有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編制/修訂人：部門審核人：分管負(fù)責(zé)人：質(zhì)量審核人：企業(yè)負(fù)責(zé)人：實(shí)施日期：日期：年月日日期：年月日日期：年_月_一日日期：年_月_一日日期：年_月_一日年月日文件類別：管理標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)受控狀態(tài)生產(chǎn)部采購部商務(wù)部質(zhì)量部1 物資部存檔1 V工作標(biāo)準(zhǔn)本文件由質(zhì)量部頒布，根據(jù)需要分發(fā)于以下部門:行政人事部工程部計(jì)財(cái)部【目的】規(guī)范有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法檢驗(yàn)的程序和方法，確保有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。【適用范圍】適用于本公司有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法的檢驗(yàn)?！韭氊?zé)】1 QC 檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)起草，按審批后的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。2 質(zhì)量部經(jīng)理、質(zhì)量負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)審核、監(jiān)督執(zhí)行

2、。3 總經(jīng)理負(fù)責(zé)審批?！緝?nèi)容】1 簡述有機(jī)氯類農(nóng)藥是農(nóng)藥史中使用量最大，使用歷史最長的一類農(nóng)藥，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，脂溶性強(qiáng)，殘效期長（可達(dá)3050年之久），易在脂肪組織中蓄積，造成慢性中毒，嚴(yán)重危及人體健康。本法通過提取、凈化和富集等步驟制備供試品溶液，采用氣相色譜法，電子捕獲檢測器測定。2 儀器與用具2.1 氣相色譜儀，帶有63Ni-ECD電子捕獲檢測器，載氣為高純氮，必須安裝脫氧管。2.2 超聲波處理器。2.3 離心機(jī)。2.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。2.5 色譜柱：SE-54或DB-1701彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mm 0.25 m）2.6 具塞刻度離心管（10ml）,刻度濃縮瓶，具塞錐形瓶

3、（100ml）,移液管等。3 試藥與試液3.1 丙酮、石油醴（6090C）和二氯甲烷均為分析純，且全部經(jīng)過全玻璃蒸儲(chǔ)裝置重蒸餾，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)，符合農(nóng)殘檢測的要求。3.2 無水硫酸鈉和氯化鈉均為分析純，硫酸為優(yōu)級(jí)純。3.3 農(nóng)藥對(duì)照品：六六六（BHC 包括a-BHC, B-BHC, 丫-BHC和6-BHC四種異構(gòu)體,滴滴涕（DDT）包括pp-DDE, pp-DDD , op-DDT和pp-DDT四種異構(gòu)體及五氯硝基苯（PCNB ,由中國計(jì)量科學(xué)研究院提供標(biāo)示含量 （濃度）的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，也可采用國 際認(rèn)可的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品自行配制。4 9 種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以

4、 （ 14%-氰丙基-苯基） 甲基聚硅氧烷或（ 5%苯基）甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.32mmX0.25um）6,3 Ni-ECD 電子捕獲檢測器。 進(jìn)樣口溫度230，檢測器溫度300，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始溫度100，每分鐘10升至220，再以每分鐘8升至250，保持10 分鐘。 按上述條件操作，理論板數(shù)以a -BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1 X 10 6,兩個(gè)相鄰色譜峰白分離度應(yīng)大于 1.5。4.2 操作方法4.2.1 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取六六六（BHC） （a-BHC 0 -BHC 丫-BHC, 6 -BH。、 滴滴涕（DDT）P, P-DDE, P, P-D

5、DD, O, P-DDT, P, P-DDT及五氯硝基苯 （PCNB/藥對(duì)照品溶液適量，用石油醴（6090C）分別制成每1ml約含45用 的溶液， 即得。4.2.2 混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密量取上述各對(duì)照品貯備液 0.5ml,置10mI量瓶中，用石油醚60 90 ）稀釋至刻度，搖勻，即得。4.2.3 混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品貯備液，用石油醚（6090C）制成每 1L 分別含 0ug, 1 g, 5g, 10Ng, 50仙 g, 100 仙 g 和 250 仙 g 的溶 液，即得。4.2.4 供試品溶液制備方法1（藥材或飲片）取供試品，粉碎成粉末（過三號(hào)篩），取約2 g,精密

6、稱定， 置100 ml具塞錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml, 稱定重量，超聲處理30 分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6 g,精密加二氯甲烷30 ml,稱定重量，超聲處理15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置（使分層），將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 ml 具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml,于40c水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油 醚 （6090 ） 如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（6090 ） 溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醴（6090C）精密稀釋至5ml,小心加入硫酸1 ml,振搖1

7、分鐘，離心（3000轉(zhuǎn)/分鐘）10分鐘，精密量取上精液2ml,置具刻度濃縮瓶中，連接旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40c下（或用氮?dú)猓⑷芤簼饪s至適量，精密稀釋至 1 ml,即得。同法制備空 白樣品。4.2.5 方法2（制劑）取供試品，研成細(xì)粉（蜜丸切碎，液體直接量取），精密稱取 適量（相當(dāng)于藥材2g）,以下按方法1,制備供試品溶液。4.2.6 測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1仙1,注入氣象色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。5 22種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分析柱：以50%苯基50%C甲基聚硅氧烷為固定液 的彈性石英毛細(xì)管柱（3

8、0mX0.25mmX0.25um）O僉柱：以100萬甲基聚硅氧烷為固定液的 彈性石英毛細(xì)管柱（30mX0.25mmX0.25um） 63 Ni-ECD電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口溫度240 C ,檢測器溫度300 C,不分流進(jìn)樣，流速為恒壓模式（初始流速為 1.3ml/min ）。 程序升溫：初始70 C,保持1分鐘，每分鐘10c升至180C,保持5分鐘，再以每分鐘 5c升至220C,最后以每分鐘100c升至280C,保持8分鐘。理論板數(shù)以a -BHC計(jì)算應(yīng) 不低于1 X 10 6,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。5.2 操作方法5.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取表1中農(nóng)藥對(duì)照品適量，用異

9、辛烷分別制如表 1中濃度，即得。5.2.2 混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密量上述對(duì)照品貯備溶液各 1ml,置100ml量瓶 中，用異辛烷稀釋至刻度，搖勻，即得。5.2.3 混合對(duì)照品溶液的制備分別精密量取上述對(duì)照品備貯溶液，用異辛烷制成每1L分別含10 pg、20 pg、50 pg、100 pg、200仙g、500仙g的溶液，即得（其中B - 六六六，異狄氏劑、P, P-滴滴滴、O, P-滴滴涕每1L分別含20/、40/、100/、 200 pg、400仙 g、1000 p g）05.2.4 供試品溶液制備取供試品，粉碎成粉末（過三號(hào)篩），取約1.5 g ,精密稱定，置于50 ml聚苯乙烯具塞離

10、心管中，加水 10 ml,混勻，放置2小時(shí)，精密加入乙月青15ml,劇烈振搖提取1分鐘，再加人預(yù)先稱好的無水硫酸鎂4g與氯化鈉1 g的混合粉末，再次劇烈振搖1 分鐘后，離心(4000 轉(zhuǎn) / 分鐘) 1 分鐘。精密吸取上清液10ml， 40減壓濃縮至近干，用環(huán)己烷- 乙酸乙酯(1:1) 混合溶液分次轉(zhuǎn)移至10ml 量瓶中，加環(huán)己烷 - 乙酸乙酯(1 :1) 混合溶液至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入1g 無水硫酸鈉的離心管中，振搖， 放置 1 小時(shí) ， 離心 (必要時(shí)濾過) ， 取上清液5ml 過凝膠滲透色譜柱( 400mmX25mm , 內(nèi)裝 BIO-Beads S-X3 填料；以環(huán)己烷- 乙酸乙

11、酯(1 : 1 ) 混合溶液為流動(dòng)相；流速為每分鐘5.0ml) 凈化， 收集 18? 30 分鐘的洗脫液， 于 40水浴減壓濃縮至近干，加少 量 正 己 烷 替 換 兩 次 ， 加 正 己 烷 1ml 使 溶 解 ， 轉(zhuǎn) 移 至 弗 羅 里 硅 土 固 相 萃 取 小 柱 1000mg/6ml, 用正己烷-丙酮( 95 : 5) 混合溶液10ml 和正己烷10ml 預(yù)洗 上 ，殘?jiān)谜和橄礈?次，每次1ml,洗液轉(zhuǎn)移至同一弗羅里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷 -丙 酮 ( 95： 5) 混合溶液10ml 洗脫，收集全部洗脫液, 置氮吹儀上吹至近干，加異辛烷定容至1ml,渦旋使溶解，即得。5.

12、2.5 測定法分別精密吸取供試品溶液和混合對(duì)照品溶液各1ul ，注入氣相色譜儀，按外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品中22種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。5.2.6 限度 除另有規(guī)定外，每1kg中藥材或飲片中含總六六六(a- BHC,B -BHC , 丫-BHC, 6 - BH和)不得過 0.2mg;總滴滴涕(P, P-DDE, P, P-DDD, O, P-DDT, P, P-DDT之 和)不得過 0. 2mg ；五氟硝基苯(Quintozene)不得過 0.1m g;六氯苯 ( Hexachlorobenzene) 不得過 0,1mg; 七氯( Heptachlor) 、順式環(huán)氧七氯(HeptachI orex

13、o-epoxide)和反式環(huán)氧七氯(Heptachlor*endo-epoxide) 之和不得過 0.05mg;艾氏劑(AIdrin) 和狄氏劑(Dieldrin)之和不得過0. 05mg;異狄氏劑(Endrin)不得過0.05mg;順式氯丹Chlordane) 、反式氯丹(trans-Chlordane) 和氧化氯丹(oxy-Chlordane) 之和不得過 0.05mg; a-硫丹(a-Endosulfan)伊硫丹(伊Endosulfan) 和硫丹 硫酸鹽 ( Endosulfan sulfate) 之和不得過3mg?！?附注】(1) 當(dāng)供試品中有農(nóng)藥檢出時(shí), 可在驗(yàn)證柱中確認(rèn)檢出的結(jié)果，

14、再進(jìn)行定量。必要時(shí) ,可用氣相色譜一質(zhì)譜法進(jìn)行確證。(2) 加樣回收率應(yīng)在70%? 120%之間表1 22種有機(jī)氯類農(nóng)藥對(duì)照品貯備液濃度、相對(duì)保留時(shí)間及檢出限參考值序號(hào)中文名英文名對(duì)照品貯備液(ug/ml)相對(duì)保留時(shí)間（分析柱）檢出限（mg/kg）12345678910111213141516171819202122六氯苯Hexachlorobenzene1000. 5740. 001a- 六六六a- B H C1000. 6010. 004五硝基苯Quintozene1000. 6450. 007T-六六六y -B H C1000. 6670. 003，六六六,B H C2000. 7050

15、.七 MHeptachlor1000. 7130. 007A六六六8 - BHC1000. 750艾 氏 劑Aldrin1000. 7600. 006氧化氯丹Oxy-Chlordane1000.8160. 007順式環(huán)氧七氟 Heptachlor-exo-epoxide1000. 833反式環(huán)氧七氟 Heptachlor-endo-epoxide 1000. 844反式氯丹trans-Chlordane1000. 8540. 005順式氯丹cis-Chlordane1000. 8670, 008a-琉丹a-Endosulfan1000. 8720.01p,p /滴滴伊p,p/-DDE1000. 8920狄 氏 劑Dieldrin1000. 9010. 005異 狄氏劑Endrin2000. 9320. 009o,p /滴滴涕o , p / f-DDT2000.p,p /滴滴滴p , p / f-DDD2000.3-硫丹的Endosulfan1000. 9560p, /p -滴滴涕 p , p/-DDT1000. 9700.硫丹硫酸Endosulfan sulfate1001.0000. 0040