ld菊花的組織培養(yǎng)

1、 課題1 菊花的組織培養(yǎng)離體離體培養(yǎng)植物的培養(yǎng)植物的器官、組織器官、組織，在一定，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，使其用下，使其發(fā)育成完整植株發(fā)育成完整植株的技術(shù)。的技術(shù)。 1 1、什么是植物、什么是植物組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)？2 2、植物組織培養(yǎng)的、植物組織培養(yǎng)的原理原理是什么？是什么？植物細(xì)胞具有植物細(xì)胞具有全能性全能性。閱讀閱讀“課題背景課題背景 ” ”, ,思考以下思考以下2 2個(gè)問(wèn)題：個(gè)問(wèn)題：細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性1 1、定義、定義： 已分化已分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整完整個(gè)體個(gè)體的潛能。的潛能。2、原因、原因：

2、生物體的生物體的每一個(gè)細(xì)胞每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所都包含有該物種所特有的特有的全套遺傳物質(zhì)全套遺傳物質(zhì)（全部基因）（全部基因） 從理論上講，生物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具從理論上講，生物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。但是在個(gè)體發(fā)有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。但是在個(gè)體發(fā)育中育中, ,細(xì)胞并不能表現(xiàn)出全能性細(xì)胞并不能表現(xiàn)出全能性, ,這是為什這是為什么？么？細(xì)胞分化細(xì)胞分化。在特定時(shí)間和空間條件下。在特定時(shí)間和空間條件下, ,細(xì)細(xì)胞中的基因會(huì)有選擇性的轉(zhuǎn)錄翻譯出各胞中的基因會(huì)有選擇性的轉(zhuǎn)錄翻譯出各種不同的蛋白質(zhì)種不同的蛋白質(zhì), ,從而構(gòu)成生物體不同的從而構(gòu)成生物體不同的組織和器官。（組織和器

3、官。（基因的選擇性表達(dá)基因的選擇性表達(dá)）(1)(1)全能性高則分化程度低全能性高則分化程度低 (2) 全能性的大小全能性的大小3 3、細(xì)胞的全能性與細(xì)胞分化程度的關(guān)系、細(xì)胞的全能性與細(xì)胞分化程度的關(guān)系： 受精卵受精卵 生殖細(xì)胞生殖細(xì)胞 體細(xì)胞體細(xì)胞全能性最高全能性最高的是的是受精卵受精卵，還沒有分化，個(gè)體發(fā)，還沒有分化，個(gè)體發(fā)育其實(shí)就是受精卵不斷分裂分化的過(guò)程，越往育其實(shí)就是受精卵不斷分裂分化的過(guò)程，越往后細(xì)胞分化程度越高，后細(xì)胞分化程度越高，體細(xì)胞體細(xì)胞是高度分化的細(xì)是高度分化的細(xì)胞也是胞也是全能性最低全能性最低的細(xì)胞。的細(xì)胞。 植物細(xì)胞植物細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞分化程度低的細(xì)胞分化程度低的

4、細(xì)胞 分化程度高的細(xì)胞分化程度高的細(xì)胞1. 如何恢復(fù)植物組織的全能性如何恢復(fù)植物組織的全能性?2. 什么叫脫（去）分化、再分化？什么叫脫（去）分化、再分化？3. 愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？4. 如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？5. 植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？閱讀閱讀3232頁(yè)解決下列問(wèn)題：頁(yè)解決下列問(wèn)題：（一）植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程（一）植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)1. 如何恢復(fù)植物組織的全能性如何恢復(fù)植物組織的全能性?離體離體的植物組織或細(xì)胞，在一定的的植物組織或細(xì)胞，在一定的營(yíng)養(yǎng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

5、、激素質(zhì)、激素和和其他外界條件其他外界條件的作用下，就可的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性。能表現(xiàn)出全能性。條件：條件：（1）必須離體）必須離體（2）一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（水、蔗糖、維（水、蔗糖、維生素、礦質(zhì)元素、有機(jī)添加劑）生素、礦質(zhì)元素、有機(jī)添加劑）、激素、激素（3）適宜的培養(yǎng)條件（光照、溫度、）適宜的培養(yǎng)條件（光照、溫度、PH）2、什么叫脫（去）分化、再分化？、什么叫脫（去）分化、再分化？ 脫（去）分化脫（去）分化： 由由高度分化高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷愈傷組織組織的過(guò)程，稱為脫分化，又叫去分化。的過(guò)程，稱為脫分化，又叫去分化。 由失去分裂能力的細(xì)胞恢復(fù)到

6、分生狀態(tài)，由失去分裂能力的細(xì)胞恢復(fù)到分生狀態(tài)，恢復(fù)分裂活性的過(guò)程?；謴?fù)分裂活性的過(guò)程。2、什么叫脫（去）分化、再分化？、什么叫脫（去）分化、再分化？ 再分化再分化： 脫分化產(chǎn)生的脫分化產(chǎn)生的愈傷組織愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以又可以重新分化重新分化成根或芽等器官，這個(gè)成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再分化。過(guò)程叫做再分化。3、愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？、愈傷組織的細(xì)胞有什么特點(diǎn)？ 概念：概念： 由由離體離體的植物器官、組織或細(xì)胞的植物器官、組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)過(guò)在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)過(guò)脫分化脫分化過(guò)程形成的組織，就叫愈傷組織。過(guò)程形成的組織，就叫愈傷組織。 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 愈傷

7、組織的細(xì)胞愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)排列疏松而無(wú)規(guī)則則，是一種，是一種高度液泡化高度液泡化的呈無(wú)定的呈無(wú)定形狀態(tài)的形狀態(tài)的薄壁薄壁細(xì)胞。細(xì)胞。我就是我就是愈傷組織哦！愈傷組織哦！愈傷組織愈傷組織小麥愈傷組織小麥愈傷組織菠蘿愈傷組織菠蘿愈傷組織B愈傷組織的細(xì)胞最突出的特征是（愈傷組織的細(xì)胞最突出的特征是（ ）A A細(xì)胞大，排列整齊，分裂能力強(qiáng)細(xì)胞大，排列整齊，分裂能力強(qiáng)B B細(xì)胞高度液泡化，處于無(wú)定形狀態(tài)細(xì)胞高度液泡化，處于無(wú)定形狀態(tài)C C代謝活躍，形狀呈正方形代謝活躍，形狀呈正方形D D分裂能力強(qiáng)，易形成根和芽分裂能力強(qiáng)，易形成根和芽解析解析D選項(xiàng)：愈傷組織具有分裂能力。能夠再分化選項(xiàng)：愈傷

8、組織具有分裂能力。能夠再分化形成根和芽，必須在生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的協(xié)調(diào)作形成根和芽，必須在生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的協(xié)調(diào)作用下才能完成，不是愈傷組織細(xì)胞自身特點(diǎn)。用下才能完成，不是愈傷組織細(xì)胞自身特點(diǎn)。愈傷組織細(xì)胞愈傷組織細(xì)胞最突出的特征是細(xì)胞高度液泡化，處最突出的特征是細(xì)胞高度液泡化，處于無(wú)定形狀態(tài)于無(wú)定形狀態(tài)。愈傷組織愈傷組織細(xì)胞高度液泡化，細(xì)胞高度液泡化，處于無(wú)定形狀態(tài)處于無(wú)定形狀態(tài)4、如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？如何控制細(xì)胞的脫分化與去分化？使用使用植物激素植物激素控制控制植物組織植物組織形成愈傷組織形成愈傷組織長(zhǎng)出叢芽長(zhǎng)出叢芽生根生根移栽成活移栽成活脫分化脫分化再分化再分化再分化再分化移

9、栽移栽（去分化）（去分化）5、植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？、植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？5、植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？、植物組織培養(yǎng)的過(guò)程是怎樣的？離體的植物離體的植物器官、組織、器官、組織、細(xì)胞（外植細(xì)胞（外植體）體）脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化根根芽芽植植物物體體植物組織植物組織形成愈傷組織形成愈傷組織長(zhǎng)出叢芽長(zhǎng)出叢芽生根生根移栽成活移栽成活胚狀體胚狀體可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題練一練練一練下圖為下圖為人工種子人工種子培育流程。以下相關(guān)敘述不正培育流程。以下相關(guān)敘述不正確的是確的是() A上

10、述過(guò)程中脫分化發(fā)生在上述過(guò)程中脫分化發(fā)生在b步驟，形成愈傷組織步驟，形成愈傷組織 ，在此過(guò)程中植物激素發(fā)揮了重要作用在此過(guò)程中植物激素發(fā)揮了重要作用B再分化發(fā)生在再分化發(fā)生在d步驟，是愈傷組織重新分化成根或步驟，是愈傷組織重新分化成根或芽等器官的過(guò)程芽等器官的過(guò)程Cb過(guò)程中進(jìn)行誘變處理后培養(yǎng)，可篩選出抗逆性強(qiáng)過(guò)程中進(jìn)行誘變處理后培養(yǎng)，可篩選出抗逆性強(qiáng)的突變體的突變體D人工種子可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子人工種子可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題B(二二)影響植物組織培養(yǎng)的因素影響植物組織培養(yǎng)的因素 閱讀課本閱讀課本P33P33有關(guān)內(nèi)容，回答以下

11、問(wèn)題：有關(guān)內(nèi)容，回答以下問(wèn)題：1、總結(jié)影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些方面？、總結(jié)影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些方面？2、MS培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？高培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在組織培養(yǎng)過(guò)等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在組織培養(yǎng)過(guò)程中還需要提供有機(jī)物？程中還需要提供有機(jī)物？3、MS培養(yǎng)基的配方與微生物培養(yǎng)的配方有什么培養(yǎng)基的配方與微生物培養(yǎng)的配方有什么不同？不同？4、培養(yǎng)基中的植物激素對(duì)組織培養(yǎng)有何影響？、培養(yǎng)基中的植物激素對(duì)組織培養(yǎng)有何影響？1 1、總結(jié)影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些方面？、總結(jié)影響植物組織培養(yǎng)的因素有哪些方面？?jī)?nèi)因：內(nèi)因：菊花的組

12、織培養(yǎng)一般選擇未開花植株菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部的莖上部新萌生的側(cè)枝新萌生的側(cè)枝。外因外因營(yíng)養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)：細(xì)胞分裂素，生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素，生長(zhǎng)素適宜光照、溫度、適宜光照、溫度、 PHPH有機(jī)物有機(jī)物 ：蔗糖、氨基酸等：蔗糖、氨基酸等每日每日12h18-225.8左右左右植物材料的選擇植物材料的選擇礦質(zhì)元素：大量元素，微量元素礦質(zhì)元素：大量元素，微量元素植物激素：植物激素：環(huán)境條件：環(huán)境條件：微量元素和大量元素微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所提供植物細(xì)胞生活所必需的必需的無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽；蔗糖蔗糖提供提供碳源碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透滲透壓壓；甘氨酸、維生素甘氨酸

13、、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求特殊營(yíng)養(yǎng)需求。2、MS培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在組織高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在組織培養(yǎng)過(guò)程中還需要提供有機(jī)物？培養(yǎng)過(guò)程中還需要提供有機(jī)物？外植體少有或者沒有光合作用的能力，外植體少有或者沒有光合作用的能力，因此需要外界提供因此需要外界提供有機(jī)物供外植體生活有機(jī)物供外植體生活。3、MS培養(yǎng)基的配方與微生物培養(yǎng)的配方培養(yǎng)基的配方與微生物培養(yǎng)的配方有什么不同？有什

14、么不同？微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。MSMS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。素和微量元素兩大類。4、培養(yǎng)基中的植物激素對(duì)組織培養(yǎng)有何影響？、培養(yǎng)基中的植物激素對(duì)組織培養(yǎng)有何影響？植物激素中植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的植物激素的濃度濃度、使用的、使用的先后順序先后順序以及用以及用量的量的比例比例等，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果等，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照不同的

15、順序使用這兩類激素按照不同的順序使用這兩類激素使用順序使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果先使用生長(zhǎng)素，后使先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞但細(xì)胞不不分化分化先使用細(xì)胞分裂素，先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長(zhǎng)素后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞細(xì)胞既既分裂分裂又又分化分化同時(shí)使用同時(shí)使用分化率分化率提高提高記憶口訣：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率。記憶口訣：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率。兩個(gè)培養(yǎng)基中的組織在分化中有何不同？?jī)蓚€(gè)培養(yǎng)基中的組織在分化中有何不同？同時(shí)使用這兩類激素，用量的比例不同同時(shí)使用這兩類激素，用量的比例不同生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素用量用量比細(xì)

16、胞比細(xì)胞分裂素分裂素用量用量植物細(xì)胞的發(fā)育方植物細(xì)胞的發(fā)育方向向比值比值高高時(shí)時(shí)有利于根有利于根的分化、的分化、抑制芽的形成抑制芽的形成比值比值低低時(shí)時(shí)有利于芽有利于芽的分化、的分化、抑制根的形成抑制根的形成比值比值適中適中時(shí)時(shí)促進(jìn)促進(jìn)愈傷組織愈傷組織的的生長(zhǎng)生長(zhǎng)記憶口訣：生大根，分大芽，等愈傷。記憶口訣：生大根，分大芽，等愈傷。 或生根發(fā)（分裂素，諧音）芽或生根發(fā)（分裂素，諧音）芽課題背景課題背景植物組織培養(yǎng)的概念、原理植物組織培養(yǎng)的概念、原理細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性細(xì)胞分化細(xì)胞分化章首頁(yè)章首頁(yè)植物組培技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)植物組培技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組培的基本過(guò)程（一）植物組培的基本過(guò)程重

17、要概念：重要概念：脫分化、再分化、愈傷組織脫分化、再分化、愈傷組織過(guò)程圖過(guò)程圖恢復(fù)全能性的條件恢復(fù)全能性的條件（二）影響組培的因素（二）影響組培的因素MSMS培養(yǎng)基各成分的作用，與微生物培養(yǎng)基的差異培養(yǎng)基各成分的作用，與微生物培養(yǎng)基的差異生長(zhǎng)素和細(xì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素胞分裂素植物激素對(duì)組培的影響植物激素對(duì)組培的影響濃度濃度先后順序：先后順序：比例：比例：內(nèi)因、外因內(nèi)因、外因生前分裂不分化，生后分裂生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率又分化，同時(shí)提高分化率生根發(fā)（分裂素，諧音）芽生根發(fā)（分裂素，諧音）芽按照不同的順序使用這兩類激素按照不同的順序使用這兩類激素使用順序使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)

18、果先使用生長(zhǎng)素，后使先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞但細(xì)胞不不分化分化先使用細(xì)胞分裂素，先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長(zhǎng)素后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞細(xì)胞既既分裂分裂又又分化分化同時(shí)使用同時(shí)使用分化率分化率提高提高記憶口訣：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率。記憶口訣：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同時(shí)提高分化率。同時(shí)使用這兩類激素，用量的比例不同同時(shí)使用這兩類激素，用量的比例不同生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素用量用量比細(xì)胞比細(xì)胞分裂素分裂素用量用量植物細(xì)胞的發(fā)育方植物細(xì)胞的發(fā)育方向向比值比值高高時(shí)時(shí)有利于根有利于根的分化、的分化、抑制芽的形成抑制芽的形成比值比值低低

19、時(shí)時(shí)有利于芽有利于芽的分化、的分化、抑制根的形成抑制根的形成比值比值適中適中時(shí)時(shí)促進(jìn)促進(jìn)愈傷組織愈傷組織的的生長(zhǎng)生長(zhǎng)記憶口訣：生大根，分大芽，等愈傷。記憶口訣：生大根，分大芽，等愈傷。 或生根發(fā)（分裂素，諧音）芽或生根發(fā)（分裂素，諧音）芽跟蹤訓(xùn)練跟蹤訓(xùn)練下列關(guān)于影響植物組織培養(yǎng)的因素，下列關(guān)于影響植物組織培養(yǎng)的因素，說(shuō)法正確的是說(shuō)法正確的是()A不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，同一種不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，同一種植物材料培養(yǎng)的難易程度相同植物材料培養(yǎng)的難易程度相同B在植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中必須添加植物在植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中必須添加植物激素激素C植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的作用是

20、互植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的作用是互相獨(dú)立的相獨(dú)立的DpH、溫度、光照等條件對(duì)植物組織培養(yǎng)也、溫度、光照等條件對(duì)植物組織培養(yǎng)也特別重要特別重要D解析：解析：選選D。不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，。不同植物組織培養(yǎng)的難易程度不同，同一種植物材料也會(huì)因年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短等同一種植物材料也會(huì)因年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，故導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，故A錯(cuò)誤；在植物組織培養(yǎng)錯(cuò)誤；在植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基中常常要添加植物激素，但不是都必中，培養(yǎng)基中常常要添加植物激素，但不是都必須添加植物激素，如菊花莖段組織培養(yǎng)不必添加須添加植物激素，如菊花莖段組織培養(yǎng)不必添加植物激素，故植物激素，故B錯(cuò)；各

21、種植物激素的作用是相互錯(cuò)；各種植物激素的作用是相互聯(lián)系的，而不是互相獨(dú)立的，故聯(lián)系的，而不是互相獨(dú)立的，故C錯(cuò)。錯(cuò)。D在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過(guò)程中，在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過(guò)程中，下列生命活動(dòng)不會(huì)同時(shí)發(fā)生的是（）下列生命活動(dòng)不會(huì)同時(shí)發(fā)生的是（）A細(xì)胞的增殖與分化細(xì)胞的增殖與分化B光能的吸收與轉(zhuǎn)化光能的吸收與轉(zhuǎn)化CATP的合成與分解的合成與分解D基因的突變與重組基因的突變與重組二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作閱讀課本閱讀課本P34-35P34-35有關(guān)內(nèi)容，回答以下有關(guān)內(nèi)容，回答以下問(wèn)題：?jiǎn)栴}：1、說(shuō)出組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)步驟。、說(shuō)出組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)步驟。2、在植物組織培養(yǎng)的過(guò)程中，為、在植物組織培養(yǎng)

22、的過(guò)程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，什么要進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無(wú)菌操作？并且要求無(wú)菌操作？（一）（一）制備制備MS固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 1、配制母液、配制母液 2、配制培養(yǎng)基、配制培養(yǎng)基（二）（二）外植體消毒外植體消毒（四）（四）培養(yǎng)培養(yǎng)（五）（五）移栽移栽（六）（六）栽培栽培操作步驟：操作步驟：3、滅菌、滅菌（三）（三）接種接種 項(xiàng)目項(xiàng)目順序順序材材 料料處理方法處理方法 處理處理時(shí)間時(shí)間1 1流水流水沖洗沖洗2 2少許洗衣粉少許洗衣粉軟刷輕輕刷洗軟刷輕輕刷洗3 3流水流水沖洗沖洗2 20 minmin4 4無(wú)菌吸水紙無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分吸干外植體表面的水分5 5

23、70% 70% 的酒精的酒精搖動(dòng)搖動(dòng)2 23 3次次6 67s7s6 6無(wú)菌水無(wú)菌水清洗清洗7 7無(wú)菌吸水紙無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分吸干外植體表面的水分8 80.1% 0.1% 氯化汞溶液氯化汞溶液浸泡浸泡1 12 min2 min9 9無(wú)菌水無(wú)菌水清洗清洗3 3次次1 1、選材：、選材：（二）外植體消毒（二）外植體消毒2 2、消毒、消毒菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝1 1、選材：、選材：（二）外植體消毒（二）外植體消毒2 2、消毒、消毒流水沖洗流水沖洗 酒精處理酒精處理消毒液處理消毒液處理70%酒精6-7s流水沖洗20min0.1%氯化汞1-2min1.1.每次水

24、洗或者無(wú)菌水沖洗后均用每次水洗或者無(wú)菌水沖洗后均用無(wú)菌吸水紙無(wú)菌吸水紙將外植體吸干。將外植體吸干。2.2.對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，既要考慮藥劑的對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，既要考慮藥劑的消毒效果消毒效果，又，又要考慮植物的要考慮植物的耐受能力耐受能力菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝無(wú)菌水無(wú)菌水沖洗至少3次注意：注意：流水沖洗流水沖洗無(wú)菌吸水紙吸水無(wú)菌吸水紙吸水生長(zhǎng)旺盛嫩枝生長(zhǎng)旺盛嫩枝無(wú)菌水清洗無(wú)菌水清洗70% 的酒精中的酒精中搖動(dòng)搖動(dòng)23次次 67s無(wú)菌吸水紙無(wú)菌吸水紙吸水吸水0.1氯化汞溶液氯化汞溶液無(wú)菌水清洗無(wú)菌水清洗無(wú)菌吸水紙無(wú)菌吸水紙吸水吸水4 4、接種注意事項(xiàng)、接種注

25、意事項(xiàng)A.A.注意無(wú)菌操作注意無(wú)菌操作B.B.不要倒插莖段不要倒插莖段C.C.每瓶中接種每瓶中接種6 6 8 8塊外植體塊外植體你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？每種材料或配方每種材料或配方至少要做一組以上至少要做一組以上的重復(fù)。的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有有培養(yǎng)基的空白錐形瓶培養(yǎng)基的空白錐形瓶，與接種操作后的，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。格，沒有被雜菌污染。（四）培養(yǎng)（四）培養(yǎng)無(wú)菌箱無(wú)菌箱中培養(yǎng)；中培養(yǎng)；培養(yǎng)期間應(yīng)培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒定期消毒；培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫

26、度18221822；每日每日用日光燈用日光燈光照光照12h12h錐形瓶放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)錐形瓶放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)形成愈傷組織形成愈傷組織叢狀苗叢狀苗叢芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)叢芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)：生出根生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)：生出根1 1、打開封口膜、打開封口膜2 2、清洗轉(zhuǎn)移、清洗轉(zhuǎn)移3 3、移栽、移栽（5 5) ) 接種時(shí)插入的方向？接種時(shí)插入的方向？ （6 6）接種后的錐形瓶放在何處培養(yǎng)）接種后的錐形瓶放在何處培養(yǎng)? ?培養(yǎng)過(guò)程中是否培養(yǎng)過(guò)程中是否需要更換培養(yǎng)基？需要更換培養(yǎng)基？ （4 4）外植體消毒酒精的濃度和氯化汞的濃度？原因？）外植體消毒酒精的濃度和氯化汞的濃度？原因？l 實(shí)驗(yàn)操作特別注意

27、事項(xiàng)（考點(diǎn)密集）實(shí)驗(yàn)操作特別注意事項(xiàng)（考點(diǎn)密集）（1 1）配制母液時(shí)，濃縮的倍數(shù)？）配制母液時(shí)，濃縮的倍數(shù)？（2 2）配制培養(yǎng)基時(shí)蔗糖的作用？）配制培養(yǎng)基時(shí)蔗糖的作用？（7 7）幼苗先移栽在何處再移栽到土壤中？）幼苗先移栽在何處再移栽到土壤中？（3 3）菊花的組織培養(yǎng)莖段的選擇？是否添加激素？）菊花的組織培養(yǎng)莖段的選擇？是否添加激素？植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高：抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高：u用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于 某些微生物的生長(zhǎng)，某些微生物的生長(zhǎng)，消耗了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗了營(yíng)養(yǎng)

28、物質(zhì)；u微生物產(chǎn)生的代謝廢物會(huì)微生物產(chǎn)生的代謝廢物會(huì)毒害培養(yǎng)的對(duì)象毒害培養(yǎng)的對(duì)象。因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。為什么要進(jìn)行無(wú)菌操作：為什么要進(jìn)行無(wú)菌操作：1、培養(yǎng)基培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）的滅菌（高壓蒸汽滅菌）在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？5、移栽到、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。中生存一段時(shí)間。4、無(wú)菌箱中的、無(wú)菌箱中的培養(yǎng)培養(yǎng)；3、接種接種的無(wú)菌操作（酒精、酒精燈的無(wú)菌操作（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）2、外植體外植體的消毒（酒精、氯化汞）的消毒（酒精、氯化汞）1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基

29、及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)污染的主要途徑污染的主要途徑1 1、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)四、課題延伸四、課題延伸(1)(1)培育培育無(wú)病毒植株無(wú)病毒植株(2)(2)培養(yǎng)紫草愈傷組織，提取培養(yǎng)紫草愈傷組織，提取紫草素紫草素（治療燙（治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）(4)(4)基因工程基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法2 2

30、、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用： (3)(3)誘導(dǎo)離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力誘導(dǎo)離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)，包裹上人造種皮，制成的胚狀結(jié)構(gòu)，包裹上人造種皮，制成人工種子人工種子，可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問(wèn)題或發(fā)芽率低等問(wèn)題. .菊菊花花組組織織培培養(yǎng)養(yǎng)基礎(chǔ)基礎(chǔ)知識(shí)知識(shí)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作操作植物體的植物體的組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)影響組織培影響組織培養(yǎng)的因素養(yǎng)的因素細(xì)胞分化細(xì)胞分化營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)MS固體培養(yǎng)基制備固體培養(yǎng)基制備課堂小結(jié)外植體消毒外植體消毒接種接種栽培栽培移栽移栽栽種栽種細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性組織培

31、養(yǎng)過(guò)程組織培養(yǎng)過(guò)程激素激素環(huán)境條件環(huán)境條件脫分化脫分化愈傷組織愈傷組織再分化再分化植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是（ ）A給予適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件給予適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件B導(dǎo)入其他植物細(xì)胞的基因?qū)肫渌参锛?xì)胞的基因C脫離母體后，給予適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件脫離母體后，給予適宜的營(yíng)養(yǎng)和外界條件D將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi)將成熟篩管的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞內(nèi)C隨堂檢測(cè)隨堂檢測(cè)觀看視頻觀看視頻碳源碳源滲透壓滲透壓添加植物激素，提供大量的無(wú)機(jī)鹽。添加植物激素，提供大量的無(wú)機(jī)鹽。高壓蒸高壓蒸汽滅菌汽滅菌0.1%0.1%的的氯化汞氯化汞污染率污染率 存活率（或死

32、亡率）存活率（或死亡率）9 9應(yīng)提高應(yīng)提高NAANAA的濃度，重新配置培養(yǎng)基轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。的濃度，重新配置培養(yǎng)基轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 營(yíng)養(yǎng)繁殖營(yíng)養(yǎng)繁殖 在植物組織培養(yǎng)中，在植物組織培養(yǎng)中， 切取胡蘿卜的外植體時(shí)一般選擇（切取胡蘿卜的外植體時(shí)一般選擇（ ） A具有木質(zhì)部的部分具有木質(zhì)部的部分 B具有韌皮部的部分具有韌皮部的部分 C具有形成層的部分具有形成層的部分 D具有髓的部分具有髓的部分解析：分裂能力越強(qiáng)的細(xì)胞全能性越強(qiáng)，解析：分裂能力越強(qiáng)的細(xì)胞全能性越強(qiáng)，形成層是分生組織，在各選項(xiàng)中是分裂形成層是分生組織，在各選項(xiàng)中是分裂能力最強(qiáng)的細(xì)胞。能力最強(qiáng)的細(xì)胞。 植物組織培養(yǎng)是二十世紀(jì)發(fā)展

33、起來(lái)的新技術(shù)，近三十年來(lái)由于組織培養(yǎng)基礎(chǔ)理論研究的深入，發(fā)展極為迅速，發(fā)表的文獻(xiàn)浩如煙海，幾乎以植物為研究對(duì)象的各個(gè)分支學(xué)科都在廣泛進(jìn)行組織培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)簡(jiǎn)介植物組織培養(yǎng)簡(jiǎn)介發(fā)展簡(jiǎn)史1838-1839年，德國(guó)科學(xué)家年，德國(guó)科學(xué)家Schleide 和和Schwann發(fā)表了細(xì)胞發(fā)表了細(xì)胞學(xué)說(shuō)，奠定了組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。學(xué)說(shuō)，奠定了組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。1902年，德國(guó)植物學(xué)家年，德國(guó)植物學(xué)家Haberlandt 根據(jù)細(xì)胞學(xué)說(shuō)，提出單個(gè)細(xì)根據(jù)細(xì)胞學(xué)說(shuō)，提出單個(gè)細(xì)胞的植物細(xì)胞全能性（胞的植物細(xì)胞全能性（totipotency）理論。）理論。1904年，年，Hanning 最先成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣根菜的胚。最先成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣根菜的胚。1922年，年，Knudson 采用胚培養(yǎng)法獲得大量蘭花幼苗。采用胚培養(yǎng)法獲得大量蘭花幼苗。1934年，年，White 用番茄根尖建立起第一個(gè)活躍生長(zhǎng)的無(wú)性繁殖系用番茄根尖建立起第一個(gè)活躍生長(zhǎng)的無(wú)性繁