消痰散結(jié)方抑制胃癌生長和轉(zhuǎn)移的實驗研究

1、成都中醫(yī)藥大學學報Journal of Chengdu University of TCM2003年12月第26卷第4期Dec.2003,Vol.26,No.4基金項目:中國人民解放軍面上新藥基金資助(編號:20006b 作者簡介:蘇小妹,女,1975年11月生;醫(yī)學碩士,住院醫(yī)師;研究方向:消化道腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。消痰散結(jié)方抑制胃癌生長和轉(zhuǎn)移的實驗研究蘇曉妹魏品康許玲陳亞琳(上海長征醫(yī)院中醫(yī)科200003摘要:目的探討消痰散結(jié)方對胃癌生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用。方法將人低分化胃腺癌SGC -7901完整組織塊裸鼠原位種植,建立胃癌轉(zhuǎn)移模型。種植后1周分別給予生理鹽水(對照組,012mL 、5-

2、FU (5-FU 組,012mL ,60mg/kg 1w 、消痰散結(jié)方(消方組,012mL ,25g/kg 1d ,、5-Fu 與消方聯(lián)合應用(5-FU +消方組腹腔注射,5-Fu 每周1次,余每天1次,連續(xù)3周。于第12周處死動物,測定原位腫瘤體積、瘤重、抑瘤率、腫瘤微血管密度,觀察腫瘤肝、腹膜及其它臟器轉(zhuǎn)移及腹水情況。結(jié)果對照組、5-FU 組、消方組、5-FU +消方組瘤重分別為(2126±0178g 、(1110±0196g 、(0163±0141g 、(0161±0149g ;抑瘤率分別為0%、4913%、7210%、7510%;MVD 分別為(

3、1512±313、(1115±116、(517±211、(415±113;肝轉(zhuǎn)移率分別為7510%、4117%、2510%、1617%;消方組與對照組相比,具有顯著性差異(P <0101,與5-Fu 組相比,消方組和5-FU +消方組在瘤重、抑瘤率、MVD 亦具有顯著性差異(P <0105,但肝轉(zhuǎn)移率無明顯差異。結(jié)論消痰散結(jié)方對體內(nèi)胃癌的生長和轉(zhuǎn)移具有一定的抑制作用,且與化療藥物聯(lián)用能起到協(xié)同作用。其機理可能為其通過抗腫瘤血管生成起到抑制腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的目的,有待進一步臨床研究證實。關(guān)鍵詞:消痰散結(jié)方;胃癌;轉(zhuǎn)移;裸鼠模型;血管生成中圖分類號

4、:R28515;R273文獻標識碼:A 文章編號:100420668(20030420020203大量研究表明,血管生成與惡性腫瘤的生長、浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系非常密切,因而應用抗血管生成的方法治療腫瘤日益引起重視。經(jīng)驗方消痰散結(jié)方對胃癌生長的抑制作用已在裸鼠皮下移植瘤實驗中得到證實1,但移植瘤在裸鼠皮下生長時可能被纖維包膜包繞,干擾了腫瘤血管的生成,其生長和轉(zhuǎn)移受到阻礙25,與臨床胃癌病人的生物化學特性有一定差距。為此,我們采用人胃癌細胞株SGC -7901完整組織塊裸鼠原位種植,建立類似于臨床的人胃癌高轉(zhuǎn)移模型,觀察消痰散結(jié)方對胃癌生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用,為腫瘤治療提供新型靶點。1材料和方法1.1實驗

5、材料1.1.1實驗動物BALB/C nu/nu 裸鼠,由中科院國家嚙齒類上海實驗分中心提供,動物合格證號:SYXK (滬2002-0033,雄性,6周齡,體重1820g ,在SPF (specific pathogen free condition 級條件下分籠飼養(yǎng)。1.1.2實驗瘤株為SGC -7901胃癌細胞株、瘤塊。采用中科院上海細胞生物研究所提供的人胃腺癌SGC -7901細胞株,于裸鼠皮下注射成瘤后,反復傳代形成實體瘤,本組瘤源為第6代。1.1.3實驗藥物使用消痰散結(jié)方制劑。該方主要由生南星、生半夏、茯苓、枳實、陳皮、炙甘草等中藥組成,由第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院藥物制劑中心高壓制成無菌針

6、劑,每毫升含生藥2.5g 。置于40C 冰箱備用。使用前先以雙蒸水配成所需濃度。1.2實驗方法1.2.1造模首先建立人胃癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型,其具體方法是:先從荷瘤動物皮下取出符合本實驗要求的實體腫瘤,去除壞死組織,剪成1mm 直徑的碎塊。再將實驗動物用氯胺酮50mg/kg 腹腔麻醉,選擇左側(cè)正中旁切口,打開腹腔,暴露胃壁,在胃大彎近02胃竇處植入1塊瘤組織,在瘤塊表面滴上少許OB 生物膠(由廣州白云醫(yī)用膠公司提供,使其覆蓋瘤組織表面,約40秒凝固后,縫合腹膜及皮膚,再關(guān)腹,即完成造模工作。整個過程嚴格遵循無菌操作。1.2.2實驗分組及給藥瘤體種植后1周,將存活的裸鼠隨機分為組(陰性對照組、

7、組(5-FU組、組(消痰散結(jié)方組和組(5-FU+消方組,每組12只。組腹腔注射生理鹽水0.2mL;組注射5-FU,60mg/ kg.w;組注射0.2mL,25g/kg.d,消痰散結(jié)方制劑;組以5-Fu與消痰散結(jié)方方聯(lián)合應用,相關(guān)劑量和注射方式分別與組和組相同。5-Fu每周注射1次,生理鹽水和消痰散結(jié)方每天注射1次,連續(xù)注射3周。1.2.3腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的測定(1瘤重、腫瘤體積及抑瘤率:種植后第12周待荷瘤鼠頻臨衰竭時,拉頸處死,剝離原位腫瘤,稱取瘤重W,并計算抑瘤率(%=(W對照組-W實驗組/W對照組×100%;再分別放入盛有適量(腫瘤組織能完全浸入雙蒸水的量筒中,記下高度B (單位

8、厘米,測定置入后的高度A,按公式V=(A -BR2c m3,計算腫瘤體積。(2觀察消方對胃癌的轉(zhuǎn)移抑制情況:取下各臟器及淋巴結(jié),用10%甲醛固定石蠟包埋、切片,HE 染色,作組織病理學檢查。收取腹水,觀察腹水出現(xiàn)情況。(3采用免疫組化因子染色檢測腫瘤微血管密度(microvessel density,MVD,先在低倍光鏡下觀察整個切片,找出高血管密度區(qū),再記數(shù)5個200倍視野下被抗因子抗體染成棕色的血管數(shù)目,以平均數(shù)(MVC表示6。1.3統(tǒng)計學處理各組之間的比較采用方差分析,各臟器轉(zhuǎn)移及腹水出現(xiàn)情況用2檢驗。2結(jié)果2.1消方對裸鼠人胃癌原位種植腫瘤體積、瘤重、抑瘤率的影響對照組荷瘤鼠胃壁均有腫

9、瘤生長,多呈圓形,實質(zhì)性,表面有結(jié)節(jié)狀隆起,呈淡紅色魚肉狀,中心有壞死。經(jīng)方差分析,消方組、5-FU+消方組與對照組相比,瘤體積、瘤重、抑瘤率,其差異均有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01;經(jīng)兩兩分析,與5-FU組相比,消方組、5-FU+消方組的瘤體積、瘤重之差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05;表明消方對胃癌生長有明顯抑制作用,且與5-FU聯(lián)用有協(xié)同作用(見表1。表1消痰散結(jié)方對胃癌生長的抑制作用( x±s組別n瘤體積(cm3瘤重(g抑瘤率MVD 對照組12 1.55±0.73 2.26±0.780%15.2±3.3 5-FU組120.93±

10、;0.31 1.10±0.9649.3%11.5±1.6消方組120.56±0.390.63±0.4172.0% 5.7±2.15-FU+消方組120.53±0.420.62±0.4975.0% 4.5±1.3與對照組相比,P<0.01,P<0.05;與5-FU組相比,P<0.05112消方對腫瘤微血管密度的作用鏡下觀察可見,對照組實體瘤血管生成活躍, MVC為15.20±3.3,而消方組、5-FU+消方組血管生成明顯抑制,與對照組相比,其差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01。(1方

11、對胃癌轉(zhuǎn)移抑制情況:消方對腫瘤胃周淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移率及癌性腹水形成有一定抑制作用,與對照組相比較,其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01。雖然從實驗結(jié)果看,消方組與5-FU組在抑制轉(zhuǎn)移上其差異無統(tǒng)計學意義,但胃周淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移率分別減少了25.0%、16.7%,抑制轉(zhuǎn)移作用較5-FU組仍強,見表2。表2消方對胃癌轉(zhuǎn)移的抑制作用( x±s組別胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率肝臟轉(zhuǎn)移率腹水形成率對照組100%(12/1275.0%(9/1283.3%(10/125-FU組66.7%(8/1241.7%(5/1250.0%(6/12消方組41.7%(5/1225.0%(3/1233.3%(4/125-F

12、U組+消方組33.3%(4/1216.7%(2/1225.0%(3/12與對照組相比,P<0.0112第4期蘇曉妹等消痰散結(jié)方抑制胃癌生長和轉(zhuǎn)移的實驗研究3討論(1動物模型的可行性:人類腫瘤裸鼠移植模型成為腫瘤實驗研究的主要方法,以往多是皮下移植,但可能因皮下纖維包膜的包繞轉(zhuǎn)移較少,不能確切地表現(xiàn)臨床胃癌轉(zhuǎn)移潛能。Morikawa7等將人結(jié)腸癌細胞種植到裸鼠體內(nèi)不同部位,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其轉(zhuǎn)移潛能明顯不同。認為腫瘤生長的部位對其轉(zhuǎn)移潛能有著直接影響。然而最近研究表明,腫瘤細胞株原位種植裸鼠體內(nèi)不能完全表達腫瘤的生物學特性,而完整組織塊原位移植可顯著提高轉(zhuǎn)移率8。我們采用“OB生物膠粘貼法”將人胃

13、癌組織塊在裸鼠體內(nèi)原位種植造成高轉(zhuǎn)移模型,與臨床胃癌生長特征相似,是一種較合適的動物模型。(2消方對胃癌的生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用:祖國醫(yī)學認為腫瘤的病機主要是氣滯、血瘀、痰凝、毒聚和正氣虛弱等方面,其中痰濁與腫瘤的關(guān)系尤為密切?！疤抵疄槲?隨氣升降,無處不到”,說明痰濁形成后,隨氣升降出入,內(nèi)而臟腑,外至筋骨,無處不到,與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移特性非常類似。痰濁作為臟腑功能失調(diào)的病理產(chǎn)物,同時又是致病因素,在腫瘤的形成、增殖及轉(zhuǎn)移中均具有重要作用。消方主要有半夏、南星等中藥組成,兩者均為燥濕化痰、消痞散結(jié)的常用藥物?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)化痰祛濕藥對腫瘤有直接抑制作用。半夏的稀醇水或水浸液對動物實驗性腫瘤小鼠肝癌

14、和人的子宮頸癌細胞都具有明顯的抑制作用;鮮天南星的水提醇沉制劑體內(nèi)實驗對小鼠肉瘤S180、實體型和子宮頸型U14等瘤株均有顯效抑制作用9,10。因此消痰散結(jié)之品無論從傳統(tǒng)醫(yī)學及現(xiàn)代研究都證明有消散腫塊、贅生物作用。本研究結(jié)果表明,消方組原位腫瘤體積、瘤重、腫瘤微血管密度較對照組明顯降低,具有高度統(tǒng)計學意義,其抑瘤率亦顯著高于對照組,可見消痰散結(jié)方對胃癌生長和轉(zhuǎn)移及腹水的形成均有明顯抑制作用。腫瘤的生長轉(zhuǎn)移均需要血液供應,新生血管的形成必不可少。消方能明顯抑制周圍微血管的生長,可能通過抑制血管生成來進一步達到抑制腫瘤生長轉(zhuǎn)移的作用,其機理有待于進一步深入研究。參考文獻1王建平,魏品康,李毅華,等

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