瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)學(xué)習(xí)教案

1、會計(jì)學(xué)1瘧原蟲檢驗(yàn)瘧原蟲檢驗(yàn)(jinyn)技術(shù)技術(shù)第一頁，共90頁。n惡惡性性瘧瘧原原蟲蟲 P PF Fa al lc ci ip pa ar ru um,m,P. P.f fn三三日日瘧瘧原原蟲蟲 P PMMa al la ar ri ia ae, e,P. P.mmn卵卵形形瘧瘧原原蟲蟲 P PO Ov va al le, e,P. P.o o n我我國國主主要要是是間間日日瘧瘧原原蟲蟲和和惡惡性性瘧瘧原原蟲；蟲；另另二二種種少少見，見，近近年年( (j j n n n ni i n)n)偶偶見見國國外外輸輸入入病病例。例。n其其它它瘧瘧原原蟲蟲n諾諾氏氏瘧瘧原原蟲蟲( (P Pl la

2、as sm mo od di iu um m n no ow wl le es si) i)第1頁/共89頁第二頁，共90頁。計(jì)計(jì)數(shù)數(shù)瘧瘧原原蟲蟲的的基基本本形形態(tài)態(tài)( (x x n ng gt t i) i)特特征征第2頁/共89頁第三頁，共90頁。潔潔精精或或洗洗衣衣粉粉的的熱熱水水洗洗滌，滌，清清水水( (q q n n s sh hu u) )沖沖洗洗后后涼涼干，干，浸浸于于9 95 5% % 的的乙乙醇醇中中1 1小小時(shí)時(shí)以以上上用用綢綢布布擦擦干干置置干干燥燥環(huán)環(huán)境境中中保保存。存。第3頁/共89頁第四頁，共90頁。第二步：患都信息(xnx)的核實(shí)采集血樣涂片時(shí)，首先(shuxin

3、)要核對患者的姓名和年齡并在玻片的右側(cè)編號第4頁/共89頁第五頁，共90頁。第5頁/共89頁第六頁，共90頁。厚血膜厚血膜 用推片的一角，從取血部用推片的一角，從取血部位刮取約位刮取約4 4微升血量（相當(dāng)微升血量（相當(dāng)于火柴頭大?。?，使血滴與于火柴頭大小），使血滴與平置的載玻片接觸，再由里平置的載玻片接觸，再由里向外一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)向外一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)(xunzhun)(xunzhun)，轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)2424圈，涂圈，涂成直徑成直徑0.810.81厘米大小圓形厘米大小圓形厚血膜厚血膜薄血膜再取一小滴血薄血膜再取一小滴血. .將血置于第將血置于第一張玻片離厚血膜適一張玻片離厚血膜適 當(dāng)遠(yuǎn)當(dāng)遠(yuǎn)的地方的地方. .

4、將將 推片的邊緣緊貼推片的邊緣緊貼載玻片，輕輕上下移動(dòng)，使載玻片，輕輕上下移動(dòng)，使血液沿邊緣散開，然后勻速血液沿邊緣散開，然后勻速地向前推進(jìn)，形成薄而平鋪地向前推進(jìn)，形成薄而平鋪的薄血膜的薄血膜第四步：血片制作第四步：血片制作(zhzu)(zhzu)厚血膜薄血膜第6頁/共89頁第七頁，共90頁。制片過程(guchng)圖示標(biāo)簽(bioqin)第7頁/共89頁第八頁，共90頁。標(biāo)簽(bioqin)厚血膜血量不宜過多或過少薄血膜平整(pngzhng),無皺折和空泡.顯微鏡下紅細(xì)胞單層排列第8頁/共89頁第九頁，共90頁。第9頁/共89頁第十頁，共90頁。血片制作血片制作(zhzu)(zhzu)影影

5、響因素響因素不不重重疊、疊、無無裂裂縫、縫、無無皺皺折折和和空空泡，泡，血血膜膜末末端端呈呈舌舌狀；狀；厚厚血血膜膜厚厚度度以以一一個(gè)個(gè)油油鏡鏡視視野野內(nèi)內(nèi)可可見見5 5- -1 10 0個(gè)個(gè)白白細(xì)細(xì)胞胞為為宜；宜；血血片片制制作作場場所所( (c ch h n n s su u)要要保保持持清清潔，潔，以以免免塵塵埃埃沾沾污污血血膜，膜，防防止止蒼蒼蠅蠅等等舔舔食食血血膜；膜；制制成成的的血血片片在在未未干干前前不不能能傾傾斜斜放放置，置，待待其其自自然然干干燥，燥，不不要要加加熱，熱，加加熱熱會會使使原原蟲蟲變變形，形，影影響響鏡鏡檢檢結(jié)結(jié)果果第10頁/共89頁第十一頁，共90頁。兩種染色

6、方法:吉氏染色法 1. 染色原液配制 2. 門診快染、慢染 3. 成批染色和溶血染色 瑞氏染色法 WHO推薦(tujin)使用吉氏染色法第11頁/共89頁第十二頁，共90頁。第12頁/共89頁第十三頁，共90頁。pH7.2的緩沖液。第13頁/共89頁第十四頁，共90頁。血片染色(rns)薄血膜的固定薄血膜的固定厚血膜充分厚血膜充分(chngfn)(chngfn)干燥干燥, , 用用甲醇固定薄血膜，甲醇固定薄血膜， 平放待干平放待干（要點(diǎn)：甲醇不能（要點(diǎn)：甲醇不能觸碰到厚血膜）觸碰到厚血膜）第14頁/共89頁第十五頁，共90頁。血片染色(rns)第15頁/共89頁第十六頁，共90頁。將已固定薄血

7、膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染液（3毫升吉氏染色液加緩沖液或凈水97毫升，混勻）浸沒血片，染色30分鐘。（如染液稀釋液不合標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，得酌情增減染色時(shí)間(shjin)和濃度），然后用清水輕輕將染液漂洗干凈，將染色片插于晾干板上晾干，包裝，待鏡檢。 u成批(chn p)血片染色第16頁/共89頁第十七頁，共90頁。厚血膜溶血(rn xu)染色放置多時(shí)未染色的血片（3天以上，薄片已用甲醇固定），染色之前，須在厚血膜上用清水(qn shu)進(jìn)行溶血，待血膜全部溶解后用3%-5%吉氏染色液染色30分鐘。然后用清水(qn shu)漂洗干凈,晾干。第17頁/共89頁第十八頁，共90頁。外觀(wigun)吉

8、氏染色血片偏 酸偏 堿標(biāo) 準(zhǔn)第18頁/共89頁第十九頁，共90頁。配置完吉氏原液時(shí)必須過濾除去雜質(zhì)顆粒，有助配置完吉氏原液時(shí)必須過濾除去雜質(zhì)顆粒，有助于提高鏡檢質(zhì)量于提高鏡檢質(zhì)量(zhling)(zhling)；染液稀釋后使用時(shí)間：原液必須臨用時(shí)稀釋，隨染液稀釋后使用時(shí)間：原液必須臨用時(shí)稀釋，隨配隨用；配隨用；染液的稀釋濃度；染液的稀釋濃度；染色時(shí)間。染色時(shí)間。染色染色(rns)(rns)質(zhì)量影質(zhì)量影響因素響因素第19頁/共89頁第二十頁，共90頁。染色稀釋染色稀釋(xsh)用水用水: PH7.0-7.2清潔水。清潔水。染色質(zhì)量影響染色質(zhì)量影響(yngxing)(yngxing)因素因素第20

9、頁/共89頁第二十一頁，共90頁。固定薄血膜時(shí)不要將甲醇觸碰到厚血膜；固定薄血膜時(shí)不要將甲醇觸碰到厚血膜；血膜在制備后應(yīng)盡量能在當(dāng)天血膜在制備后應(yīng)盡量能在當(dāng)天(dngtin)(dngtin)染色，一般染色，一般夏天不超過夏天不超過4848小時(shí)，冬天也不能超過小時(shí)，冬天也不能超過7272小時(shí)小時(shí), ,放置時(shí)放置時(shí)間越久，厚血膜越不易脫血，染色效果也差。間越久，厚血膜越不易脫血，染色效果也差。染色質(zhì)量染色質(zhì)量(zhling)(zhling)影響因素影響因素第21頁/共89頁第二十二頁，共90頁。瘧原蟲鏡檢 瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點(diǎn) 瘧原蟲密度計(jì)數(shù)方法 人體四種瘧原蟲的形態(tài)(xngti)特征第22

10、頁/共89頁第二十三頁，共90頁。原蟲(yun chn)鏡檢-金標(biāo)準(zhǔn)第23頁/共89頁第二十四頁，共90頁。瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點(diǎn)第24頁/共89頁第二十五頁，共90頁。血膜血膜) )第25頁/共89頁第二十六頁，共90頁。果果原原蟲蟲密密度度較較低低（2 20 00 0個(gè)個(gè)白白細(xì)細(xì)胞胞中中小小于于1 10 00 0個(gè)個(gè)瘧瘧原原蟲）蟲），可可增增加加白白細(xì)細(xì)胞，胞，計(jì)計(jì)數(shù)數(shù)5 50 00 0個(gè)。個(gè)。密密度度單單位位: :原原蟲蟲數(shù)數(shù)/ / l l計(jì)計(jì)算算公公式：式：瘧瘧原原蟲蟲數(shù)數(shù)計(jì)計(jì)數(shù)數(shù)的的白白細(xì)細(xì)胞胞數(shù)數(shù)患患者者( (h hu u n nz zh h) )每每微微升升血血白白細(xì)細(xì)胞胞數(shù)

11、數(shù)= = 瘧瘧原原蟲蟲數(shù)數(shù)/ / l l血。血。如如果果不不知知患患者者( (h hu u n nz zh h) )的的白白細(xì)細(xì)胞胞數(shù)，數(shù)，則則每每微微升升血血以以8 80 00 00 0個(gè)個(gè)白白細(xì)細(xì)胞胞計(jì)計(jì)數(shù)數(shù)( (國國際際標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)) ) 。第26頁/共89頁第二十七頁，共90頁。厚血膜厚血膜第27頁/共89頁第二十八頁，共90頁。 不需要計(jì)數(shù)(j sh)的視野 需要進(jìn)行白細(xì)胞、瘧原蟲(yun chn)計(jì)數(shù)的視野如果該視野無原蟲(yun chn)，則計(jì)數(shù)白細(xì)胞數(shù) 看到第一個(gè)原蟲(yun chn)開始計(jì)數(shù) 白細(xì)胞原蟲密度計(jì)數(shù)(j sh)方法第28頁/共89頁第二十九頁，共90頁。135（計(jì)數(shù)(

12、j sh)的瘧原蟲數(shù)）200（計(jì)數(shù)(j sh)的白細(xì)胞）x 8000（每微升血白細(xì)胞數(shù)） =5400 / l答：該患者(hunzh)的瘧原蟲密度為5400 / l。第29頁/共89頁第三十頁，共90頁。用厚血膜每個(gè)視野(shy)中所觀察到瘧原蟲的平均數(shù)粗略地估算出瘧原蟲密度。此方法將密度分為6級：1.全厚血膜查見瘧原蟲數(shù)在10個(gè)以內(nèi)，記錄實(shí)際數(shù)字2.全厚血膜查見瘧原蟲數(shù)在10個(gè)以上，但平均每個(gè)視野(shy)不到1個(gè)蟲，記錄“少”3.平均每個(gè)視野(shy)15個(gè)蟲，記錄“”4.平均每個(gè)視野(shy)6 10個(gè)蟲，記錄“+”5.平均每個(gè)視野(shy)11 100個(gè)蟲，記錄“+ ”6.平均每個(gè)視野(

13、shy)100個(gè)蟲以上，記錄“+ ”。 如：Pv R+T+S5G少 這種方法簡便，缺點(diǎn)是計(jì)數(shù)的瘧原蟲數(shù)受血膜厚薄影響，只能定性，不宜作定量分析。半定量(dngling)計(jì)數(shù)法第30頁/共89頁第三十一頁，共90頁。如何(rh)確定瘧原蟲血片為陰性 檢查全部厚血膜視野(shy)未查見瘧原蟲 最少檢查100個(gè)厚血膜視野(shy)未查見 瘧原蟲（臨床病人）第31頁/共89頁第三十二頁，共90頁。瘧原蟲鏡檢第32頁/共89頁第三十三頁，共90頁。i ip pa ar ru um mn間間日日瘧瘧原原蟲蟲P. P. v vi iv va ax xn三三日日瘧瘧原原蟲蟲P. P. m ma al la a

14、r ri ia ae e n卵卵形形瘧瘧原原蟲蟲P. P. o ov va al le e 第33頁/共89頁第三十四頁，共90頁。癥狀癥狀, ,不及時(shí)不及時(shí)(jsh)(jsh)治療可危治療可危及生命（腦型瘧）及生命（腦型瘧）第34頁/共89頁第三十五頁，共90頁。 遍布全球溫帶(wndi)地區(qū)及大片熱帶地區(qū)。在熱 帶非洲，特別是西非則很少見第35頁/共89頁第三十六頁，共90頁。第36頁/共89頁第三十七頁，共90頁。原蟲(yun chn)鏡檢第37頁/共89頁第三十八頁，共90頁。胞、嗜酸性(sun xn)粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）第38頁/共89頁第三十九頁，共90頁。第

15、39頁/共89頁第四十頁，共90頁。血小板第40頁/共89頁第四十一頁，共90頁。各種血細(xì)胞模式圖 1.紅細(xì)胞 2.嗜酸性(sun xn)粒細(xì)胞 3.嗜堿性粒細(xì)胞 4.中性粒細(xì)胞 5.淋巴細(xì)胞 6.單核細(xì)胞 7.血小板 1234567第41頁/共89頁第四十二頁，共90頁。第42頁/共89頁第四十三頁，共90頁。核核胞漿胞漿斑點(diǎn)斑點(diǎn)(bndin)(bndin)第43頁/共89頁第四十四頁，共90頁。瘧色素：不著色，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲種瘧色素：不著色，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲種類而異，瘧色素在蟲體內(nèi)散在分布或聚集類而異，瘧色素在蟲體內(nèi)散在分布或聚集(jj)(jj)成團(tuán)塊成團(tuán)塊。間日瘧原

16、蟲：呈短棒狀，黃褐色；間日瘧原蟲：呈短棒狀，黃褐色；惡性瘧原蟲：呈細(xì)砂狀，黑褐色；惡性瘧原蟲：呈細(xì)砂狀，黑褐色；三日瘧原蟲：呈砂粒狀，深褐色；三日瘧原蟲：呈砂粒狀，深褐色；卵形瘧原蟲：與間日瘧原蟲相似。卵形瘧原蟲：與間日瘧原蟲相似。瘧色素瘧色素(s (s s)s)第44頁/共89頁第四十五頁，共90頁。紅細(xì)胞不漲大紅細(xì)胞不漲大環(huán)狀體纖細(xì)環(huán)狀體纖細(xì), , 常有多重常有多重感染感染(gnrn)(gnrn)，環(huán)狀體，環(huán)狀體內(nèi)可有內(nèi)可有2 2個(gè)核個(gè)核 環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞邊緣邊緣 除環(huán)狀體，配子體外除環(huán)狀體，配子體外沒有其他發(fā)育期沒有其他發(fā)育期配子體呈新月形或臘配子體呈新月形或臘腸形腸

17、形成熟裂殖體約含成熟裂殖體約含16-3216-32個(gè)裂殖子，排列不規(guī)個(gè)裂殖子，排列不規(guī)則則可出現(xiàn)茂氏點(diǎn)可出現(xiàn)茂氏點(diǎn)惡性瘧（惡性瘧（P.falciparumP.falciparum） 鑒定鑒定(jindng)(jindng)要點(diǎn)要點(diǎn)第45頁/共89頁第四十六頁，共90頁。第46頁/共89頁第四十七頁，共90頁。第47頁/共89頁第四十八頁，共90頁。第48頁/共89頁第四十九頁，共90頁。第49頁/共89頁第五十頁，共90頁。21. A member of the UN forces in East Timor. Presented with high temperature. 第50頁/共89

18、頁第五十一頁，共90頁。第51頁/共89頁第五十二頁，共90頁。紅細(xì)胞明顯漲大 薛氏點(diǎn)明顯 成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體胞漿有阿米巴樣偽足血片中可見各期的原蟲(yun chn)形態(tài)成熟裂殖體約含12-24個(gè)裂殖子 間日瘧（P. vivax ） 鑒定(jindng)要點(diǎn)第52頁/共89頁第五十三頁，共90頁。2. Intermittent fever; arrived from India 2 months ago. 第53頁/共89頁第五十四頁，共90頁。第54頁/共89頁第五十五頁，共90頁。第55頁/共89頁第五十六頁，共90頁。第56頁/共89頁第五十七頁，共90頁。第57頁/共89頁第五十八頁

19、，共90頁。紅細(xì)胞不漲大或略小紅細(xì)胞不漲大或略小環(huán)狀體中等大小，核較大，環(huán)狀體中等大小，核較大，胞漿粗厚胞漿粗厚胞漿不活躍呈帶狀形成熟滋胞漿不活躍呈帶狀形成熟滋養(yǎng)養(yǎng)(zyng)(zyng)體呈菊花狀體呈菊花狀, ,內(nèi)含內(nèi)含6-126-12個(gè)裂殖子個(gè)裂殖子雌雄配子體小于正常紅細(xì)胞雌雄配子體小于正常紅細(xì)胞，色素呈深褐色，色素呈深褐色?？刹橐姼麟A段的瘧原蟲常可查見各階段的瘧原蟲三日三日(sn r)(sn r)瘧（瘧（P.malariaeP.malariae） 診斷要診斷要點(diǎn)點(diǎn)第58頁/共89頁第五十九頁，共90頁。第59頁/共89頁第六十頁，共90頁。第60頁/共89頁第六十一頁，共90頁。第61頁

20、/共89頁第六十二頁，共90頁。第62頁/共89頁第六十三頁，共90頁。卵形瘧（P. ovale ） 鑒定(jindng)要點(diǎn)紅細(xì)胞正?；蚵詽q大 常見慧星狀 (也稱齒輪(chln)狀)環(huán)粗大 薛氏點(diǎn)明顯 成熟滋養(yǎng)體類似三日瘧原蟲但更粗大成熟裂殖體約含6-12個(gè)裂殖子 第63頁/共89頁第六十四頁，共90頁。第64頁/共89頁第六十五頁，共90頁。第65頁/共89頁第六十六頁，共90頁。第66頁/共89頁第六十七頁，共90頁。18. Recent trip to Southern India- headaches and vaguely unwell. 第67頁/共89頁第六十八頁，共90頁。類

21、型周 圍 血中 發(fā) 育階段紅細(xì)胞形態(tài)瘧原蟲形態(tài)大小點(diǎn)彩胞漿瘧色素裂殖子數(shù)惡性瘧原蟲環(huán)狀體配子體正 常 大小茂 氏點(diǎn)小滋養(yǎng)體纖細(xì)，常見個(gè)核，一個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)常有2個(gè)以上的原蟲粗黑，配子體中明顯16-32間日瘧原蟲各 期 滋養(yǎng)體裂殖體配子體漲大,可達(dá) 正 常的 1.5-2 倍薛 氏點(diǎn)阿米巴樣滋養(yǎng)體，淺藍(lán)色，活潑金棕色不明顯12-24卵形瘧原蟲各期均有正 常 大小 或 略漲大, 薛 氏點(diǎn)卵圓形滋養(yǎng)體，藍(lán)色較深，核較大深棕色明顯6-12三日瘧原蟲各期均有裂殖體正?；蚵钥s小齊氏點(diǎn)（西門氏）但少見圓形，藍(lán)色深，核緊縮，滋養(yǎng)體胞漿呈帶狀深棕色，粗明顯6-12第68頁/共89頁第六十九頁，共90頁。現(xiàn)現(xiàn)間間日日瘧

22、瘧各各期期原原蟲蟲和和惡惡性性瘧瘧雌雌雄雄配配子子體。體。2 2）同同一一血血膜膜中中發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)大大量量纖纖細(xì)細(xì)的的惡惡性性瘧瘧環(huán)環(huán)狀狀體，體，并并混混有有少少量量( (s sh h o ol li i n ng) g)間間日日瘧瘧原原蟲。蟲。不不易易鑒鑒別別的的混混合合感感染染1 1）間間日日瘧瘧各各期期原原蟲蟲和和粗粗環(huán)環(huán)的的惡惡性性瘧瘧環(huán)環(huán)狀狀體。體。2 2）僅僅有有間間日日瘧瘧和和惡惡性性瘧瘧的的環(huán)環(huán)狀狀體。體。第69頁/共89頁第七十頁，共90頁。厚血膜中容易(rngy)被誤認(rèn)為瘧原蟲的物質(zhì) 未成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞溶血后的殘影易被誤為薛氏點(diǎn) 重疊(chngdi)的血小板易被誤為裂殖體 混雜在稀釋液中的細(xì)菌、植物孢子、酵母、花粉、藻類等很像血液中的多種寄生蟲，如血孢子蟲等，會干擾對瘧原蟲的鑒別。第70頁/共89頁第七十一頁，共90頁。第71頁/共89頁第七十二頁，共9