生物催化原理與應(yīng)用在手性藥物合成領(lǐng)域的進(jìn)展

1、生物催化原理與應(yīng)用在手性藥物合成領(lǐng)域的進(jìn)展1.生物催化的特點(diǎn)生物催化是指利用酶或者生物有機(jī)體 （全細(xì)胞、 細(xì)胞器、組織等 ） 作為催化劑進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化的過(guò)程，又被稱(chēng)為生物轉(zhuǎn)化。生物催化反應(yīng)具有高度的化學(xué)、 區(qū)域和立體選擇性， 應(yīng)用生物催化不對(duì)稱(chēng)合成技術(shù)生產(chǎn)手性藥物可獲得的產(chǎn)物光學(xué)活性純度高， 產(chǎn)率高， 有些可達(dá) 100%1 。微生物是生物催化中常用的有機(jī)體催化劑，本質(zhì)是利用微生物細(xì)胞中的酶催化非天然有機(jī)體化合物的生物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化液經(jīng)分離純化可得所需產(chǎn)品的過(guò)程 2 。自然界中微生物種類(lèi)繁多， 含酶豐富， 因此利用微生物可進(jìn)行多種生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)。微生物生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)具有選擇性高， 尤其是立體選擇性高的特點(diǎn)

2、， 可順利地完成一般化學(xué)方法難以實(shí)現(xiàn)的反應(yīng)； 反應(yīng)條件溫和， 尤其適用于不穩(wěn)定化合物的制備。微生物生物轉(zhuǎn)化既可以采用游離的細(xì)胞， 也可以使用固定化細(xì)胞作為催化劑進(jìn)行轉(zhuǎn)化。到目前為止， 微生物生物轉(zhuǎn)化法已在一些有機(jī)酸、 抗生素、 維生素、 氨基酸、 核苷酸和甾體激素等方面實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化生產(chǎn) 3 。生物催化技術(shù)能夠大大地增加衍生物的多樣性，能夠有效地對(duì)復(fù)雜產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和從簡(jiǎn)單的分子構(gòu)建新的化合物庫(kù)， 在此過(guò)程中， 往往能夠發(fā)現(xiàn)新的生理活性物質(zhì)。利用生物催化發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物的優(yōu)越性在于：可能進(jìn)行反應(yīng)的范圍廣； 能夠定向進(jìn)行區(qū)域選擇和立體選擇； 不需基團(tuán)保護(hù)和脫保護(hù)， 一步實(shí)現(xiàn)所需的反應(yīng)； 在溫和和均

3、一的條件下可容易地實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和一步反應(yīng)的重現(xiàn)性；溫和的反應(yīng)條件保證了復(fù)雜易變的分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性；高的催化活性可以降低催化劑的用量；酶的固定化可以使催化劑反復(fù)和循環(huán)使用； 生物催化劑可在環(huán)境中完全被降解。生物催化過(guò)程一般無(wú)污染或污染較少、 能耗相對(duì)較低， 是一種環(huán)境友好的合成方法 4 。2.手性化合物的認(rèn)識(shí)與發(fā)展手性是自然界物質(zhì)的基本屬性， 構(gòu)成生命有機(jī)體的分子都是不對(duì)稱(chēng)分子， 生命中普遍存在的糖為 D 型、 氨基酸為L(zhǎng) 型、 DNA 的螺旋構(gòu)象和蛋白質(zhì)都是右旋， 并且生命體內(nèi)許多內(nèi)源性化合物， 包括與藥物發(fā)生藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)相互作用的天然大分子都具有手性。因此手性藥物已成為國(guó)際新藥研究與開(kāi)發(fā)的新

4、方向之一 5 。2005 年世界手性藥物的總銷(xiāo)售額達(dá)到 1 720 億美元，2010 年可望超過(guò) 2500 億美元6 。這一發(fā)展趨勢(shì)的內(nèi)在動(dòng)力來(lái)源于單一對(duì)映體手性藥物巨大且仍在不斷增長(zhǎng)的市場(chǎng)需要。而生物催化手性化合物具有一般化學(xué)方法無(wú)可比擬的優(yōu)點(diǎn):反應(yīng)條件溫和、 產(chǎn)物比較單一、 具有很高的立體選擇性、 區(qū)域選擇性和化學(xué)選擇性， 并且能完成一般化學(xué)方法難以完成的反應(yīng)等， 這使得生物催化合成手性化合物的方法成為日益關(guān)注的熱點(diǎn) 7 。3.手性藥物的概念與藥物作用的特性手性藥物是指分子結(jié)構(gòu)中含有手性中心或者不對(duì)稱(chēng)中心的藥物， 它包括單一立體異構(gòu)體、 2 個(gè)或 2 個(gè)以上立體異構(gòu)體的混合物。由于藥物作用

5、靶點(diǎn)(如受體、 酶或離子通道等)結(jié)構(gòu)上的高度立體特異性， 手性藥物的不同立體異構(gòu)體與靶點(diǎn)的相互作用不同， 從而產(chǎn)生不同的藥理學(xué)活性， 表現(xiàn)出立體選擇性8 。手性藥物又可以分為:(1)光學(xué)異構(gòu)體， 光學(xué)異構(gòu)又稱(chēng)旋光異構(gòu)， 是立體異構(gòu)的一種。從分子的對(duì)稱(chēng)性來(lái)看， 分子中不存在旋轉(zhuǎn)- 反映軸。當(dāng)分子中一個(gè)碳原子與 4 個(gè)不同的原子或原子團(tuán)鏈接時(shí)， 就可能有 2 種光學(xué)異構(gòu)體。使偏振光向左旋的稱(chēng)左旋體或 l- 體， 使偏振光向右旋的稱(chēng)右旋體或 d- 體。他們的空間結(jié)構(gòu)像實(shí)物和鏡像或者左手和右手的關(guān)系， 彼此互為對(duì)映體。如青霉素， 這種抗生素的成效取決于病菌細(xì)胞內(nèi)的丙氨酸屬于 D 型異構(gòu)還是 L 型異構(gòu)

6、， 因?yàn)榍嗝顾乇仨毲抑荒苣７录?xì)菌壁上的 D 型丙氨酸鏈且通過(guò)這樣與細(xì)菌中的轉(zhuǎn)肽酶反應(yīng)并抑制起作用 9 ;(2)幾何異構(gòu)體， 因雙鍵或者碳原子的單鍵不能自由旋轉(zhuǎn)而引起的異構(gòu)體稱(chēng)為幾何異構(gòu)體， 又稱(chēng)順?lè)串悩?gòu)體。如二十世紀(jì) 50 年代中期 ， “反應(yīng)?！?(Thalidomide， 沙利度胺)作為鎮(zhèn)靜劑用于消除孕婦早期妊娠反應(yīng)， 但不久就發(fā)現(xiàn)服用此藥的孕婦生出的嬰兒出現(xiàn)畸形， 經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)具有鎮(zhèn)靜作用的是 R- 對(duì)映體， 而致畸作用的是由 S- 對(duì)映體引起的10 。手性藥物進(jìn)入體內(nèi)后與機(jī)體內(nèi)具有高度立體特異性的代謝酶及血漿蛋白或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等相互作用， 手性藥物的不同異構(gòu)體在體內(nèi)也將表現(xiàn)出不同的藥代動(dòng)力學(xué)

7、特征， 具有立體專(zhuān)一性。需要注意的是， 有些手性化合物在體內(nèi)甚至可能發(fā)生構(gòu)型變化而改變其藥效和毒副作用 11 。4.手性藥物的合成手性藥物的生產(chǎn)分為化學(xué)法和生物學(xué)法。化學(xué)方法手性拆分難度大, 試劑昂貴,且造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染, 不利于工業(yè)化生產(chǎn);生物轉(zhuǎn)化法較化學(xué)合成具有明顯優(yōu)勢(shì)。生物轉(zhuǎn)化實(shí)質(zhì)是酶促反應(yīng), 酶促反應(yīng)具有化學(xué)選擇性、 區(qū)域選擇性、 和對(duì)映體選擇性, 利用酶的這些性質(zhì)可以合成手性藥物。合成手性藥物的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)大致可分為兩類(lèi): 一類(lèi)是把外消旋體拆分兩個(gè)光活性的對(duì)映體; 另一類(lèi)是從外消旋體或前手性的前體出發(fā), 通過(guò)催化反應(yīng)得到不對(duì)稱(chēng)的光學(xué)活性產(chǎn)物。4.1生物拆分制備手性化合物外消旋體

8、的拆分是指將外消旋混合物中的一對(duì)對(duì)映體進(jìn)行分離的方法， 生物拆分即微生物或酶的選擇性拆分就是利用生物酶或者是含有活性酶的微生物菌體作為生物催化劑， 將其中一個(gè)對(duì)映體進(jìn)行選擇性轉(zhuǎn)化， 達(dá)到外消旋拆分的目的。4.1.1?；D(zhuǎn)移酶 采用?；D(zhuǎn)移酶 I( acylase I) 拆分化學(xué)合成的消旋體N-?；?氨基酸來(lái)制取對(duì)映體純 D-或 L構(gòu)型氨基酸, 在氨基酸工業(yè)生產(chǎn)上是非常重要的方法將化學(xué)合成的 DL?氨基酸乙?；? 用米曲霉的?；杆獠鸱? 可得到 L-氨基酸和 D-乙酰氨基酸。D-異構(gòu)體可經(jīng)消旋反復(fù)利用再拆分, 理論上可得到 100% 的單一異構(gòu)體, 用此方法也可獲得非天然的 D-氨基酸。(

9、 如 D-丙氨酸, Pfizer 公司人工甜味劑 alitame 的組成分) 。這是比較經(jīng)典的酶法拆分方法, 這種方法幾乎適用于所有合成法生產(chǎn)的 DL-氨基酸的拆分。由于合成 DL-氨基酸成本低廉, 不少 L-氨基酸可以用酶法拆分制備。利用氨基酰化酶進(jìn)行乙酰-DL-氨基酸不對(duì)稱(chēng)水解反應(yīng), 然后再利用生成的 L-氨基酸與N-?；?D-氨基酸的溶解度之差進(jìn)行分離,所制得的 L-氨基酸光學(xué)純度好、 收率高, 而且 D 型組分很容易消旋化。1955 年這種方法就已用于工業(yè)生產(chǎn), 1969 年日本 制藥的千 一郎( Chibata I)開(kāi)始采用固定化酶裝置連續(xù)生產(chǎn)。固定化米曲霉( Asp.oryzae)

10、 產(chǎn)生的氨基酰化酶柱非常穩(wěn)定, ( 酶活性下降時(shí)可補(bǔ)加酶溶液進(jìn)行簡(jiǎn)單的再生) , 使用期達(dá)5 年以上。一個(gè) 1 000 L 酶柱月產(chǎn)量 10 32 t。此方法適用于多種 L-氨基酸的生產(chǎn)。這種方法曾用于生產(chǎn) L-丙氨酸、 L-蛋氨酸、 L-色氨酸、 L-纈氨酸等。我國(guó)最近報(bào)道篩選了高酶活的菌種, 用于 L-蛋氨酸的生產(chǎn), 并較好地解決了 D-乙酰蛋氨酸的消旋問(wèn)題?？赏麑?shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)12。4.1.1 脂肪酶脂肪酶催化合成(s)-萘普生萘普生(+)一甲基一6一甲氧基一2一萘乙酸是世界上應(yīng)用最多的非甾體類(lèi)抗炎鎮(zhèn)痛藥物。臨床研究表明，(s)一萘普生的生理活性是其對(duì)映體的28倍，并作

11、為單一對(duì)映體藥物用于人體。Salgin13 等用皺褶假絲酵母脂肪酶(CRL)在超臨界二氧化碳存在下的含水緩沖溶液異辛烷反應(yīng)體系中立體選擇性水解消旋萘普生甲酯。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)映體比率隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，對(duì)映體選擇率(E)為236，轉(zhuǎn)化率(z)為416，產(chǎn)物對(duì)映體過(guò)剩值(eep)為982，底物對(duì)映體過(guò)剩值(ees)為700。在超臨界二氧化碳中選擇合適的反應(yīng)體系和實(shí)驗(yàn)條件，產(chǎn)物對(duì)映體過(guò)剩值、對(duì)映體比率、轉(zhuǎn)化率、酶活性和穩(wěn)定性均能達(dá)到較好的水平。脂肪酶催化合成(s)-酮洛芬酮洛芬(一甲基-3-苯甲酰基一苯乙酸)的羧基口一碳是手性中心，存在(R)一和(S)一對(duì)映體。然而，(S)一酮洛芬

12、和(R)一酮洛芬卻顯示了不同的藥理活性。(S)一對(duì)映體可用于減緩炎癥和減輕疼痛，而(R)一對(duì)映體活性很低，甚至在有些情況下，還有不必要的生理副作用和毒性。最近，Long等14克隆了粘質(zhì)沙雷菌ECUl010的一種脂肪酶，并在大腸桿菌中表達(dá)，這種重組脂肪酶能立體選擇性水解(R，S)一酮洛芬酯合成(S)一酮洛芬，eep達(dá)到916，E達(dá)到63，z高達(dá)482。重組脂肪酶也表現(xiàn)了很高的立體選擇性，這為得到具有更高活性的脂肪酶提供了另外一條途徑。脂肪酶催化合成(s)-布洛芬布洛芬2一(4一異丁基苯基)丙酸是常用的非甾體類(lèi)抗炎鎮(zhèn)痛藥物，廣泛用于治療頭痛和輕微的疼痛。消旋布洛芬的兩個(gè)對(duì)映體只有(S

13、)一對(duì)映體具有抗炎的特性|。有報(bào)道稱(chēng)(S)-布洛芬酸的鎮(zhèn)痛作用是(R)一對(duì)映體的160多倍，(R)一布洛芬不僅沒(méi)有活性并且還可能引起副作用。為了合成光學(xué)純的(S)一布洛芬，很多研究者對(duì)脂肪酶催化消旋布洛芬的酯交換反應(yīng)進(jìn)行了研究。Wang等15在親水醋酸纖維素疏水聚四氟乙烯薄膜復(fù)合材料中設(shè)計(jì)了一種特殊的微結(jié)構(gòu)作為脂肪酶的載體，手性拆分消旋布洛芬，產(chǎn)物對(duì)映體過(guò)剩值和對(duì)映體選擇率均比自由脂肪酶催化體系顯著提高，這種固定化載體改善了脂肪酶的立體選擇性和穩(wěn)定性。脂肪酶催化合成(S)一氟比洛芬與當(dāng)前使用的大多數(shù)芳基丙酸類(lèi)NSAIDs相比，氟比洛芬2一(2一氟一4一聯(lián)苯)一丙酸是以R(一)一體

14、和S(+)一體的混合形式被人體吸收的。越來(lái)越多的研究表明，R(一)一氟比洛芬和S(+)一氟比洛芬具有不同的藥理學(xué)活性。Bae等16用來(lái)自粘質(zhì)沙雷菌ES一2的脂肪酶立體選擇性水解(R，S)一氟比洛芬乙酯合成(S)-氟比洛芬。反應(yīng)24 h后，在獲得較高轉(zhuǎn)化率的同時(shí)，ee、z和E分別高達(dá)985、451和332，顯示該酶在合成(S)一氟比洛芬方面具有良好的應(yīng)用前景。4.1.2絲氨酸肽鏈內(nèi)切酶內(nèi)切酶是一類(lèi)水解酶，能催化肽鍵的水解，因此也能水解蛋白質(zhì)。這類(lèi)酶也具有高的化學(xué)、區(qū)域和立體選擇性，反應(yīng)條件溫和(pH 68)且易于處理，不需要輔因子。傳統(tǒng)上內(nèi)切酶一直應(yīng)用于食品工業(yè)，由于其高度立體選擇性，它們已作為

15、生物轉(zhuǎn)化催化劑應(yīng)用于化學(xué)工業(yè)，而且廣泛應(yīng)用于肽的合成和作為在動(dòng)力學(xué)拆分過(guò)程中酯交換反應(yīng)的催化劑。瑞士的霍夫曼拉一羅氏公司利用枯草桿菌蛋白酶催化水解2一芐基一3一(2一甲基一1一嗎啉代一1一氧代丙烷一2一基磺酰基)丙酸乙酯，得到手性(S)一2一芐基一3一(2一甲基一1一嗎啉代一1一氧代丙烷一2一基磺酰基)丙酸，它是合成腎素抑制劑瑞米吉侖和環(huán)丙吉侖的手性中間體。在這個(gè)過(guò)程中，枯草桿菌溶素懸浮在水一有機(jī)溶劑兩相體系(1：1)，產(chǎn)率50，對(duì)映體過(guò)量大于9917。4.1.3 環(huán)氧化物水解酶 環(huán)氧化物水解酶廣泛存在于自然界中, 在哺乳動(dòng)物、 植物、 昆蟲(chóng)、 絲狀真菌、 細(xì)菌以及赤酵母中均有發(fā)現(xiàn)。環(huán)氧化物水

16、解酶是一組功能相似的酶系, 能夠立體選擇性地催化水解環(huán)氧化合物生成光學(xué)活性環(huán)氧化物和相應(yīng)水溶性的鄰位二醇 ,因此在手性催化反應(yīng)中有重要作用。近年來(lái), 環(huán)氧化物水解酶的不對(duì)稱(chēng)催化反應(yīng)已經(jīng)成為合成靶物質(zhì)的重要方法。Cleij18等利用黑曲霉環(huán)氧化物水解酶催化 -甲基-異丁基苯乙烯環(huán)氧化物得到了光學(xué)活性的環(huán)氧化合物開(kāi)環(huán)。這個(gè)開(kāi)環(huán)化合物可進(jìn)一步用于合成生物活性抗炎藥物( S)-異丁基苯丙酸( 布洛芬)。4. 1. 4-酮酸脫羧酶-酮酸脫羧酶包括丙酮酸脫羧酶、 苯甲酰甲酸脫羧酶和苯基丙酮酸脫羧酶, 到現(xiàn)在為止, 丙酮酸脫羧酶是-酮酸脫羧酶中了解最多的酶。后 2種研究相對(duì)較少。丙酮酸脫羧酶廣泛分布于小麥、

17、 玉米、 水稻、大豆等植物中。它是一種焦磷酸硫胺素( T PP) 依賴(lài)性的非氧化酶, 在 T PP 和Mg 2+ 的輔助作用下能夠使-酮基羧酸脫羧, 進(jìn)而與醛類(lèi)發(fā)生縮合反應(yīng), 生成手性-羥基酮類(lèi)化合物。丙酮酸脫羧酶是一種底物范圍廣, 反應(yīng)速度快, 合成效率高, 產(chǎn)物具有高度立體選擇性的生物催化劑, 在合成制藥工業(yè)上有重要用途。David19 等人分別利用乙醛、 丙醛、 2-呋喃醛、 3-呋喃醛、 2-噻吩甲醛和 3 -噻吩甲醛等與丙酮酸反應(yīng), 成功地得到了對(duì)應(yīng)的-羥基酮類(lèi)化合物。4.2 生物轉(zhuǎn)化合成手性藥物生物轉(zhuǎn)化合成手性藥物其本質(zhì)是利用微生物細(xì)胞內(nèi)的酶催化非天然有機(jī)化合物的生物轉(zhuǎn)化。該方法是

18、利用氧化還原酶、 羥化酶、 合成酶、 裂解酶、 水解酶、 縮醛酶等催化的不對(duì)稱(chēng)合成反應(yīng)， 將化學(xué)合成的前體轉(zhuǎn)化為結(jié)構(gòu)復(fù)雜的手性醇、 醛、 酮、 胺、 酸、 酯、 酰胺等衍生物20 。4.2.1氧化反應(yīng)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑最初是作為降壓藥研制的， 近年來(lái)， 其適應(yīng)癥擴(kuò)大至心力衰竭、 急性心肌梗死、 動(dòng)脈粥樣硬化性血管疾病、 糖尿腎病的治療21 。Ceranopril是一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑， 它的合成需要芐酯基- L-羥基賴(lài)氨酸作為手性中間體 。Hanson 等人首先用 Provi-dencia alcalifaciens 細(xì)胞將 N- - 芐酯基- L- 賴(lài)氨酸氧化脫氨生成相應(yīng)

19、的酮酸， 酮酸再用 L- 羥基異己酸脫氫酶催化生成芐酯基- L- 羥基賴(lài)氨酸， 反應(yīng)產(chǎn)率可達(dá)到 95%， 光學(xué)純度高達(dá)98. 5%， 反應(yīng)中 NADH 的再生是通過(guò)甲酸脫氫酶來(lái)完成的 22 。.4.2.2 縮合反應(yīng) 他汀類(lèi)藥物是羥甲基戊二酰輔酶 A(HMG- CoA)還原酶抑制劑， 在他汀類(lèi)藥物前體合成中利用來(lái)自大腸桿菌的 5- 磷酸脫氧核糖醛縮酶(DEAR)可以催化一連串的醛縮合生成一種化合物， 該化合物可以為不同的他汀類(lèi)藥物合成提供側(cè)鏈的手性中間體。但來(lái)自與大腸桿菌的這種酶的催化效率不是很高， 經(jīng)過(guò)酶活性和序列的篩選方法， 從基因組文庫(kù)中獲得了一種新型 DERA 使化合物5 光學(xué)純度 99

20、. 9% 23 。4.2.3酯解反應(yīng) 恩替卡韋(entecavir， Baraclude)是一種鳥(niǎo)嘌呤核苷類(lèi)似物對(duì)乙肝病毒具有抑制作用。恩替卡韋三磷酸鹽能抑制病毒多聚酶(逆轉(zhuǎn)錄酶) 的所有 3 種活性:(1)HBV 多聚酶的啟動(dòng);(2)前基因組 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄負(fù)鏈的形成;(3)HBV 的 DNA 正鏈合成24 。手性單乙酸酯是合成恩替卡韋的關(guān)鍵性中間體， 經(jīng)證實(shí)用來(lái)自于 P. cepacia 的脂肪酶 PS- 30 水解(1， 2， 3)- 2- (芐氧基)甲基 -4- 環(huán)戊烯- 1， 3- 二醇二乙酸酯可以得到該中間體， 產(chǎn)率為 75%， 光學(xué)純度是 98. 5%。同樣利用脂肪酶 PS-

21、30 水解(1， 2， 3)- 2- (芐氧基)甲基 -4- 環(huán)戊烯-1， 3- 二醇可以得到相應(yīng)的乙酸酯產(chǎn)率 80%， 光學(xué)純度為 98% 25 。5. 總結(jié)兩種生物催化制備手性化合物的方法：消旋體的拆分和潛手性化合物的不對(duì)稱(chēng)合成。微生物或酶催化不對(duì)稱(chēng)合成( 也稱(chēng)生物催化合成) , 能高度立體選擇性地制備手性化合物。選擇性生物催化合成已成為合成手性化合物的最有意義方法之一，但是不對(duì)稱(chēng)化學(xué)合成方法也有一定難度, 反應(yīng)步數(shù)較多, 要使用價(jià)昂的對(duì)映體試劑( 二磷配體與銥、銠、 釕的絡(luò)化物等) 。生物法拆分可以直接利用微生物(微生物法)，也可將酶自微生物細(xì)胞中分離出來(lái)再利用(酶法)?？梢岳靡粋€(gè)酶或

22、一系列酶的催化作用，在后一種情況，通常無(wú)需將幾種酶分離，而是利用整體細(xì)胞，即所謂的微生物法。其實(shí)質(zhì)仍是酶法拆分，因?yàn)檎嬲鹱饔玫氖敲?。酶催化發(fā)展空間巨大，未來(lái)的前景不可限量。生物拆分法的優(yōu)點(diǎn)： 種類(lèi)多，可催化的反應(yīng)范圍廣。生物催化劑催化的反應(yīng)通常具有高度的立體專(zhuān)一性。因此, 得到的產(chǎn)物旋光純度很高, 適于作各種生物活性和藥理試驗(yàn); 副反應(yīng)少, 產(chǎn)率高, 產(chǎn)品分離提純簡(jiǎn)單;反應(yīng)條件溫和(常溫、常壓，pH值接近中性)，可簡(jiǎn)化工藝，降低設(shè)備投資與生產(chǎn)成本 生物催化劑無(wú)毒, 易降解, 對(duì)環(huán)境友好, 適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。參考文獻(xiàn)1 Kawano S， Horikawa M， Yasohara Y， e

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