡爾松、美國科學家保羅·格林加德、奧地利科學家埃里克·坎德爾因在人類腦神經(jīng)細胞間信號的相互傳遞方面獲得的重要發(fā)現(xiàn)，而共同獲得諾貝爾醫(yī)學及生理學獎3、2001年美國科學家利蘭·哈特韋爾、英國科學家蒂莫西·亨特、保羅·納斯因發(fā)現(xiàn)了細胞周期的關(guān)鍵分子調(diào)節(jié)機制，而共同獲得

3、諾貝爾生理學及醫(yī)學獎。4、2002年英國科學家悉尼·布雷內(nèi)、約翰·蘇爾斯頓、美國科學家羅伯特·霍維茨因選擇線蟲作為新穎的實驗生物模型，找到了對細胞每一個分裂和分化過程進行跟蹤的細胞圖譜，而共同獲得諾貝爾醫(yī)學及生理學獎。5、2003年美國科學家保羅·勞特布爾、英國科學家彼得·曼斯菲爾德因在核磁共振成像技術(shù)領(lǐng)域的突破性成就，而共同獲得諾貝爾生理學及醫(yī)學獎。6、2004年美國科學家理查德·阿克塞爾和琳達·巴克，以表彰兩人在氣味受體和嗅覺系統(tǒng)組織方式研究中作出的貢獻，共同獲得諾貝爾生理學及醫(yī)學獎。7、2005年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授

4、予澳大利亞科學家巴里"馬歇爾和羅賓"沃倫，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了導致胃炎和胃潰瘍的細菌幽門螺桿菌。8.2006年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予美國科學家安德魯·菲爾和克雷格·梅洛，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了控制基因信息流動的基本機制，RNA干擾的發(fā)現(xiàn)。9.2007年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予美國科學家馬里奧-卡佩奇和奧利弗-史密西斯、英國科學家馬丁-埃文斯，這三位科學家是因為“在涉及胚胎干細胞和哺乳動物DNA重組方面的一系列突破性發(fā)現(xiàn)”而獲得這一殊榮的。這些發(fā)現(xiàn)導致了一種通常被人們稱為“基因打靶”的強大技術(shù)。這一國際小組通過使用胚胎干細胞在老鼠身上實現(xiàn)了基因變化?；虼虬屑夹g(shù)基

5、因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實驗手段，它的產(chǎn)生和發(fā)展建立在胚胎干(ES)細胞技術(shù)和同源重組技術(shù)成就的基礎(chǔ)之上，并促進了相關(guān)技術(shù)的進一步發(fā)展?；虼虬屑夹g(shù)將廣泛應(yīng)用于基因功能研究、人類疾病動物模型的研制以及經(jīng)濟動物遺傳物質(zhì)的改良等方面。1原理首先獲得ES細胞系，利用同源重組技術(shù)獲得帶有研究者預(yù)先設(shè)計突變的中靶ES細胞。通過顯微注射或者胚胎融合的方法將經(jīng)過遺傳修飾的ES細胞引入受體胚胎內(nèi)。經(jīng)過遺傳修飾的ES細胞仍然保持分化的全能性，可以發(fā)育為嵌合體動物的生殖細胞，使得經(jīng)過修飾的遺傳信息經(jīng)生殖系遺傳。獲得的帶有特定修飾的突變動物提供研究者一個特殊的研究體系，使他們可以在生物活體中研究特

6、定基因的功能。目前，在ES細胞進行同源重組己經(jīng)成為一種對小鼠染色體組上任意位點進行遺傳修飾的常規(guī)技術(shù)。通過基因打靶獲得的突變小鼠己經(jīng)超過千種(相關(guān)數(shù)據(jù)庫參見文獻)，并正以每年數(shù)百種的速度增加。通過對這些突變小鼠的表型分析，許多與人類疾病相關(guān)的新基因的功能已得到闡明，并直接導致了現(xiàn)代生物學研究各個領(lǐng)域中許多突破性的進展。2實驗流程3特點基因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實驗手段。通過對生物活體遺傳信息的定向修飾包括基因滅活、點突變引人、缺失突變、外源基因定位引入、染色體組大片段刪除等，并使修飾后的遺傳信息在生物活體內(nèi)遺傳，表達突變的性狀，從而可以研究基因功能等生命科學的重大問題，以及提

7、供相關(guān)的疾病治療、新藥篩選評價模型等?；虼虬屑夹g(shù)的發(fā)展己使得對特定細胞、組織或者動物個體的遺傳物質(zhì)進行修飾成為可能。4應(yīng)用基因打靶技術(shù)在基因功能研究中的應(yīng)用、應(yīng)用基因打靶技術(shù)研制人類疾病動物模型、應(yīng)用基因打靶技術(shù)改良動物品系和研制動物反應(yīng)器等。干細胞：4、2006簡3#什么是干細胞？概述干細胞的類型與功能，并簡要敘述干細胞研究的意義和前景答案：干細胞(Stem Cell)是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學界稱之為“萬用細胞”。 干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。干細胞有兩種分類方法，一是根據(jù)干細胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細胞(embryoni

8、c stem cell，ES細胞)和成體干細胞(somatic stem cell)。第二種分類方法是根據(jù)干細胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干細胞（pluripotent stem cell）和單能干細胞（unipotent stem cell）。胚胎干細胞的發(fā)育等級較高，是全能干細胞，而成體干細胞的發(fā)育等級較低，是多能或單能干細胞。胚胎干細胞（Embryonic Stem cell， ES細胞）：胚胎干細胞當受精卵分裂發(fā)育成囊胚時，內(nèi)層細胞團（Inner Cell Mass）的細胞即為胚胎干細胞。胚胎干細胞具有全能性，可以自我更新并

9、具有分化為體內(nèi)所有組織的能力。成體干細胞：成年動物的許多組織和器官，比如表皮和造血系統(tǒng)，具有修復(fù)和再生的能力。成體干細胞在其中起著關(guān)鍵的作用。在特定條件下，成體干細胞或者產(chǎn)生新的干細胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能細胞，從而使組織和器官保持生長和衰退的動態(tài)平衡。過去認為成體干細胞主要包括上皮干細胞和造血干細胞。最近研究表明，以往認為不能再生的神經(jīng)組織仍然包含神經(jīng)干細胞,說明成體干細胞普遍存在，問題是如何尋找和分離各種組織特異性干細胞。成體干細胞經(jīng)常位于特定的微環(huán)境中。微環(huán)境中的間質(zhì)細胞能夠產(chǎn)生一系列生長因子或配體，與干細胞相互作用，控制干細胞的更新和分化。造血干細胞造血干細胞是體內(nèi)各種血

10、細胞的唯一來源，它主要存在于骨髓、外周血、臍帶血中。干細胞的用途：非常廣泛，涉及到醫(yī)學的多個領(lǐng)域。目前，科學家已經(jīng)能夠在體外鑒別、分離、純化、擴增和培養(yǎng)人體胚胎干細胞，并以這樣的干細胞為“種子”，培育出一些人的組織器官。干細胞及其衍生組織器官的廣泛臨床應(yīng)用，將產(chǎn)生一種全新的醫(yī)療技術(shù)，也就是再造人體正常的甚至年輕的組織器官，從而使人能夠用上自己的或他人的干細胞或由干細胞所衍生出的新的組織器官，來替換自身病變的或衰老的組織器官。利用造血干細胞移植技術(shù)已經(jīng)逐漸成為治療白血病、各種惡性腫瘤放化療后引起的造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病的一種重要手段?？茖W家預(yù)言，用神經(jīng)干細胞替代已被破壞的神經(jīng)細胞，有望

11、使因脊髓損傷而癱瘓的病人重新站立起來；不久的將來，失明、帕金森氏綜合癥、艾滋病、老年性癡呆、心肌梗塞和糖尿病等絕大多數(shù)疾病的患者，都可望借助干細胞移植手術(shù)獲得康復(fù)。5、2008簡6#最近美國和日本科學家分別將人體皮膚細胞改造成類似胚胎干細胞，這一成果在理論上、實踐上有何意義？答案：美國和日本科學家分別將人體皮膚細胞改造成類似胚胎干細胞，再一次證明了動物細胞的全能性，同時可能意味著風靡一時的胚胎干細胞克隆技術(shù)退出舞臺。因為這種被稱為“直接改造”的技術(shù)不僅能避免人體胚胎克隆技術(shù)引發(fā)的倫理爭議，其高效、便利也為進一步醫(yī)學應(yīng)用打開了大門。英國科學家伊恩·威爾默特在一份聲明中說:“我們現(xiàn)在可以

12、設(shè)想這么一個時代:能夠以一種簡單方式制造干細胞，任何人身上的組織標本均能培育出任何組織器官?！?這項技術(shù)尚不能完全取代胚胎細胞克隆技術(shù)，因為它現(xiàn)階段的實驗方式存在潛在副作用。美日研究小組利用逆轉(zhuǎn)錄酶病毒“改造”皮膚細胞，這種病毒可能使基因產(chǎn)生變異，引發(fā)腫瘤等副作用。因此，在評估和克服這一潛在風險前，“萬能細胞”還不能用于器官移植等臨床應(yīng)用。6、2009問答4#-綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)現(xiàn)及研究者獲得了2008年諾貝爾化學獎，他們的具體貢獻是什么？該成果在細胞生物學有關(guān)領(lǐng)域研究中有何應(yīng)用？簡述應(yīng)用的原理與主要步驟。答案：2008年10月8日，日本科學家下村修（伍茲霍爾海洋生物學研究所）、美國科

13、學家馬丁·查爾菲（哥倫比亞大學）和錢永?。永Ｄ醽喆髮W圣迭戈分校）因為發(fā)現(xiàn)和改造綠色熒光蛋白而獲得了當年（2008）的諾貝爾化學獎。在細胞生物學與分子生物學領(lǐng)域中，綠色螢光蛋白基因常被用作為一個報導基因(reporter gene)。一些經(jīng)修飾過的型式可作為生物探針，綠色螢光蛋白基因也可以克隆到脊椎動物上進行表現(xiàn)，并拿來映證某種假設(shè)的實驗方法。 GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下，GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素(fluorescein)強，特別在450490nm藍光波長下更穩(wěn)定。GFP需要在氧化狀態(tài)下產(chǎn)生熒光，強還原劑能使GFP轉(zhuǎn)變?yōu)榉菬晒庑问剑坏┲?/p>

14、新暴露在空氣或氧氣中，GFP熒光便立即得到恢復(fù)。而一些弱還原劑并不影響GFP熒光。中度氧化劑對GFP熒光影響也不大,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。由于GFP熒光是生物細胞的自主功能，熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。綠色熒光蛋白應(yīng)用于骨架和細胞分裂研究（如RNA剪切因子的核內(nèi)運輸、細胞骨架動力和胞內(nèi)運輸），細胞器動力學和泡囊運輸?shù)难芯浚ㄓ肎FP顯示小囊運輸、用GFP觀察TGN運輸），生物發(fā)育研究（用GFP觀察線蟲的神經(jīng)發(fā)育、分析果蠅神經(jīng)發(fā)育的不對稱性細胞分裂）等。利用常規(guī)的DNA重組技術(shù)將GFP基因與目

15、的蛋白基因的編碼區(qū)連接形成一個單一的融合基因表達載體，然后將這一重組表達載體導入細胞，使融合蛋白得到瞬時或穩(wěn)定表達，通過檢測這些GFP的熒光來測定這些蛋白的位置?；蛘?#160;利用GFP的熒光特性對某一蛋白的N-或C-末端進行標記，然后借助熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡便可對標記的蛋白進行細胞內(nèi)活體觀察。第二類：細胞生物學常用的研究方法1、2002簡7#掃描隧道顯微鏡是納米生物學研究的工具，為何能用來觀察活的生物樣品？答案：掃描式電子顯微鏡的電子束不穿過樣品，僅在樣品表面掃描激發(fā)出次級電子。放在樣品旁的閃爍晶體接收這些次級電子，通過放大后調(diào)制顯像管的電子束強度，從而改變顯像管熒光屏上的亮度。顯像管

16、的偏轉(zhuǎn)線圈與樣品表面上的電子束保持同步掃描，這樣顯像管的熒光屏就顯示出樣品表面的形貌圖像，掃描式電子顯微鏡的分辨率主要決定于樣品表面上電子束的直徑。掃描式電子顯微鏡不需要很薄的樣品；圖像有很強的立體感；能利用電子束與物質(zhì)相互作用而產(chǎn)生的次級電子、吸收電子和 X射線等信息分析物質(zhì)成分。掃描隧道顯微鏡可以在真空、大氣、液體（接近于生理環(huán)境的離子強度）等多種條件下工作，因為掃描時不接觸樣品，又沒有高能電子束轟擊，基本上可避免樣品的變形，屬于非破壞性測量，所以可以用來觀察活的生物樣品。2、 2003簡6#以一種熒光染料檢驗細胞活性的實驗方案和原理答案：碘化丙啶熒光染色鑒定細胞活性1、 原理細胞活性指標

17、通常包括細胞膜對核酸染料的通透性，代謝活性，膜電位等。用碘化丙啶(PI)對細胞進行染色,可以區(qū)別壞死及正常細胞.細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜.當細胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,活細胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察2、 方案 PI染色細胞(1)染色:將瓶中的細胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察 細胞內(nèi)有熒光的則為壞死

18、細胞，細胞內(nèi)無熒光的為活細胞。3、 2004簡1#細胞生物學的鏡檢樣本制備中為什么必須取材新鮮且迅速固定？透射電鏡觀察的樣品為什么必須事前進行脫水處理答案：因為離體的細胞處在很低的大氣壓中，膜結(jié)構(gòu)很不穩(wěn)定，時間長了之后會導致膜結(jié)構(gòu)破壞，整個細胞就支離破碎了，所以必須取材新鮮且迅速固定。電鏡標本的制作過程是這樣的：戊二醛固定PBS沖洗鋨酸固定PBS沖洗丙酮逐級脫水樹脂（如EPON812）+丙酮滲透純樹脂滲透包埋聚合修塊超薄切片檸檬酸鉛和醋酸雙氧鈾染色電鏡觀察。因為包埋劑（樹脂）是脂溶性的，疏水性的，經(jīng)歷了由水相油相水相的過程，必須事前進行脫水處理。4、 2004簡5#FDA、DAPI、Cochi

19、cine（秋水仙素）等試劑在細胞生物學研究中的主要用途有哪些？簡述其原理。答案：FDA是熒光素2乙酯,研究細胞活性的,活細胞染成藍色,作用與DAPI,PI相同DAPI可以和雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光. 當DAPI和DNA結(jié)合時, 其熒光信號增強, 主要用于細胞染色(染細胞核)秋水仙素能抑制有絲分裂，破壞紡錘體，使染色體停滯在分裂中期 ，被廣泛應(yīng)用于細胞學、遺傳學的研究和植物育種的工作中，秋水仙素是誘變多倍體效果最好的藥劑之一5、 2005簡5#如何檢驗細胞膜的完整性，簡述其原理及操作。碘化丙啶熒光染色檢驗細胞膜的完整性1、 原理細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜.當細胞壞

20、死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使細胞著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察2、 方案 PI染色細胞(1)染色:將瓶中的細胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察細胞內(nèi)有熒光的則為細胞膜不完整，細胞內(nèi)無熒光的為細胞膜完整。6、 2005簡6#請簡單談?wù)勏铝袃x器的主要用途和特點（1）干涉差顯微鏡ICM（2）激光共聚焦掃描顯微鏡Confocal（3）電荷偶聯(lián)以CCD（4）流式細胞儀（Fl

21、ow cytometry)（1） 干涉差顯微鏡（ICM，interference contrast microscope）其優(yōu)點是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標本可略厚一點，折射率差別更大，故影像的立體感更強。ICM使細胞的結(jié)構(gòu)，特別是一些較大的細胞器，如核、線粒體等，立體感特別強，適合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉(zhuǎn)基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。（2） 激光共聚焦掃描顯微鏡（Confocal) 激光共聚焦顯微鏡有如下優(yōu)越性：1、對活細胞和組織或細胞切片進行連續(xù)掃描，可獲得精細的細胞骨架、染色體、細胞器和細胞膜系統(tǒng)的三維圖像。2、可以得到比普通熒光顯微鏡更高

22、對比度、高解析度圖象、同時具有高靈敏度、杰出樣品保護。3、多維圖象的獲得，如7 維圖象(XYZaIt): xyt 、xzt 和xt 掃描,時間序列掃描旋轉(zhuǎn)掃描、區(qū)域掃描、光譜掃描、同時方便進行圖像處理。 4、細胞內(nèi)離子熒光標記，單標記或多標記，檢測細胞內(nèi)如PH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率測定及動態(tài)變化。5、熒光標記探頭標記的活細胞或切片標本的活細胞生物物質(zhì)，膜標記、免疫物質(zhì)、免疫反應(yīng)、受體或配體，核酸等觀察；可以在同一張樣品上進行同時多重物質(zhì)標記，同時觀察； 6、對細胞檢測無損傷、精確、準確、可靠和優(yōu)良重復(fù)性；數(shù)據(jù)圖像可及時

23、輸出或長期儲存。（3） （3）電荷偶聯(lián)儀（CCD）（Charge Coupled Device）電荷藕合器件圖像傳感器,它使用一種高感光度的半導體材料制成。CCD的結(jié)構(gòu)為三層，第一層是“微型鏡頭”，第二層是“分色濾色片”以及第三層“感光層”?？捎糜诓蹲角逦鷦討B(tài)的信號。（4） 流式細胞儀（Flow CytoMeter, FCM）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優(yōu)點，成為當代最先進的細胞定量分析技術(shù)。 7、 2006簡6#簡述常用的熒光標記與觀察技

24、術(shù)，列出其主要技術(shù)流程答案：（1）細胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標本準備，染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察?；罴毎砻姹Ａ粲休^完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。（2）熒光染色鑒定細胞活性用碘化丙啶(propidium iodide,PI)對細胞進行染色,可以區(qū)別壞死及正常細胞.細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜.當細胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,活細胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡

25、下觀察方案： PI染色細胞(1)染色:將瓶中的細胞搖勻,取200l于1.5ml的離心管中,加入PI 20l,染色15分鐘.(2)滴片:取一載玻片,用雙面膠圍成一小室,從離心管中各取以上染色后的細胞懸液10l,加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察 （3）探針的熒光標記探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料。再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析8、 2006簡7#相差顯微鏡、掃描電子顯微鏡，透射射電子顯微鏡在細胞生物學研究中各

26、有何用途及特點答案：（1）相差顯微鏡： 相差顯微鏡是一種將光線通過透明標本細節(jié)時所產(chǎn)生的光程差（即相位差）轉(zhuǎn)化為光強差的特種顯微鏡。光線通過比較透明的標本時，光的波長（顏色）和振幅（亮度）都沒有明顯的變化。因此，用普通光學顯微鏡觀察未經(jīng)染色的標本（如活的細胞）時，其形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)往往難以分辨。然而，由于細胞各部分的折射率和厚度的不同，光線通過這種標本時，直射光和衍射光的光程就會有差別。隨著光程的增加或減少，加快或落后的光波的相位會發(fā)生改變（產(chǎn)生相位差）。光的相位差人的肉眼感覺不到，但相差顯微鏡能通過其特殊裝置環(huán)狀光闌和相板，利用光的干涉現(xiàn)象，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X的振幅差（明暗差），從

27、而使原來透明的物體表現(xiàn)出明顯的明暗差異，對比度增強，使我們能比較清楚的觀察到普通光學顯微鏡和暗視野顯微鏡下都看不到或看不清的活細胞及細胞內(nèi)的某些細微結(jié)構(gòu)。用途：相差顯微鏡能觀察到透明樣品的細節(jié)，適用于對活體細胞生活狀態(tài)下的生長、運動、增殖情況及細微結(jié)構(gòu)的觀察。因此，是微生物學、細胞生物學、細胞和組織培養(yǎng)、細胞工程、雜交瘤技術(shù)等現(xiàn)代生物學研究的必備工具。（2）掃描電子顯微鏡：特點：電子顯微鏡為電子束為介質(zhì),由于電子束波長遠較可見光小,故電子顯微鏡分辨率遠比光學顯微鏡高.光學顯微鏡放大倍率最高只有約1500倍,掃描式顯微鏡可放大到10000倍以上. 掃描電子顯微鏡有一重要特色是具有超大的景深(de

28、pth of field),約為光學顯微鏡的300倍,使得掃描式顯微鏡比光學顯微鏡更適合觀察表面起伏程度較大的試片. 可進行多種功能的分析.與 X 射線譜儀配接,可在觀察形貌的同時 進行微區(qū)成分分析;配有光學顯微鏡和單色儀等附件時,可觀察陰極熒光圖像和進行陰極熒光光譜分析等. 可使用加熱,冷卻和拉伸等樣品臺進行動態(tài)試驗,觀察在不同環(huán)境 條件下的相變及形態(tài)變化等. 大部分電子掃描顯微鏡的抗污染能力低,必須提供真空系統(tǒng)和電源穩(wěn)壓系統(tǒng). 用途： 二次電子象,背散射電子象,圖象處理及分析,能做各種固體材料樣品表面形貌及組織結(jié)構(gòu)的分析.（3）透射子顯微鏡特點：因電子束穿透樣品后，再用電子透鏡成像放大而得

29、名。它的光路與光學顯微鏡相仿。在這種電子顯微鏡中，圖像細節(jié)的對比度是由樣品的原子對電子束的散射形成的。樣品較薄或密度較低的部分，電子束散射較少，這樣就有較多的電子通過物鏡光欄，參與成像，在圖像中顯得較亮。反之，樣品中較厚或較密的部分，在圖像中則顯得較暗。如果樣品太厚或過密，則像的對比度就會惡化，甚至會因吸收電子束的能量而被損傷或破壞。用途：透射式電子顯微鏡常用于觀察那些用普通顯微鏡所不能分辨的細微物質(zhì)結(jié)構(gòu)9、 2006簡8#在進行組織原位雜交定位分析樣品時，為什么常用冰凍切片方法，而不用石蠟切片方法組織原位雜交（Tissue in situ hybridization）簡稱原位雜交，指組織或細

30、胞的原位雜交，是經(jīng)適當處理后，使細胞通透性增加，讓探針進入細胞內(nèi)與DNA或RNA雜交，因此原位雜交可以確定探針互補序列在胞內(nèi)的空間位置，用于原位雜交的探針可以是單鏈或雙鏈DNA，也可以是RNA探針。通常探針操作的長度以100-400nt為宜，過長則雜交率減低。最近研究結(jié)果表明，寡核苷酸探針（16-30 nt）能自由出入細菌和組織細胞壁，雜交效率明顯高于長探針，探針的標記物可以是放射性同位素，也可以是非放射性生物素和半抗原等，原位雜交中，標本的固定條件是影響雜交效率的重要因素。標本組織蛋白質(zhì)的消化程度對探針進入細胞極為重要，去除蛋白質(zhì)的方法是，用0.2mol/L HCl處理載玻片，用蛋白酶K消化

31、，然后用不同濃度的乙醇脫水。冰凍切片是組織在取材后直接置入液氮冷凍，切片后才將其浸入4%多聚甲醛約10 min，不會與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接，不會影響探針穿透入細胞或組織，空氣干燥后保存在-70。如冰箱溫度恒定，在-70切片可保存數(shù)月之久不會影響雜交結(jié)果。石蠟切片是用福爾馬林固定和石蠟包埋，這種標本對檢測DNA和mRNA有時也可獲得雜交信號，但石蠟包埋切片由于與蛋白質(zhì)交聯(lián)的增加，影響核酸探針的穿透，因而雜交信號常低于冰凍切片。同時，在包埋的過程中可減低mRNA的含量。所以常用冰凍切片方法，而不用石蠟切片方法10、2006簡9#細胞工程中。哪些方法誘導細胞融合，各有何特點細胞融合(Cell f

32、usion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。細胞融合的誘導物種類很多常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。病毒誘導融合病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或-丙內(nèi)酯滅活，使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合的優(yōu)點是融合率較高，對各種動物細胞都適宜，并且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；缺點是仙臺病毒不穩(wěn)

33、定，在保存過程中融合活性會降低，并且制備過程比較煩瑣。此外，病毒引進細胞后，可能會對細胞的生命活動產(chǎn)生干擾。 聚乙二醇誘導融合聚乙二醇具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用，能夠有效地促進植物原生質(zhì)體和動物細胞的融合。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇，就會發(fā)生細胞凝集作用；在稀釋和除去聚乙二醇的過程中，就會發(fā)生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理，目前還不太清楚。聚乙二醇是化學試劑，使用起來很方便，誘導細胞融合的頻率比較高，但是它有一定毒性，對有些細胞(如卵細胞)不適用。 電場誘導融合20世紀80年代建立起來的電融合技術(shù)，是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中，

34、使細胞聚集成串珠狀，然后施加高壓電脈沖，以促使細胞融合。緊密排列的細胞，在相互接觸的細胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū)，當受到電擊時，這個區(qū)域就會被擊穿，產(chǎn)生脂雙層膜孔，導致細胞之間的細胞質(zhì)連通，進而發(fā)生細胞融合。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點，如誘導細胞融合的頻率高，對細胞無毒害作用，操作簡便，可重復(fù)性好。11、 2007簡6#簡述鑒定下列細胞結(jié)構(gòu)的方法：細胞壁、細胞核、淀粉粒、油脂和蛋白質(zhì)細胞壁：植物細胞壁：先在材料上滴上1滴濃鹽酸，然后滴上間苯三酚-酒精液1滴，木質(zhì)化的細胞壁就染上櫻紅或紫紅色。 細菌細胞壁：革蘭氏染液，陽性細菌為紫色，陰性細菌為紅色。細胞核：席夫（Schiff's）試劑，

35、堿性品紅是較強的核染色劑，在孚爾根氏（Feulgen's）反應(yīng)中作為組織化學試劑，以檢查DNA。淀粉粒：遇碘變藍油脂：蘇丹染色后是淡黃色的蛋白質(zhì)：米氏反應(yīng)，其中硝基汞試劑作用于細胞中蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的酪氨酸基，形成紅色沉淀12、 2007簡7#已知某信號分子（分泌蛋白）引發(fā)的下游事件可抑制細胞分裂，我們推測該信號分子的受體可能分布在細胞膜上。請你設(shè)計一個實驗方案證實（1）該信號分子的受體確實存在于細胞膜上；（2）該信號分子是通過與其受體的結(jié)合抑制了細胞分裂。該實驗應(yīng)特別注意哪些關(guān)鍵環(huán)節(jié)？答案：（1）對信號分子（分泌蛋白）進行熒光標記，加入細胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時間后，在熒光顯微鏡下觀察培養(yǎng)

36、的細胞，觀察其表面是否有熒光，如果有，則說明其信號分子的受體存在于細胞膜上，如果沒有熒光標記，則說明其信號分子的受體不存在于細胞膜上。（2）進行對照實驗，設(shè)置三種培養(yǎng)液，1號是不加入信號分子的細胞培養(yǎng)液，2號是加入信號分子的細胞培養(yǎng)液，3號加入大量與信號分子結(jié)構(gòu)相似的抑制劑后，再加入信號分子到細胞培養(yǎng)液，觀察細胞分裂的情況，如果1號和3號細胞都正常分裂，只有2號出現(xiàn)不分裂，則說明信號分子是通過與其受體的結(jié)合抑制了細胞的分裂。實驗應(yīng)特別注意的環(huán)節(jié)有：對信號分子進行熒光標記；進行對照實驗的3號培養(yǎng)液一定要加入大量（過量）的抑制劑。13、 2008簡3#細胞顯微操作技術(shù)主要可用于哪些生物工程研究？為

37、什么必須采用倒置顯微鏡？細胞顯微操作技術(shù)是在顯微鏡下，用顯微操作裝置對細胞進行解剖和微量注射的技術(shù)，細胞拆合、顯微注射與現(xiàn)代分子生物學技術(shù)相結(jié)合用于研究核質(zhì)關(guān)系、細胞內(nèi)某種mRNA或蛋白質(zhì)功能，還進行轉(zhuǎn)基因動物、高等動物克隆等方面的研究。因為只有倒置顯微鏡有操作平臺，可放置培養(yǎng)皿，滿足顯微操作的需要，所以必須采用倒置顯微鏡。14、 2008簡4#請設(shè)計實驗，用四種方法證實某種細胞是生活的。（1）臺盼藍染色用0.5%濃度的臺盼藍（Trypan blue）,用PBS配制，室溫保存，該染料只對死細胞著色，可測定活細胞數(shù)和計算存活百分率。（2）用碘化丙啶(propidium iodide,PI)對細胞

38、進行染色,可以區(qū)別壞死及正常細胞，細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜.當細胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,活細胞不著色. 熒光鏡下用紫外激發(fā)光,高倍鏡下觀察，沒有熒光的則為活細胞。（3）用相差顯微鏡觀察活細胞，并可在鏡下連續(xù)拍攝記錄體外培養(yǎng)細胞的活動，如細胞分裂、細胞遷移運動等過程。（4）光脫色恢復(fù)技術(shù)：用熒光素標記膜蛋白，然后用激光照射細胞表面某一區(qū)域，使被照射區(qū)的熒光淬滅變暗，然后觀察膜上熒光的變化，如果一段時間后，淬滅區(qū)域的亮度逐漸增加，最后恢復(fù)到與周圍的熒光強度相等，則說明細胞是生活的。第三類：細胞周期/調(diào)

39、控/分化1、2002論述3#試述cyclin與CDK在細胞周期調(diào)控的作用原理及主要下游事件（P429-436）Cyclin周期蛋白不僅僅起激活CDK的作用，還決定了CDK何時、何處、將何種底物磷酸化，從而推動細胞周期的前進。分為G1型、G1/S型S型和M型4類，各類周期蛋白均含有一段約100個氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導周期蛋白與CDK結(jié)合。G1期與G1/S期：G1周期蛋白主要包括cyclinD、cyclinE，還有cyclinA，G1期的CDK主要包括CDK2、CDK4和CDK6。cyclinD與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2結(jié)合。E- CDK2為S期啟動所必需，

40、E- CDK2與 p107和E2F結(jié)合成復(fù)合物后，CDK2催化p107磷酸化，使p107失去抑制作用，E2F的作用被顯示出來，促進有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促使細胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化；E- CDK2還直接參與了中心體復(fù)制的起始調(diào)控。cyclinA的合成開始于G1/S，與CDK2結(jié)合。S期：cyclinA-CDK2是S期主要的CDK激酶，位于DNA復(fù)制中心，使DNA復(fù)制因子RF-A磷酸化并使后者的活性增強。在G2-M期：主要的周期蛋白是cyclinB，也有cyclinA，與CDK1結(jié)合，CDK1使底物蛋白磷酸化：如將組蛋白H1磷酸化導致染色體凝集；核纖層蛋白磷酸化促使核膜解體；核仁蛋白磷酸化，促使核仁

41、解體；p60c-src蛋白磷酸化，促使細胞骨架重排；C-abl蛋白磷酸化，促使細胞形態(tài)調(diào)整等下游細胞周期事件。M期：在中期當MPF活性達到最高時，通過一種未知的途徑，激活后期促進因子APC，將泛素連接在cyclinB和cyclinA上，導致cyclinB和cyclinA被蛋白酶體（proteasome）降解，CDK1激酶活性喪失，被CDK1磷酸化的蛋白質(zhì)去磷酸化，細胞周期便從M期中期向后期轉(zhuǎn)化，完成一個細胞周期 2、2003簡7#經(jīng)誘變處理發(fā)現(xiàn)生活受精卵不能啟動分裂，試推測突變基因可能主要涉及哪些生理過程調(diào)控（檢驗點）受精卵要啟動分裂必須通過一系列DNA復(fù)制延擱檢驗點：細胞要分裂，必須正確復(fù)制

42、DNA和達到一定的體積，在獲得足夠物質(zhì)支持分裂以前，細胞不可能進行分裂。細胞周期的運行，是在一系列稱為檢驗點（check point）的嚴格檢控下進行的，當DNA發(fā)生損傷，復(fù)制不完全或紡錘體形成不正常，周期將被阻斷。細胞周期檢驗點由感受異常事件的感受器、信號傳導通路和效應(yīng)器構(gòu)成，主要檢驗點包括：G1/S檢驗點:在酵母中稱start點，在哺乳動物中稱R點(restriction point)，控制細胞由靜止狀態(tài)的G1進入DNA合成期，相關(guān)的事件包括：DNA是否損傷？細胞外環(huán)境是否適宜？細胞體積是否足夠大？S期檢驗點：DNA復(fù)制是否完成？G2/M檢驗點：是決定細胞一分為二的控制點，相關(guān)的事件包括：

43、DNA是否損傷？細胞體積是否足夠大？中-后期檢驗點（紡錘體組裝檢驗點）：任何一個著絲點沒有正確連接到紡錘體上，都會抑制APC的活性，引起細胞周期中斷。Weel和cdc25c參與了檢驗點的調(diào)控，在S期，Cdc25c的活性比較低，而 Weel的活性比較高，Weel可以促使CDK1磷酸化，抑制CDK1激酶的活性，Cdc25c的活性比較低，不能有效促使CDK1去磷酸化，無法激活CDK1，抑制細胞進入M期，啟動細胞分裂。細胞能啟動分裂有可能是Weel和cdc25c發(fā)生突變，無法完成檢驗點的協(xié)同控制。3、2003論述4#分別舉例說明影響細胞分化的主要原因細胞分化(cell differentiation)

44、：在個體發(fā)育中，由一 種相同的細胞類型經(jīng)細胞分裂后逐漸在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上形成穩(wěn)定性差異，產(chǎn)生各不相同的細胞類群的過程。細胞分化是多細胞生物發(fā)育的基礎(chǔ)與核心；細胞分化的關(guān)鍵在于特異性蛋白質(zhì)合成；合成特異性蛋白質(zhì)實質(zhì)在于組織特異性基因在時間和空間上的差異性表達；差異性表達的機制是由于基因表達的組合調(diào)控。 影響細胞分化的因素（1）細胞的全能性：細胞經(jīng)分裂和分化后仍具有產(chǎn)生完整有機體的潛能或特性。如將羊的乳腺細胞的細胞核植入去核的羊卵細胞中，成功克隆了多莉羊，證明即使終末分化的細胞，其細胞核也具有全能性。植物的組織培養(yǎng)，用已經(jīng)分化的外植體脫分化后再形成新的植株，也證明了植物細胞的全能性。（2）胞外信

45、號分子對細胞分化的影響：一部分細胞會影響周圍細胞使其向一定方向分化，稱為近端組織相互作用，也稱為胚胎誘導。如眼的發(fā)生，早期視泡誘導與之接觸的外胚層上皮細胞發(fā)育成晶狀體，隨后在視泡和晶狀體的共同誘導下外面的表皮細胞形成角膜。如果把早期的視泡移植在頭部的其他部位，也可誘導與之接觸的外胚層啊與成晶狀體。 （3）細胞記憶與決定：信號分子的有效作用時間是短暫的，然而細胞可以將這種短暫的作用儲存起來并形成長時間的記憶，逐漸向特定方向分化。如果蠅成蟲盤，是一些初級分化的細胞群，在幼蟲變態(tài)過程中，不同的成蟲盤發(fā)育為成蟲不同的器官，把果蠅幼蟲的成蟲盤植入成蟲體內(nèi)，連續(xù)移植9年，細胞增殖多達1800代，然后將這種

46、成蟲盤在移植回幼蟲體內(nèi)依然保留其記憶，照例發(fā)育為相應(yīng)的器官。（4）受精卵細胞質(zhì)的不均一性對細胞分化的影響:卵母細胞的細胞質(zhì)除了儲存有營養(yǎng)物質(zhì)和多種蛋白外，還含有多種mRNA，其中多數(shù)mRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合處于非活性狀態(tài)，成為隱蔽mRNA，不能被核糖體識別，它們在卵細胞質(zhì)中呈不均勻分布，卵裂后細胞說攜帶的信息已經(jīng)開始有所不同，這種區(qū)別又通過信號分子影響其他細胞產(chǎn)生級聯(lián)效應(yīng)，這樣最胡儲存的信息不斷被修飾并逐漸形成更精細更復(fù)雜的指令，最終產(chǎn)生分化各異的細胞類型。如海膽受精卵的發(fā)育。（5）細胞間的相互作用與位置效應(yīng)。改變細胞所處的位置可導致細胞分化方向的改變，稱為位置效應(yīng)。如在雞胚發(fā)育的原腸胚期，在由脊

47、索細胞分泌的由Shh的基因編碼的的信號蛋白的的作用下，靠近脊索的細胞分化形成底板，遠離脊索的細胞分化為運動神經(jīng)元，如將另一個脊索植入雞胚中線一側(cè)，則會以同樣方式誘導底板和運動神經(jīng)元的發(fā)育。（6）環(huán)境對性別決定的影響：溫度和個體的空間位置信息可影響性別分化。如蜥蜴在24度以下全發(fā)育為雌性，在32度以上則全發(fā)育為雄性。蝸牛形成上下相互疊壓的群體，位于下方的個體發(fā)育為雌性，位于上方的個體發(fā)育為雄性。（7）染色質(zhì)變化與基因重排對細胞分化的影響。在馬蛔蟲卵裂過程中，染色體出現(xiàn)消減或丟失，細胞朝不同方向分化。B淋巴細胞中的DNA經(jīng)過斷裂丟失與重排的復(fù)雜變化，從而利用有限的免疫球蛋白基因，可表達出多種抗體。

48、 4、2004論述2#概述細胞周期蛋白B分裂后期的降解途徑、機理和調(diào)控因素cyclinB分裂后期的降解途徑、機理和調(diào)控因素分裂期周期蛋白N端有一段序列與其降解有關(guān)，稱降解盒(destruction box)。當MPF活性達到最高時，通過泛素連接酶催化泛素與cyclinB結(jié)合，cyclinB隨之被26S蛋白酶體水解。在中期當MPF活性達到最高時，通過一種未知的途徑，激活后期促進因子APC，APC(anaphase promoting complex)負責將泛素連接到M期周期蛋白上 cyclinB上，導致cyclinB被蛋白酶體（proteasome）降解，完成一個細胞周期。 泛素由76個氨基酸組

49、成，高度保守，普遍存在于真核細胞，故名泛素。共價結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶體識別和降解，這是細胞內(nèi)短壽命蛋白和一些異常蛋白降解的普遍途徑，泛素相當于蛋白質(zhì)被摧毀的標簽。26S蛋白酶體是一個大型的蛋白酶，可將泛素化的蛋白質(zhì)分解成短肽。在蛋白質(zhì)的泛素化過程中，E1（ubiquitin-activating enzyme，泛素激活酶）水解ATP獲取能量，通過其活性位置的半胱氨酸殘基與泛素的羧基末端形成高能硫酯鍵而激活泛素，然后E1將泛素交給E2（ubiquitin-conjugating enzyme，泛素結(jié)合酶），最后在E3（ubiquitin-ligase，泛素連接酶）的作用下將泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白

50、上。當?shù)谝粋€泛素分子在E3的催化下連接到靶蛋白上以后，另外一些泛素分子相繼與前一個泛素分子的賴氨酸殘基相連，逐漸形成一條多聚泛素鏈。泛素化的靶蛋白被蛋白酶體逐步降解，多聚泛素解聚為單個泛素分子，重新被利用。 5、2004論述4#試述動、植物細胞凋亡的一般過程、特點、常用檢測方法及原理 答案：細胞凋亡的一般過程：凋亡的起始：細胞表面的特化結(jié)構(gòu)如微絨毛消失，細胞間接觸的消失，但細胞膜依然完整；線粒體大體完整，但核糖體逐漸從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上脫離，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹，并逐漸與質(zhì)膜融合；染色質(zhì)固縮，形成新月形帽狀結(jié)構(gòu)等形態(tài)，沿著核膜分布 凋亡小體的形成：核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片段，與某 些細胞器如線粒體一起聚集，

51、為反折的細胞質(zhì)膜所包圍。細胞表面產(chǎn)生了許多泡狀或芽狀突起，逐漸形成單個的凋亡小體 凋亡小體逐漸為鄰近的細胞吞噬并消化細胞凋亡的生化特征：細胞凋亡的主要特征是形成大小為 180200bp特征性的DNA ladders凋亡細胞組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶tTG積累并達到較高水平細胞凋亡的檢測形態(tài)學觀測：染色法、透射和掃描電鏡觀察DNA電泳：DNA片段就呈現(xiàn)出梯狀條帶TUNEL測定法，即DNA斷裂的原位末端標記法彗星電泳法（comet assay）流式細胞分析：根據(jù)凋亡細胞DNA斷裂和丟失，采用碘化丙啶使DNA產(chǎn)生激發(fā)熒光，用流式細胞儀檢出凋亡的亞二倍體細胞，同時又能觀察細胞的周期狀態(tài)。6、 2005簡4#在某

52、些生物發(fā)育的特定時期，一些細胞中的染色體形態(tài)會發(fā)生巨大變化，簡述這些染色體的結(jié)構(gòu)特點及其功能。在某些生物的細胞中，特別是在發(fā)育的某些階段會出現(xiàn)一些特殊的體積很大的染色體，包括多線染色體和燈刷染色體，總稱巨大染色體。多線染色體來源于核內(nèi)有絲分裂，核內(nèi)DNA多次復(fù)制而細胞不分裂，產(chǎn)生的子染色體并行排列，且體細胞內(nèi)同源染色體配對，緊密結(jié)合在一起從而阻止染色質(zhì)纖維的進一步聚縮，形成體積很大的多線染色體，多線化細胞處于永久間期，并且體積也相應(yīng)增大。果蠅的唾腺細胞是典型的多線染色體細胞。多線染色體上有一系列交替分布的帶和間帶，帶的數(shù)目，心態(tài)，大小及分布都很穩(wěn)定。在發(fā)育的某個階段，多線染色體的某些帶區(qū)變得疏

53、松膨大而形成脹泡，脹泡是基因活躍轉(zhuǎn)錄的形態(tài)學標志。燈刷染色體幾乎普遍存在于動物界的卵母細胞中，其中兩棲類卵母細胞最為典型。燈刷染色體是卵母細胞進行減數(shù)分裂第一次分裂時停留在雙線期的染色體，它是一個二價體，包含4條染色單體，染色體聯(lián)會還未解除，可見幾處交叉。由染色粒軸絲和兩側(cè)伸出的相似側(cè)環(huán)構(gòu)成。燈刷染色體的形態(tài)與卵子發(fā)生過程中營養(yǎng)物質(zhì)的儲備是密切相關(guān)的，大部分DNA以染色粒形式存在，沒有轉(zhuǎn)錄活性，而側(cè)環(huán)是RNA活躍轉(zhuǎn)錄的區(qū)域，一個側(cè)環(huán)往往是一個大的轉(zhuǎn)錄單位或幾個轉(zhuǎn)錄單位組合而成。轉(zhuǎn)錄RNA副本3端借助RNA聚合酶固定在側(cè)環(huán)染色質(zhì)軸絲上，游離5端捕獲大量大白紙形成核糖核蛋白復(fù)合物，組成環(huán)周圍的基質(zhì)

54、，環(huán)的粗細變化表示基質(zhì)的厚薄和轉(zhuǎn)錄RNA的長短。7、 2005論述3#細胞周期受到哪些細胞內(nèi)因子的調(diào)控，調(diào)控機理如何，哪些環(huán)境因子將對細胞周期產(chǎn)生重要影響 Cyclin周期蛋白不僅僅起激活CDK的作用，還決定了CDK何時、何處、將何種底物磷酸化，從而推動細胞周期的前進。分為G1型、G1/S型S型和M型4類，各類周期蛋白均含有一段約100個氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導周期蛋白與CDK結(jié)合。G1期與G1/S期：G1周期蛋白主要包括cyclinD、cyclinE，還有cyclinA，G1期的CDK主要包括CDK2、CDK4和CDK6。cyclinD與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與

55、CDK2結(jié)合。E- CDK2為S期啟動所必需，E- CDK2與 p107和E2F結(jié)合成復(fù)合物后，CDK2催化p107磷酸化，使p107失去抑制作用，E2F的作用被顯示出來，促進有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促使細胞周期由G1期向S期轉(zhuǎn)化；E- CDK2還直接參與了中心體復(fù)制的起始調(diào)控。cyclinA的合成開始于G1/S，與CDK2結(jié)合。S期：cyclinA-CDK2是S期主要的CDK激酶，位于DNA復(fù)制中心，使DNA復(fù)制因子RF-A磷酸化并使后者的活性增強。在G2-M期：主要的周期蛋白是cyclinB，也有cyclinA，與CDK1結(jié)合，CDK1使底物蛋白磷酸化：如將組蛋白H1磷酸化導致染色體凝集；核纖層蛋

56、白磷酸化促使核膜解體；核仁蛋白磷酸化，促使核仁解體；p60c-src蛋白磷酸化，促使細胞骨架重排；C-abl蛋白磷酸化，促使細胞形態(tài)調(diào)整等下游細胞周期事件。M期：在中期當MPF活性達到最高時，通過一種未知的途徑，激活后期促進因子APC，將泛素連接在cyclinB和cyclinA上，導致cyclinB和cyclinA被蛋白酶體（proteasome）降解，CDK1激酶活性喪失，被CDK1磷酸化的蛋白質(zhì)去磷酸化，細胞周期便從M期中期向后期轉(zhuǎn)化，完成一個細胞周期對細胞周期產(chǎn)生重要影響的環(huán)境因子：離子輻射、化學物質(zhì)作用、病毒感染、溫度變化、pH變化等。離子輻射對細胞最直接的影響之一是DNA損傷，DNA

57、損傷后會很快啟動DNA損傷修復(fù)調(diào)控體系，抑制細胞周期運轉(zhuǎn)，直到DNA損傷完全修復(fù)，或者最終不能完成修復(fù)，細胞走向死亡。化學物質(zhì)有的可直接參與調(diào)控DNA的代謝，影響細胞周期變化，有的可以通過其他途徑影響酶類和其他調(diào)節(jié)因素的變化，改變細胞周期進程。病毒感染也是影響細胞周期進程的主要因素之一，有的病毒感染能快速抑制細胞周期，有的則可以誘導細胞轉(zhuǎn)化和癌變，使整個細胞周期進程發(fā)生改變。8、 2006簡5#PCC試驗中，當M期細胞與S期細胞融合后，S期PCC染色體在光學顯微鏡下呈現(xiàn)什么形狀，為什么？PCC試驗中，當M期細胞與S期細胞融合后，出現(xiàn)早熟染色體凝集(premature chromosome co

58、ndensation)現(xiàn)象。S期PCC染色體在光學顯微鏡下呈現(xiàn)粉末狀，因DNA由多個部位開始復(fù)制。因為M期細胞具有某種促進細胞進行分裂的因子，即成熟促進因子(maturation promoting factor，MPF)。MPF，由32KD和45KD兩種蛋白組成，二者結(jié)合可使多種蛋白質(zhì)磷酸化。P32是CDC2的同源物，P45是cyclinB的同源物，CDC2與細胞周期蛋白結(jié)合才具有激酶的活性，稱為細胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)，因此CDC2又被稱為CDK1，激活的CDK1可將靶蛋白磷酸化而產(chǎn)生相應(yīng)的生理效應(yīng)，如將核纖層蛋白磷酸化導致核纖層解體、核膜消失，將H1磷酸化導致染色體的凝縮等等。9、2007簡4#敲除了某基因的動物細胞內(nèi)可觀察到紡錘體能將染色體拉向兩極，但并不出現(xiàn)胞質(zhì)分裂，分析可能的原因（P375）胞質(zhì)分裂開始于細胞分裂后期，整個過程包括4個步驟：分裂溝位置的確立，肌動蛋白聚集和收縮環(huán)形成，收