血液學血細胞化學染色

1、第三章 細胞化學染色技術 學習目標1.掌握：細胞化學染色的基本步驟；鐵染 色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘 酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷 酸酶染色的正常血細胞染色反應和臨床 意義。2.熟悉：細胞化學染色的概念和臨床應用。3.了解：細胞化學染色的原理和影響因素。一、概念 細胞化學染色是細胞學和化學相結合細胞化學染色是細胞學和化學相結合而形成的一門科學。它以而形成的一門科學。它以細胞形態(tài)學細胞形態(tài)學為為基礎，結合運用基礎，結合運用化學反應的原理化學反應的原理對血細對血細胞內的各種胞內的各種化學成分化學成分(酶類酶類/脂類脂類/糖類糖類/鐵鐵/蛋白質蛋白質/核酸等核酸等)作作定性、定位、半

2、定量定性、定位、半定量分析的方法。分析的方法。要求：血細胞化學染色的基本要求是在血細胞化學染色的基本要求是在原位原位顯顯示細胞成分和結構，反應產物應是示細胞成分和結構，反應產物應是有色有色沉淀物沉淀物，具有一定的，具有一定的穩(wěn)定穩(wěn)定性。性。血細胞化學染色可顯示血細胞化學染色可顯示糖原、脂類、酶糖原、脂類、酶、蛋白質、蛋白質等。等。二、必要性從形態(tài)學觀察，存在較多的主觀性；從形態(tài)學觀察，存在較多的主觀性；有些原始細胞形態(tài)較相似，難以鑒別；有些原始細胞形態(tài)較相似，難以鑒別；結合細胞化學染色，提高疾病的診斷率。結合細胞化學染色，提高疾病的診斷率。三、臨床應用1. 輔助判斷急性白血病的細胞類型輔助判斷

3、急性白血病的細胞類型 2. 輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別 診斷診斷 3. 觀察疾病的療效和預后觀察疾病的療效和預后疾病疾病發(fā)病機制的探討發(fā)病機制的探討白血病的診斷：白血病的診斷：MICM分型分型 M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology形態(tài)學分型：進行初步的診斷形態(tài)學分型：進行初步的診斷免疫學分型：明確細胞種類免疫學分型：明確細胞種類細胞遺傳學分型：與疾病預后有關細胞遺傳學分型：與疾病預后有關分子生物學分型：提高到分子水平分子生物學分型：提高到分子水平四、基本步驟1. 固定固定（1）物理

4、法：干燥、火焰）物理法：干燥、火焰（2）化學法：）化學法： A、蒸氣固定：、蒸氣固定：甲醛甲醛 B、液體固定、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。酮。2. 顯示：有色沉淀反應顯示：有色沉淀反應（1）偶氮偶聯法：酯酶染色）偶氮偶聯法：酯酶染色（2）聯苯胺法：）聯苯胺法：POX（3）普魯士藍反應：）普魯士藍反應：Fe（4）希夫反應：）希夫反應：PAS（5）金屬沉淀法：）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：）物理顯色法：SBB3. 復染：使各種細胞能顯示出來復染：使各種細胞能顯示出來鐵染色鐵染色-中性紅、伊紅中性紅、伊紅PAS-甲基綠甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。核：中性紅、甲

5、基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。 五、研究對象五、研究對象 外周血和骨髓外周血和骨髓新鮮涂片新鮮涂片單個細胞中單個細胞中的化學物質：的化學物質： 酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質、核酸等酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質、核酸等 第二節(jié) 常用細胞化學染色技術 鐵染色鐵染色 過氧化物酶染色過氧化物酶染色 蘇丹黑蘇丹黑B B染色染色 酯酶染色酯酶染色 過碘酸過碘酸- -希夫反應希夫反應 中性粒細胞堿性磷酸酶染色中性粒細胞堿性磷酸酶染色 酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色 一、一、 鐵鐵 染染 色色 （ferric stainferric stain）亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀 亞鐵氰化

6、鐵亞鐵氰化鐵( (藍色沉淀在含藍色沉淀在含FeFe部位部位) )鐵鐵酸性環(huán)境酸性環(huán)境普魯士藍普魯士藍 反應反應 骨髓小粒中的含骨髓小粒中的含FeFe血黃素（細胞外鐵）血黃素（細胞外鐵）骨髓中貯存鐵骨髓中貯存鐵 幼紅細胞內的幼紅細胞內的FeFe（細胞內鐵）（細胞內鐵）原理原理 二、結果判斷二、結果判斷2. 細胞內鐵(中晚幼紅細胞，油鏡觀察)（1）分級）分級(按鐵顆粒數量的多少及大小按鐵顆粒數量的多少及大小) 細小顆粒：細沙樣鐵小粒，不易看清細小顆粒：細沙樣鐵小粒，不易看清。 粗大顆粒：很容易看清的顆粒。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率）陽性率 觀察觀察100個中個中晚幼紅細胞，計算出鐵晚

7、幼紅細胞，計算出鐵 粒幼紅細胞的百分比。粒幼紅細胞的百分比?！窘Y果判斷結果判斷】 幼紅細胞核染色為鮮紅色幼紅細胞核染色為鮮紅色, ,鐵粒呈鐵粒呈藍綠色。藍綠色。 環(huán)形鐵粒幼紅細胞環(huán)形鐵粒幼紅細胞(ringed sideroblast) 幼紅細胞胞質內鐵顆粒幼紅細胞胞質內鐵顆粒6個，圍繞個，圍繞 核周核周2/3以上者。以上者。 鐵粒幼紅細胞鐵粒幼紅細胞(sideroblast)： 胞質中出現藍色鐵顆粒的幼紅細胞。胞質中出現藍色鐵顆粒的幼紅細胞。 鐵粒紅細胞鐵粒紅細胞(siderocyte)： 胞質中出現藍色鐵顆粒的成熟紅細胞。胞質中出現藍色鐵顆粒的成熟紅細胞。綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細胞；藍色箭

8、頭示：鐵粒紅細胞綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細胞；藍色箭頭示：鐵粒紅細胞1. 細胞外鐵細胞外鐵： （ + ） （ + ）2. 細胞內鐵：細胞內鐵：鐵粒幼紅細胞陽性率大約鐵粒幼紅細胞陽性率大約 1244%， III型（型（ I型為主），無型為主），無 型、型、型、環(huán)形鐵粒幼紅細胞及鐵粒型、環(huán)形鐵粒幼紅細胞及鐵粒 紅細胞。紅細胞。 三、參考范圍三、參考范圍四、臨床意義 鐵染色是評估鐵缺乏最實用的方法，是反映儲存鐵的金標準，是臨床應用最廣泛的細胞化學染色之一。 1. 缺鐵性貧血：缺鐵性貧血： 外鐵（），內鐵外鐵（），內鐵15%。 4. 非缺鐵性貧血：非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、溶貧、巨幼貧、再障、

9、 白血病等，內外鐵正常或增多。白血病等，內外鐵正?；蛟龆?。 5. 感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等： 外鐵外鐵增多增多。 五、應用評價 鐵染色是臨床常用的一種細胞化學鐵染色是臨床常用的一種細胞化學 染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反 映機體儲存鐵的映機體儲存鐵的金標準金標準。 外鐵外鐵：反映骨髓中鐵的儲存量；：反映骨髓中鐵的儲存量； 內鐵內鐵：反映骨髓中可利用的鐵量。：反映骨髓中可利用的鐵量。 二、過氧化物酶染色二、過氧化物酶染色 （peroxidase,POXperoxidase,POX） 一、原 理 粒細胞和部分單核細胞的

10、溶酶體顆粒中粒細胞和部分單核細胞的溶酶體顆粒中含含 有有過氧化物酶過氧化物酶(POX)，它可分解它可分解H2O2釋放釋放出新生出新生 態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯苯胺，形成態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯苯胺，形成金黃色不金黃色不 溶性沉淀，定位于溶性沉淀，定位于胞質內酶所在的活胞質內酶所在的活性性部位。部位。 二甲基聯苯胺法（二甲基聯苯胺法（DABDAB）原理）原理 POX 新生態(tài)氧新生態(tài)氧 O O過氧化氫過氧化氫（基質中）（基質中）四甲基聯苯胺四甲基聯苯胺 （無色）（無色）聯苯胺藍（藍色）聯苯胺藍（藍色）亞硝基鐵氰化亞硝基鐵氰化鈉鈉 藍色顆粒藍色顆粒（漿內酶部位）（漿內酶部位）粒、單核粒、單核細胞胞漿

11、細胞胞漿【原理原理】 在細胞質內出現金黃色顆粒為在細胞質內出現金黃色顆粒為陽性反應。陽性反應。（）【結果判斷結果判斷】 - -、 、+ +、+、+、+弱陽性弱陽性 顆粒小，分布稀疏顆粒小，分布稀疏陽性陽性 顆粒稍粗，分布較密集顆粒稍粗，分布較密集強陽性強陽性 顆粒粗大，密布于整個胞漿顆粒粗大，密布于整個胞漿POX結果判斷結果判斷細胞質內有細胞質內有藍黑色顆粒藍黑色顆粒者為陽性者為陽性。（）（） 無顆粒沉著；（無顆粒沉著；（a）（） 顆粒細小顆粒細小 ，分布稀疏，分布稀疏；（；（b）（+） 顆粒較粗，局灶分布；顆粒較粗，局灶分布；（c） （+） 顆粒粗大，分布較密，顆粒粗大，分布較密，占胞質占胞

12、質 1/22/3 ；（；（d）（+） 顆粒粗大，呈團塊分顆粒粗大，呈團塊分布；（布；（e）（+） 全部胞質均部滿顆粒全部胞質均部滿顆粒，可覆蓋胞核（，可覆蓋胞核（f） ?！菊Ｑ毎旧磻Ｑ毎旧磻?1. 1.粒細胞系統(tǒng)粒細胞系統(tǒng) POXPOX主要存在于粒系細胞中。主要存在于粒系細胞中。 分化差的原粒細胞陰性分化差的原粒細胞陰性; ; 分化好的原粒細胞至中性成熟粒細胞各分化好的原粒細胞至中性成熟粒細胞各階段均呈陽性，陽性反應程度隨細胞的成階段均呈陽性，陽性反應程度隨細胞的成熟逐漸增強。熟逐漸增強。 中性分葉核粒細胞：中性分葉核粒細胞：強陽性強陽性 嗜酸粒細胞：嗜酸粒細胞：陽性最強陽

13、性最強 嗜堿粒細胞：嗜堿粒細胞：（）（） 2.2.單核細胞系統(tǒng)單核細胞系統(tǒng) 陰性或弱陽性陰性或弱陽性 3.3.淋巴細胞系統(tǒng)淋巴細胞系統(tǒng) 紅細胞系統(tǒng)紅細胞系統(tǒng) 巨核細胞系統(tǒng)巨核細胞系統(tǒng) 陰性陰性 漿細胞漿細胞 組織細胞組織細胞 四、臨床意義 鑒別急性白血病的類型鑒別急性白血病的類型首選首選（1）急淋和急性髓細胞系的鑒別：急淋和急性髓細胞系的鑒別：急淋：（），陽性率急淋：（），陽性率3%；急單：弱陽性；急單：弱陽性；急粒：陽性（急粒：陽性（ + + + + ）。）。 2. 單核細胞系統(tǒng)：單核細胞系統(tǒng)：或弱（或弱（+ +），陽性顆粒少而細小。），陽性顆粒少而細小。 3. 其它系統(tǒng)細胞：其它系統(tǒng)細胞：

14、 淋巴細胞系統(tǒng)、紅細胞系統(tǒng)、巨核淋巴細胞系統(tǒng)、紅細胞系統(tǒng)、巨核 細胞系統(tǒng)、漿細胞、組織細胞細胞系統(tǒng)、漿細胞、組織細胞 【臨床評價臨床評價】 急性髓細胞白血病急性髓細胞白血病 急性淋巴細胞白血病急性淋巴細胞白血病 鑒別鑒別 1. 1. 急性髓細胞白血病急性髓細胞白血病 （1 1）急性粒細胞白血?。┘毙粤＜毎籽?陽性陽性反應反應 （2 2）急性單核細胞白血?。┘毙詥魏思毎籽?弱陽性弱陽性反應反應 2. 2. 急性淋巴細胞白血病急性淋巴細胞白血病 陰性陰性反應或反應或陽性率陽性率 3%( 3%(殘留原粒細胞殘留原粒細胞) )ALLALL原粒陰性原粒陰性原粒弱陽性原粒弱陽性原粒陽性原粒陽性 早

15、幼粒早幼粒 強陽性強陽性 一、原理 蘇丹黑蘇丹黑B是一種是一種脂溶性脂溶性重氮染料，可溶解重氮染料，可溶解 細胞內含脂結構細胞內含脂結構(中性脂肪、磷脂、糖脂和類中性脂肪、磷脂、糖脂和類 固醇固醇)，而使脂類物質顯示出來，呈而使脂類物質顯示出來，呈棕黑色或棕黑色或 深黑色深黑色(粒細胞：豐富；單核細胞：少量粒細胞：豐富；單核細胞：少量)。 三、三、 蘇丹黑蘇丹黑B染色染色（Sudan black B，SBB）正常血細胞的染色反應與POX染色基本一致臨床意義 與POX染色相似 二、SBB與POX區(qū)別： 1. POX特異性高于特異性高于SBB，而敏感性，而敏感性 低于低于SBB； 2. POX染色

16、要求涂片新鮮，保持酶活染色要求涂片新鮮，保持酶活 性，性，SBB染色可用陳舊涂片。染色可用陳舊涂片。 1. 特異性酯酶（特異性酯酶（specific esterase） 主要存在于粒細胞，又稱主要存在于粒細胞，又稱“粒細胞酯酶粒細胞酯酶” 氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚酯酶萘酚酯酶（NAS-DCE）。 1. 氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 Naphthol AS-D chloroacetate esterase 1. 原理原理 氯乙酸氯乙酸AS-D萘酚萘酚 AS-D萘酚萘酚 不溶性的有色不溶性的有色(紅紅)沉淀。沉淀。 NAS-DCE幾乎僅出現在粒細胞，其特異性高，幾乎僅出現在粒細胞，

17、其特異性高， 因此又稱為因此又稱為“粒細胞酯酶粒細胞酯酶” NAS-DCE 重氮鹽重氮鹽(堅牢藍紫醬堅牢藍紫醬) 氯氯乙酸乙酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 2. 正常血細胞的染色反應 粒系粒系(酶活性不隨細胞成熟而增強酶活性不隨細胞成熟而增強) 原粒（）或（原粒（）或（+） 早幼粒早幼粒成熟中性粒細胞（成熟中性粒細胞（+ ） 嗜酸性粒細胞嗜酸性粒細胞（）或弱（）或弱（+） 嗜堿性粒細胞（嗜堿性粒細胞（+） 單核細胞系統(tǒng)：單核細胞系統(tǒng)： 肥大細胞：肥大細胞：（ 淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、 巨核細胞、血小板：巨核細胞、血小板： 3. 臨床意義 主要用于輔助鑒別急性

18、白血病細胞類型：主要用于輔助鑒別急性白血病細胞類型： 急性粒細胞白血病急性粒細胞白血病： （+） 急性早幼粒細胞白血?。簭姡毙栽缬琢＜毎籽。簭姡?） 急性單核細胞白血?。海ǎ┘毙詥魏思毎籽。海ǎ?急粒急粒-單：粒細胞（單：粒細胞（+）單核細胞（）單核細胞（） 急性巨核細胞性白血?。海ǎ┘毙跃藓思毎园籽。海ǎ?急性淋巴細胞白血?。海ǎ┘毙粤馨图毎籽。海ǎ?原原 理理 ： 非特異性脂酶在相應的非特異性脂酶在相應的pH環(huán)境中，環(huán)境中， 將基質液中相應底物水解，產生含萘酚將基質液中相應底物水解，產生含萘酚 的物質，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯反應，的物質，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯反應， 形成不溶

19、性的有色沉淀，定位于細胞質形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質 內酶所在的部位。內酶所在的部位。 根據根據pH值的不同分為：值的不同分為： 酸性：酸性：酸性酸性- 醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(ANAE) 中性：中性：- 醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(- NAE) 醋酸醋酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色(NAS-DAE) 堿性：堿性：-丁酸萘酚酯酶染色丁酸萘酚酯酶染色(- NBE) 名稱名稱pHpH底物底物生成物生成物重氮鹽重氮鹽( (產物顏色產物顏色) )-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶(-NAE)中中-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘酚萘酚堅牢藍堅牢藍B棕黑棕黑,灰黑灰黑醋酸醋酸AS-D萘酚酯萘酚酯

20、酶酶 (AS-D NAE)中中醋酸醋酸AS-D萘萘酚酚AS-D萘萘酚酚堅牢藍堅牢藍BB藍藍-丁酸萘酚酯酶丁酸萘酚酯酶(-NBE)堿堿-丁酸萘酚丁酸萘酚-萘酚萘酚堅牢紫醬堅牢紫醬GBC紅紅酸性酸性-醋酸萘酚醋酸萘酚酯酶酯酶(ANAE)酸酸-醋酸萘酚醋酸萘酚-萘萘酚酚六偶氮六偶氮付品紅付品紅紅紅 1.1. - -醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色（-naphthol acetate esterase-naphthol acetate esterase，-NAE-NAE）-醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 （細胞內）（細胞內）-醋酸萘酚醋酸萘酚 （基質液中）（基質液中）-萘酚萘酚 重氮鹽重氮鹽（堅牢藍（堅牢藍

21、B B）胞漿不溶性灰黑色胞漿不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀或棕黑色沉淀水解水解【原理原理】【結果判斷結果判斷】 胞漿內有胞漿內有灰黑色或棕黑色灰黑色或棕黑色彌散性顆粒彌散性顆粒狀沉淀為陽性。狀沉淀為陽性。-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色灰黑色、棕黑色)-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色a:單核單核 b:BPC c:巨核巨核 d:LC(+) e:幼紅幼紅(-) 氟化鈉抑制試驗氟化鈉抑制試驗 在基質液中加入適量在基質液中加入適量NaF,NaF,其余染色方其余染色方法同上。法同上。 兩種方法染色后用油鏡計數兩種方法染色后用油鏡計數100100或或200200個個被檢細胞，分別計算出抑制

22、前和抑制后被檢細胞，分別計算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。的陽性率或陽性積分。 氟化鈉抑制率氟化鈉抑制率= =抑制前陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分 - -抑制后陽性率或陽性積分抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100% A A圖：急性單核細胞白血病圖：急性單核細胞白血病-NAE-NAE染色染色 原始、幼稚單核細胞多呈強陽性 B B圖：急性單核細胞白血病圖：急性單核細胞白血病 -NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細胞陽性反應被氟化鈉抑制（與A圖為同一標本） A A B B 【臨床評價臨床評價】 急單急單 急粒急粒 急性早幼粒急性早幼粒 急粒單急粒單

23、急淋急淋-NAE-NAE + +或或 - -或或 + + 陽性陽性 - - + + 弱弱+ + NaF NaF 被抑制被抑制 不被不被 不被抑制不被抑制 部分被抑制部分被抑制 抑制抑制 部分未被抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型主要用于鑒別急性白血病類型 2. 臨床意義 輔助鑒別急性白血病細胞類型輔助鑒別急性白血病細胞類型 急單：單核細胞陽性，急單：單核細胞陽性，能被能被NaF抑制抑制。 急粒：粒細胞弱陽性，急粒：粒細胞弱陽性，不被不被NaF抑制抑制。 M3：強陽性，：強陽性，不能被不能被NaF抑制抑制。 M4：部分部分陽性細胞陽性細胞能被能被NaF抑制抑制， 部分部分陽性細胞陽性細胞

24、不能被不能被NaF抑制抑制。 ALL：原幼淋陰性或陽性，：原幼淋陰性或陽性，不能被不能被NaF 抑制抑制?！菊Ｑ毎旧磻Ｑ毎旧磻?.1.單核細胞系統(tǒng)單核細胞系統(tǒng) 原始單核細胞原始單核細胞 分化差分化差 陰性陰性 分化好分化好 陽性陽性 幼稚及成熟單核細胞幼稚及成熟單核細胞 陽性陽性被氟化鈉抑制被氟化鈉抑制 2.2.粒細胞系統(tǒng)粒細胞系統(tǒng) 原粒細胞原粒細胞陰性或弱陽性陰性或弱陽性 以下階段為以下階段為弱陽性弱陽性 3.3.淋巴細胞系統(tǒng)淋巴細胞系統(tǒng) 多數多數陰性陰性，少數，少數弱陽性弱陽性 不被氟化鈉抑制不被氟化鈉抑制 2.-丁酸奈酚酯酶染色丁酸奈酚酯酶染色-NBE 原理：原理：

25、血細胞中血細胞中-NBE在堿性條件下，基在堿性條件下，基質液中的質液中的-丁酸奈酚水解，產生丁酸奈酚水解，產生-奈酚奈酚，后者與堅牢醬紫，后者與堅牢醬紫GBC偶聯，形成不溶偶聯，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質內。性紅色沉淀，定位于胞質內。-NBE染色反應染色反應1.粒系：各期（粒系：各期（-）2.單核系：分化差的原單（單核系：分化差的原單（-）；分化好的原）；分化好的原 單單（+） 幼單幼單成熟單核（成熟單核（+），），可被可被NaF抑制抑制3.淋巴系：淋巴系：TC、非、非T非非B（+） BC （+） 4.其他細胞其他細胞 ： 巨核、有核紅細胞、漿細胞（巨核、有核紅細胞、漿細胞（-）或弱（）或

26、弱（+） 組織細胞組織細胞 (+) , 不被不被NaF抑制抑制3.酸性酸性-醋酸奈酚酯酶染色醋酸奈酚酯酶染色ANAE 原理： 血細胞中的酸性酸性-醋酸奈酚酯酶醋酸奈酚酯酶（ANAE）在）在pH弱酸性（弱酸性（pH5.8）的條件）的條件下，可水解基質液中的下，可水解基質液中的-醋酸奈酚，產醋酸奈酚，產生生-奈酚，進而與重氮鹽六偶氮付品紅奈酚，進而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細胞質內形成不溶性紅色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。酶所在的部位。酸性酸性-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）-M5ANAE染色反應1.單核系：強（+）可被可被NaF抑制抑制

27、2.淋巴系：TC （+）BC （-）3.其他細胞：粒系（-）或弱（+）不被被NaF 抑制抑制 紅系、巨核系（紅系、巨核系（-） 4. 酯酶雙染色酯酶雙染色 在同一張涂片上進行兩種酯酶染色在同一張涂片上進行兩種酯酶染色特異性酯酶特異性酯酶 + + 非特異性酯酶非特異性酯酶 對診斷急性粒對診斷急性粒- -單細胞白血病有獨特價值單細胞白血病有獨特價值 -NAE 與與NAS-DCE 紅色紅色(單單) -NBE 與與 NAS-DCE 蘭色蘭色(粒粒)骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細胞胞漿呈藍色CE陽性反應；而原始單核細胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應。五、過碘酸五

28、、過碘酸- -希夫反應希夫反應 ( ( 糖原染色糖原染色 ) )（periodic acid-Schiff reactionperiodic acid-Schiff reaction，PASPAS）雙醛基雙醛基過碘酸過碘酸希夫試劑中希夫試劑中的無色品紅的無色品紅 紫紅色化合物紫紅色化合物 ( (附于含多糖類附于含多糖類 的胞漿內的胞漿內) ) 乙二醇基乙二醇基( (多糖類物質含有多糖類物質含有) )氧化氧化【原理原理】 過碘酸是氧化劑，使含有過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇乙二醇 基基的多糖類物質的多糖類物質(糖原、糖蛋白、糖脂、糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖粘多糖等等)氧化，氧化，形成形成雙醛基雙醛

29、基。醛基與。醛基與Schiff s液中的無色品紅結合，使無色液中的無色品紅結合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于品紅變成紫紅色化合物，定位于含多糖含多糖類類的細胞內。的細胞內。 一、原理一、原理【結果判斷結果判斷】陽性陽性 胞漿內紅色陽性物呈彌散狀、顆胞漿內紅色陽性物呈彌散狀、顆 粒狀或塊狀。粒狀或塊狀。陰性陰性 胞漿內無色或無顆粒胞漿內無色或無顆粒, ,核淡綠。核淡綠。 1. 粒細胞系統(tǒng)：粒細胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強）（陽性逐漸增強） 原始粒原始粒C（）或（）或（+） 早幼粒早幼粒C成熟中性粒成熟中性粒C（+）：）： 細顆粒均勻紅色細顆粒均勻紅色 嗜酸粒嗜酸粒C：顆粒不著色，：顆粒不著色，胞

30、質呈紅色胞質呈紅色。 嗜堿粒嗜堿粒C：顆粒陽性顆粒陽性，胞質不著色。，胞質不著色。 二、正常血細胞的染色反應二、正常血細胞的染色反應 2.單核細胞系統(tǒng)：分化差（）其他（單核細胞系統(tǒng)：分化差（）其他（+），）， 粗顆粒狀粗顆粒狀。 3.淋巴細胞系統(tǒng)：多數（）少數（淋巴細胞系統(tǒng)：多數（）少數（+），）， 粗顆?；驂K狀粗顆?；驂K狀。 4.紅細胞系統(tǒng)：（），紅細胞系統(tǒng)：（），病理情況可（病理情況可（+）。）。 5.巨核細胞系統(tǒng)：（巨核細胞系統(tǒng)：（+），顆粒狀或塊狀。），顆粒狀或塊狀。 6.其它細胞：漿細胞（），巨噬細胞（其它細胞：漿細胞（），巨噬細胞（+）a 粒細胞、粒細胞、b 巨核細胞、巨核細胞、c

31、 單核細胞、單核細胞、d 幼紅細胞幼紅細胞 三、結果判斷三、結果判斷 1. 粒細胞系統(tǒng)：粒細胞系統(tǒng)： 紅色、彌散狀。紅色、彌散狀。 各種細胞陽性反應強弱不同各種細胞陽性反應強弱不同 2. 淋巴細胞系統(tǒng)：淋巴細胞系統(tǒng)： 粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。1、+ 2、+ 3、+ 4、+ 5、 3. 紅細胞系統(tǒng)：紅細胞系統(tǒng)： 均勻紅色或塊狀均勻紅色或塊狀 4. 單核細胞系統(tǒng)：單核細胞系統(tǒng)： 粗顆粒狀粗顆粒狀 5. 巨核細胞和血小板：巨核細胞和血小板： 顆粒狀、塊狀。顆粒狀、塊狀。1.巨核細胞和血小板陽性巨核細胞和血小板陽性 1. 幫助鑒別巨幼細胞性貧血和骨幫助鑒別巨幼細胞性

32、貧血和骨 髓增生異常綜合征、紅白血病髓增生異常綜合征、紅白血病: 前者（），后兩者（前者（），后兩者（+）。）。 四、臨床意義四、臨床意義急性淋巴細胞白血病急性淋巴細胞白血病PAS染色染色原始、幼稚淋巴細胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性 109110 2. 幫助鑒別急性白血病的細胞類型：幫助鑒別急性白血病的細胞類型： 急淋：（急淋：（+ +）呈粗顆粒狀或塊狀。）呈粗顆粒狀或塊狀。 急粒：（急粒：（+ +）細顆粒狀或均勻紅色。）細顆粒狀或均勻紅色。 急單：（急單：（+ +）細顆粒狀，均勻分布，）細顆粒狀，均勻分布， 有時胞質邊緣顆粒較粗大。有時胞質邊緣顆粒較粗大。 3. 其他細胞：其他細胞： 骨髓轉移性

33、腺癌細胞細胞呈強陽性骨髓轉移性腺癌細胞細胞呈強陽性 霍奇金淋巴瘤霍奇金淋巴瘤RSRS細胞多呈陰性或弱陽性細胞多呈陰性或弱陽性 戈謝細胞呈強陽性戈謝細胞呈強陽性 尼曼尼曼- -皮克細胞多呈陰性或弱陽性皮克細胞多呈陰性或弱陽性CLLALL 六、六、中性粒細胞堿性磷酸酶染色中性粒細胞堿性磷酸酶染色 （neutrophilic alkalineneutrophilic alkaline phosphatase phosphatase，NAPNAP）磷酸萘酚鈉磷酸萘酚鈉 （基質中）（基質中）中性粒細胞中性粒細胞胞漿中胞漿中NAPNAP磷酸鈉磷酸鈉-萘酚萘酚 重氮鹽重氮鹽（堅牢藍鹽（堅牢藍鹽RRRR）紫黑

34、色偶氮染料紫黑色偶氮染料 （胞漿中）（胞漿中）水解水解【原理原理】KaplowKaplow偶氮偶聯法偶氮偶聯法【結果判斷結果判斷】 胞漿中有紫黑色顆粒為陽性胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+(+）【正常血細胞染色反應正常血細胞染色反應】 1.1. 中性成熟粒細胞中性成熟粒細胞陽性反應陽性反應NAP主要存在于成熟的中性粒細胞胞質中。主要存在于成熟的中性粒細胞胞質中。嚴重的化膿性感染時，晚幼階段粒細胞嚴重的化膿性感染時，晚幼階段粒細胞也可見有陽性反應。也可見有陽性反應。2.2.其他細胞基本呈陰性反應其他細胞基本呈陰性反應 2.NAP2.NAP積分值積分值 計數計數100100個成熟中性粒細胞（桿狀個成熟

35、中性粒細胞（桿狀和分葉）和分葉）, ,分別記錄其分級情況：分別記錄其分級情況： (-) 0 (-) 0分分 (+) 1 (+) 1分分 (+) 2 (+) 2分分 (+) 3 (+) 3分分 (+) 4 (+) 4分分 陽性率陽性率 全部陽性反應細胞之和全部陽性反應細胞之和 積分值積分值 各種陽性程度細胞的分值之和各種陽性程度細胞的分值之和 NAP染色結果報告包括陽性率和積分值。染色結果報告包括陽性率和積分值。 陽性率：指計數陽性率：指計數100個中性成熟粒細胞，其個中性成熟粒細胞，其陽性細胞的數量即為陽性率；積分值：指計陽性細胞的數量即為陽性率；積分值：指計數數100個中性成熟粒細胞，不同陽

36、性程度細個中性成熟粒細胞，不同陽性程度細胞數量乘以其陽性程度之和即為積分值，其胞數量乘以其陽性程度之和即為積分值，其計算公式為：積分值計算公式為：積分值=()數量數量1 +()數數量量2 +()數量數量3 +()數量數量4。 2. ：例：4分 占20% 4 20=80分3分 占40% 3 40=120分2分 占18% 2 18=36分1分 占10% 1 10=10分0分 占12% 0 12=0分陽性率88% 積分=246分 0級 0 胞漿呈原色，無顆粒。 級 + 胞漿呈淺灰色，細小藍黑色顆粒占胞漿面積的25%50%。 級 + 胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%75%。 級 +

37、 胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%100%。 級 + 胞漿充滿深黑色致密的團塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。 3. 參考范圍：參考范圍： 中性粒細胞中性粒細胞NAP陽性率：陽性率：40% NAP積分為：積分為： 30130分分 【臨床評價臨床評價】（1 1）細菌性感染與病毒性感染）細菌性感染與病毒性感染 （尤其是化膿性感染）（尤其是化膿性感染） 明顯增加明顯增加 無明顯變化無明顯變化 四、臨床意義 1.生理性變化：應激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。生理性變化：應激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。 2.病理性變化：病理性變化： (1)NAP ：細菌性感染、慢粒細菌

38、性感染、慢粒(加、急加、急)、急、急 淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉移癌、淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉移癌、 骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小 板增多癥、使用糖皮質激素等。板增多癥、使用糖皮質激素等。 3. 疾病的鑒別： (1) 類白與慢粒類白與慢粒: 前者前者 后者后者 (2) 慢粒慢性期與慢粒慢性期與慢性中性粒細胞白血?。郝灾行粤＜毎籽。?前者前者 后者后者 (3) 細菌性感染與病毒性感染細菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：寄生蟲感染： 前者前者 后兩者正?；蚝髢烧哒；?(2)NAP ：慢粒慢粒(慢慢)、PNH、MDS、惡組等。、惡組等。 (6) 惡組與反應性組織細胞

39、增多癥：惡組與反應性組織細胞增多癥： 前者前者 后者常后者常 (7) 急性白血病類型：急性白血病類型： 急性髓細胞急性髓細胞 急淋急淋 (4) 慢粒病情觀察：慢粒病情觀察： (5) 再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿： 前者前者 后者后者 CML類白類白(2(2）類白血病反應與慢性粒細胞白血?。╊惏籽》磻c慢性粒細胞白血病 明顯增加明顯增加 明顯下降且常為零分，明顯下降且常為零分， 緩解時又上升到正常緩解時又上升到正常 五、應用評價 NAP染色有多種檢測方法，國際標準化委員會推薦染色有多種檢測方法，國際標準化委員會推薦 Kaplow萘酚萘酚AS-BI磷酸鈉法和磷酸鈉法

40、和Tomonaga萘酚萘酚AS-MX 磷酸鈉法。鈣磷酸鈉法。鈣-鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應 時間長，臨床上逐步被偶氮偶聯法取代，陽性產物色時間長，臨床上逐步被偶氮偶聯法取代，陽性產物色 澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚AS-BI磷酸鈉法最為磷酸鈉法最為 廣泛使用，利于評定廣泛使用，利于評定NAP活性強度的分級。常用重氮活性強度的分級。常用重氮 鹽有堅牢藍鹽有堅牢藍RR、堅牢藍、堅牢藍BB、堅牢紫醬等，不同偶聯、堅牢紫醬等，不同偶聯 有不同的靈敏度。有不同的靈敏度。 七、酸性磷酸酶染色七、酸性磷酸酶染色(acid phosphatas

41、e，ACP)白色()(3)3(24234POPbNOPbPOPbSSNHPOPb24243)(）（棕黑色34 POACP甘油磷酸鈉甘油pH5.0 2. 偶氮偶聯法偶氮偶聯法(常用常用) 六偶氮付品紅六偶氮付品紅棕紅色沉淀棕紅色沉淀ACPPh5.0重氮鹽重氮鹽 3. 抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標本涂片兩張相同標本涂片+ +兩份基質液兩份基質液( (加加L-L-酒石酸，不加酒石酸，不加 L-L-酒石酸酒石酸) ) ACP染色染色耐耐L-酒石酸酒石酸兩份（兩份（+）不耐不耐L-酒石酸酒石酸不加不加 L-酒石酸（酒石酸（+）加加L-酒石酸（）酒石酸

42、（） 二、正常血細胞染色反應 粒細胞、單核細胞、淋巴細粒細胞、單核細胞、淋巴細 胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、 巨噬細胞均呈陽性反應。巨噬細胞均呈陽性反應。 三、臨床評價 1. 診斷多毛細胞白血病診斷多毛細胞白血病 多毛細胞白血?。憾嗝毎籽。?（+），不被），不被L-酒石酸抑制。酒石酸抑制。 慢淋和惡性淋巴瘤細胞慢淋和惡性淋巴瘤細胞: （+），被），被L-酒石酸抑制。酒石酸抑制。多毛細胞白血病多毛細胞白血病慢性淋巴細胞慢性淋巴細胞白血病白血病抗酒石酸酸性磷抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細胞白血病多毛細胞白血病 抗抗L-酒石酸酒

43、石酸ACP陽性陽性 2.鑒別戈謝鑒別戈謝(Gaucher)細胞和尼曼細胞和尼曼-匹匹 克克(Niemann-Picks)細胞：細胞： 前者（前者（+） 后者（）后者（） 3.鑒別鑒別T淋巴細胞和淋巴細胞和B淋巴細胞：淋巴細胞： 前者（前者（+） 后者（）后者（） s cell八.細胞化學染色綜合分析四種常見急性白血病的細胞化學染色結果四種常見急性白血病的細胞化學染色結果項目項目 M3 M1/M2 M5 ALLPOX 強陽性強陽性 陽性陽性/陰性陰性 弱陽性弱陽性/陰性陰性 陰性陰性 NAS-DCE 強陽性強陽性 陽性陽性/陰性陰性 多陰性多陰性 陰性陰性-NAE 強陽性強陽性 陰性陰性/弱陽性弱陽性 陽至強陽性陽至強陽性 陰性陰性/陽性陽性-NAE+NaF 不抑制不抑制 不抑制不抑制 抑制抑制 不抑制不抑制-NBE 陰性陰性 陰性陰性 陽性陽性 陰性陰性-NBE+NaF 抑制抑制 急非淋急非淋 脂酶染色脂酶染色NAP：類白與慢粒、感染類型、再障與類白與慢粒、感染類型、再障與 PNH、慢粒分期；、慢粒分期；ACP：毛白、毛白