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文檔簡介
1、檢驗(yàn)與臨床 檢驗(yàn)及產(chǎn)品上海同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科 袁維祥主任檢驗(yàn)一般了解1檢驗(yàn)科方法簡單了解2PCT3CRP4心臟標(biāo)準(zhǔn)物5總結(jié)檢驗(yàn)科和實(shí)驗(yàn)室區(qū)別檢驗(yàn)科和實(shí)驗(yàn)室區(qū)別檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科 : 常規(guī)工作常規(guī)工作 量大量大 臨床要求臨床要求快快臨床檢驗(yàn)工作最基本要求臨床檢驗(yàn)工作最基本要求及時及時 方便方便 準(zhǔn)確準(zhǔn)確臨床檢驗(yàn)人員對儀器及試劑要求臨床檢驗(yàn)人員對儀器及試劑要求管用管用 好用好用 實(shí)用實(shí)用實(shí)驗(yàn)室:特殊項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室:特殊項(xiàng)目 科研為主科研為主 量少量少 檢驗(yàn)項(xiàng)目:形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目:形態(tài)學(xué) 定性和定量定性和定量 檢驗(yàn)報告形式一濃度分析1定性2定量二形態(tài)報告1細(xì)胞2細(xì)菌3管型一按反應(yīng)原理分類(定量)一按反應(yīng)原理分類(定
2、量)1 用化學(xué)試劑測定方法叫化學(xué)法。如蛋白用化學(xué)試劑測定方法叫化學(xué)法。如蛋白 鈣鈣 鎂鎂2 用酶測定方法叫酶法。如葡萄糖用酶測定方法叫酶法。如葡萄糖 谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶3用抗原抗體反應(yīng)原理方法叫免疫法。用抗原抗體反應(yīng)原理方法叫免疫法。HBsAg 4用原子吸收方法叫色譜法。鉀用原子吸收方法叫色譜法。鉀 鈉鈉5用電泳分離方法叫電泳法。蛋白電泳用電泳分離方法叫電泳法。蛋白電泳 高壓液相色譜高壓液相色譜6測定蛋白分子用酶聯(lián)聚合反應(yīng)即測定蛋白分子用酶聯(lián)聚合反應(yīng)即PCR方法。方法。DNA7生物傳感器。血?dú)馍飩鞲衅?。血?dú)?血糖血糖二按方法敏感性分類二按方法敏感性分類1 超微量法超微量法 微克以下微克以下
3、 皮克皮克 納克納克 一般用一般用免疫發(fā)光法免疫發(fā)光法 激素激素 腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物 2 微量法微量法 毫克以下毫克以下 微克微克 一般用金標(biāo)一般用金標(biāo)法或膠乳法散射法法或膠乳法散射法 RF CRP3 常量法常量法 克以下克以下 毫克毫克 一般用生化一般用生化法法 白蛋白白蛋白 甘油三脂甘油三脂根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物特性分1比色 常用生化測定2比濁 抗原抗體測定3散射 可標(biāo)記乳膠 4測定光強(qiáng)度 往往標(biāo)記主要反應(yīng)方式1液體反應(yīng) 生化 免疫等成本低 線性寬 靈敏度高 2干式反應(yīng) 干生化 免疫層析 滲濾法 相對靈敏度低 線性窄 成本高 往往單人份包裝標(biāo)記技術(shù)分類標(biāo)記技術(shù)分類1 放射物質(zhì)標(biāo)記放射物質(zhì)標(biāo)記2 熒
4、光物質(zhì)標(biāo)記熒光物質(zhì)標(biāo)記3 酶物質(zhì)標(biāo)記酶物質(zhì)標(biāo)記4 金標(biāo)記(鐵金標(biāo)記(鐵 銅銅 硒)硒)5 發(fā)光物標(biāo)記發(fā)光物標(biāo)記測定方法1決定性方法2參考方法3常規(guī)方法123的過程叫正確度傳遞321的過程叫溯源超微量分析(化學(xué)發(fā)光)目前按方法形式分類目前按方法形式分類 1 板式發(fā)光(包被在板上)板式發(fā)光(包被在板上) 須洗滌和分須洗滌和分離離 反應(yīng)手續(xù)多反應(yīng)手續(xù)多 反應(yīng)反應(yīng) 慢慢均相發(fā)光均相發(fā)光 分洗滌和無洗滌二種分洗滌和無洗滌二種 簡單簡單和反應(yīng)快和反應(yīng)快 發(fā)光按反應(yīng)方式:發(fā)光按反應(yīng)方式: 干式反應(yīng)和濕反應(yīng)干式反應(yīng)和濕反應(yīng) 儀器分:儀器分: 全自動全自動 半自動半自動 化學(xué)發(fā)光發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光分:免疫化學(xué)發(fā)光
5、分: 1 酶底物發(fā)光(鹼性磷酸酶)貝克曼酶底物發(fā)光(鹼性磷酸酶)貝克曼2 直接發(fā)光(丫叮脂)直接發(fā)光(丫叮脂) 西門子西門子 3電發(fā)光(釕)電發(fā)光(釕) 羅氏羅氏 4時間分辨熒光(銪)時間分辨熒光(銪) 德普德普5微粒熒光微粒熒光 透景透景6無須分離直接發(fā)光無須分離直接發(fā)光 博陽博陽方法學(xué)要求1精密度 批內(nèi) 批間 變異系數(shù)CV表示2正確度 和目前公認(rèn)結(jié)果比較 偏差53穩(wěn)定性好4反應(yīng)快5抗干擾能力強(qiáng)分析儀器按反應(yīng)狀態(tài)分類分析儀器按反應(yīng)狀態(tài)分類 1 干式反應(yīng)干式反應(yīng) 萬孚飛測萬孚飛測 金標(biāo)定量金標(biāo)定量 2 濕式反應(yīng)濕式反應(yīng) 生化儀生化儀 發(fā)光儀發(fā)光儀 四四 按反應(yīng)方便程度分類按反應(yīng)方便程度分類 1
6、 手工法手工法 2 半自動半自動 3 全自動全自動儀器要求1精密度好 CV38C 或90次/每分3呼吸頻率20次/每分4白細(xì)胞12000/uL或4000/uLSIRS主要由微生物感染所引起,其他非感染如嚴(yán)重缺氧,燒傷、急性胰腺炎等也可以造成。炎癥診斷試驗(yàn)1,體溫測量2,白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類3,血沉4,血清蛋白電泳5,CRP6, IL-6 IL-8PCT在膿毒血癥應(yīng)用 1, 區(qū)分是否細(xì)菌感染,越高感染病情越重 2,肺炎中應(yīng)用 鑒別細(xì)菌性和病毒性 3,全身性真菌感染應(yīng)用 4, 腦膜炎鑒別中應(yīng)用 5,新生兒感染中應(yīng)用 PCT監(jiān)控具有高度感染的患者應(yīng)用1,重?;颊?,大手術(shù)后3,器官移植PCT在療效觀察中
7、應(yīng)用1,膿毒癥2,多器官衰竭3,休克4,感染后手術(shù)治療CRP1肝臟合成,結(jié)構(gòu)五聚體 是一種急性時相反應(yīng)蛋白。2特點(diǎn):本地很低,當(dāng)受到刺激時(一般6小時)迅速升高可達(dá)1000倍。3臨床應(yīng)用普遍。CRP與PCT的應(yīng)用比較CRP:炎癥過程的篩選 6小時后上升2天達(dá)高峰 CRP高提示病變存在。PCT:診斷和監(jiān)測細(xì)菌性疾病感染一個參數(shù) 是嚴(yán)重細(xì)菌性和真菌感染特異性標(biāo)志。也是膿毒癥和炎癥活動有關(guān)多臟器衰竭的可靠指標(biāo)?;颊吆棉D(zhuǎn)PCT比CRP反應(yīng)快,而CRP有較長時間才下降。CRP和PCT的比較相同:都是急性時相反應(yīng)蛋白CRP是臨床運(yùn)用特點(diǎn)是炎癥指標(biāo),在感染性炎癥和非感染性炎癥,組織損傷、局部和全身的輕度 中
8、度 重度的感染和各種輕中度損傷中應(yīng)用。PCT運(yùn)用在嚴(yán)重細(xì)菌感染及膿毒血癥 CRP和PCT的比較PCT指標(biāo)在細(xì)菌感染方面相對特異CRP指標(biāo)相對特異性差在病毒感染中PCT不升高,CRP會輕中度升高,在細(xì)菌感染中CRP呈現(xiàn)一般中度以上升高,持續(xù)時間長,PCT只有在嚴(yán)重細(xì)菌感染時才會升高,治療好轉(zhuǎn)就下降。檢測項(xiàng)目主要臨床意義臨床意義:共性有二點(diǎn) 1,診斷和鑒別診斷 2,療效觀察PCT臨床意義 PCT作為急性時相反應(yīng)蛋白(APR)一種,一般認(rèn)為在持續(xù)毒素刺激下,68小時開始升高CRP臨床意義1主要用于各種損傷、感染、治療等觀察。2超敏CRP主要用于心血管疾病。BNP 主要用于慢性心衰的評估肌鈣蛋白主要用
9、于心肌損傷及梗死PCT臨床意義總結(jié)PCT只有在嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染及膿毒癥和多臟器功能衰竭時測定才有意義。 在自身免疫、過敏和病毒感染時不升高。因此PCT在細(xì)菌性疾病鑒別、監(jiān)控細(xì)菌性感染及病程預(yù)后估計(jì)等方面有意義。檢驗(yàn)科發(fā)展方向臨床檢驗(yàn)發(fā)展基本要求:圍繞臨床檢驗(yàn)發(fā)展基本要求:圍繞 及時及時 方便方便 準(zhǔn)確方針準(zhǔn)確方針1 整個檢驗(yàn)科全自動整個檢驗(yàn)科全自動2 POCT(即時檢驗(yàn))(即時檢驗(yàn))系統(tǒng)化系統(tǒng)化 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 溯源性溯源性 不準(zhǔn)確度不準(zhǔn)確度4 信息化信息化提高內(nèi)涵、把握方向、持續(xù)進(jìn)步提高內(nèi)涵、把握方向、持續(xù)進(jìn)步1做企業(yè)或公司:誘惑多做企業(yè)或公司:誘惑多 最重要不是選擇而是放最重要不是選擇
10、而是放棄棄 得到空間更大得到空間更大 堅(jiān)信基本判斷堅(jiān)信基本判斷 項(xiàng)目項(xiàng)目找對找對 成功一大半成功一大半2生存法則:守住底線、創(chuàng)造空間生存法則:守住底線、創(chuàng)造空間3確定方向:想做什么?能做什么?確定方向:想做什么?能做什么?4市場要什么:不是你有我有。而是排他性即唯市場要什么:不是你有我有。而是排他性即唯 一性一性5社會需要什么:可靠、放心、方便、環(huán)保社會需要什么:可靠、放心、方便、環(huán)保 最好創(chuàng)造新產(chǎn)業(yè)最好創(chuàng)造新產(chǎn)業(yè)目前市場上哪些品牌可以真正實(shí)現(xiàn)一步法加樣?PCT/心標(biāo)等:明德、樂普、基蛋(金標(biāo)半定量)CRP:迪倍思(金標(biāo)半定量,加樣后需補(bǔ)加緩沖液),其他品牌均需要加樣前稀釋/預(yù)處理國賽CRP-
11、散射比濁法操作步驟:禾柏CRP-散射比濁法艾克美CRP-熒光免疫法奧普CRP-金標(biāo)法凱創(chuàng)CRP-金標(biāo)法熱景CRP-上轉(zhuǎn)發(fā)光法檢驗(yàn)科需要項(xiàng)目和方法 檢測簡單方便 檢測快速,成本低, 高的特異性和敏感性 能夠反映疾病的嚴(yán)重程度 早期準(zhǔn)確診斷 反映預(yù)后和治療的療效全自動 信息化熒光免疫法干式(POCT)國內(nèi)代表萬孚特點(diǎn):專一激發(fā)光及雙抗體保證高特異性;信號級聯(lián)放大保證高靈敏度p光路特異(專一激發(fā)光和吸收光),吸收光背景干凈,光信號特異性高p熒光微球共價標(biāo)記:偶聯(lián)效率高,級聯(lián)放大熒光信號,靈敏度高,量程大p夾心法:免疫反應(yīng)特異性較高常見免疫學(xué)檢測方法方法學(xué)/免疫學(xué) 標(biāo)記物 檢測方法 代表廠家舉例 POCT 熒光定量 熒光免疫層析 雙抗體夾心法 異硫氰酸熒光素 熒光強(qiáng)度 萬孚
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