醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)一(抗原抗體反應(yīng))

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室Tel:姓名第一講抗原抗體反應(yīng)antigen-antibody reaction什么是抗原抗體反應(yīng)？ 抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制自然發(fā)生，也可在體外作為免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果出現(xiàn)。在體內(nèi)，可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，有時(shí)亦可引起免疫病理損傷，在體外，依相應(yīng)抗原物理性狀 (顆粒狀或可溶性)以及反應(yīng)的條件 (電解質(zhì)、補(bǔ)體等)不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1. 特異性 Ab 1Ab2Ab3抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)2.比例 性抗體過?？贵w過剩抗原過剩

2、抗原過?？乖贵w比例合適抗原抗體比例合適抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 3.可逆性 體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素電電 解解 質(zhì)質(zhì) 溫溫 度度 酸酸 堿堿 度度 作用時(shí)間作用時(shí)間抗原抗體反應(yīng)類型可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的凝集反應(yīng)抗原抗體結(jié)合后激活補(bǔ)體所致的細(xì)胞溶解反應(yīng)細(xì)菌外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反應(yīng)免疫標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)。凝集反應(yīng)-ABO-ABO血型的鑒定血型的鑒定實(shí) 驗(yàn) 目 的1. 熟悉凝集反應(yīng)的定義及血型鑒定實(shí)驗(yàn)的原熟悉凝集反應(yīng)的定義及血型鑒定實(shí)驗(yàn)的原理。理。2. 掌握血型鑒定實(shí)驗(yàn)的操作及結(jié)果的正確觀掌握血型鑒定實(shí)驗(yàn)的操作及結(jié)果的正確觀察與判斷。察

3、與判斷。3.了解血型鑒定實(shí)驗(yàn)的用途。了解血型鑒定實(shí)驗(yàn)的用途。凝集反應(yīng)定義：在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）和相應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見的凝集塊直接凝集間接凝集間接凝集抑制試驗(yàn) 抗球蛋白試驗(yàn)間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)間接凝集抑制間接凝集抑制抗球蛋白法檢測IgG抗體的原理概 述 1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)- ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)者-奧地利科學(xué)家 Karl Landsteiner【實(shí)驗(yàn)原理】血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的+實(shí)驗(yàn)器材1：載玻片、采血針、牙簽等2

4、2：A A型和型和B B型標(biāo)準(zhǔn)血清、酒精棉球型標(biāo)準(zhǔn)血清、酒精棉球操作步驟1.取載玻片，酒精消毒正面，在背面標(biāo)記A和B兩區(qū)2.酒精消毒指端皮膚和采血針后，用采血針刺破皮膚，擠出少量血液，涂在玻片A、B兩區(qū)，并立即用無菌干棉球壓迫止血3.在兩區(qū)分別滴加一滴抗A定型試劑和抗B定型試劑，立即用牙簽混勻4.靜置3分鐘，觀察凝聚現(xiàn)象，判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ABO血型檢查臨床意義 1.輸血：輸血前必須檢查血型，選擇血型相同的供血者，進(jìn)行交叉配血完全相合才能輸血。 2.母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病，主要是依靠血型血清學(xué)檢查來診斷。 3.器官移植時(shí)受者與供者也必須ABO血型相符合才能移植，血型不

5、符極易引起急性排異反應(yīng)、導(dǎo)致移植失敗。 4.ABO血型與疾病之間的聯(lián)系也有一些報(bào)道，某些看來造血系統(tǒng)無關(guān)的疾病實(shí)際上可能與紅細(xì)胞血型抗原有關(guān)。沉淀反應(yīng)-對流免疫電泳對流免疫電泳沉淀反應(yīng)可溶性抗原在有適量電解質(zhì)存在的條件下與相應(yīng)的抗體結(jié)合，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)類型： 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀反應(yīng)絮狀反應(yīng)瓊脂擴(kuò)散瓊脂擴(kuò)散單向擴(kuò)散單向擴(kuò)散雙向擴(kuò)散雙向擴(kuò)散 電泳電泳火箭電泳火箭電泳對流免疫電泳對流免疫電泳單向擴(kuò)散Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel單向擴(kuò)散雙向擴(kuò)散即將抗原和抗體分別加入瓊脂對應(yīng)的孔中，二者會向四周擴(kuò)散，

6、在形成白色沉淀線。二者比例合適處二者比例合適處雙向擴(kuò)散電 泳 定義：即帶電顆粒在電場的作用下向著相反的電極移動，稱為電泳。原理：蛋白質(zhì)分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及側(cè)鏈的游離基團(tuán)而成為帶電顆粒，并可在電場內(nèi)移動，其移動方向取決于蛋白質(zhì)分子所帶靜電荷。不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值，攜帶的靜電荷不盡相同，致使它們在電場中的遷移率各異，從而達(dá)到分理的目的?；鸺庖唠娪净鸺庖唠娪緦α髅庖唠娪緦α髅庖唠娪緦?shí)質(zhì)上是由電泳定向加速的雙向擴(kuò)散抗原在電泳時(shí)從負(fù)極向正極移動抗體由正極向負(fù)極移動實(shí)驗(yàn)器材1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%的瓊脂、記號筆2 2：酒精燈、火柴、電爐、電泳儀、電泳槽：酒精燈、火柴、電爐、電泳儀、電泳槽3 3：微量加樣器、抗原及抗體樣品：微量加樣器、抗原及抗體樣品操作步驟制板制板打孔打孔封底封底加樣加樣電泳電泳34ml瓊脂瓊脂孔間距孔間距3mm約約7ul切割火焰切割火焰23次次總電流總電流4mA/cm x 2.5cm(板寬板寬) x N(板數(shù)）板數(shù)）30分鐘分鐘 抗原抗原 抗體抗體對流免疫電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果對流免疫電泳思