S006紅細(xì)胞ABO血型反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程

1、噩文件名冗紅細(xì)胞ABO血型節(jié)編制人蠅審核人量批準(zhǔn)人肆批準(zhǔn)日期墨紅細(xì)胞ABO血型反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程反定型鑒定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程蜜修改日期蓬簽字蜩修改日期滕簽字蝕一*、 目的黃為保證血艘復(fù)審日期量簽字薇復(fù)審日期交簽字液及血液成 分的紅細(xì)胞 ABO血型在 臨床上同型 輸注,保證臨 床輸血平安、 有效,根據(jù)臨床輸血技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?第十五條特制定本標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程莆二、方法蟻采用試管法檢測紅細(xì)胞ABO血型反定型肇三、原理芨用的A1、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞測定被檢者血清中有無相應(yīng)的抗 A或抗B抗體, 結(jié)合正定型結(jié)果判斷ABO血型.荽四、適用范圍建適用于輸血前患者與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞 ABO血型反定型確認(rèn).溝五、儀器設(shè)備肇普

2、通離心機(jī)；血型專用離心機(jī)；蜜六、試劑蟆1、試劑名稱：人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒；蕨2、試劑生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥；膀3、批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字 S20060059 ;材4、包裝規(guī)格：A1、B、O試劑J各1支,10ml/支；膈5、貯藏條件；2-8 C保存,不能冰凍充6、有效期：自檢定合格之日起 2個月;膈7、試劑性能：外觀、溶血率%、特異性、抗原性均符合檢定規(guī)程要求.量七、檢測樣本要求芍1、標(biāo)本類型：靜脈血EDTA抗凝劑:血液=1:10.墨2、標(biāo)本采集：見輸血科標(biāo)本治理標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程.輻3、標(biāo)本儲存和運輸：新鮮血 28c貯存時間不超過72小時.聿4、標(biāo)本拒收狀態(tài)：標(biāo)識不準(zhǔn)確、標(biāo)本稀釋、細(xì)菌

3、污染,嚴(yán)重溶血等不能測定.期八、操作步驟蔻1、取10mmx60mm 潔凈小試管3支,分別標(biāo)明A1型細(xì)胞、B型細(xì)胞、O型細(xì)胞, 用滴管分別參加受檢者血清1滴于試管,再分別用滴管參加 A1、B、O型試劑紅細(xì) 胞懸液1滴.蟻2、,搖動試管,立即以1000rpm離心1min或3400rpm 離心15s.腿3.先觀察是否有溶血,溶血可能是陽性結(jié)果,或者是細(xì)菌污染；將試管輕輕搖晃,如肉眼不使沉于管底的紅細(xì)胞浮起,觀察細(xì)胞扣情況,并判斷凝集強(qiáng)度見下表 見凝集,應(yīng)將反響物倒于玻片上,再以低倍鏡檢查.肇紅細(xì)胞ABO血型反定型結(jié)果凝集強(qiáng)度判斷對照表滕紅細(xì)胞凝集反響描述蔓凝集強(qiáng)度腿鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集,而絕大多數(shù)

4、紅細(xì)胞仍呈分散曹混合凝集外觀分布薄溶血,上精液中有游離血紅蛋白蒙溶血芳紅細(xì)胞凝集成一大塊,血清清楚透明薄4+蒞紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊,血清尚清楚冗3+放紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊,周圍可見到游離紅細(xì)胞箍2+螃肉眼可見大顆粒,周圍有較多游離紅細(xì)胞聿1 +唐鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起,周圍有很多游離紅細(xì) 莆土胞菜鏡下未見凝集,紅細(xì)胞均勻分布肅陰性覆4、ABO血型反定型表現(xiàn)型反響格局表九、質(zhì)量限制1、對新進(jìn)批蟆受檢者血型籍受檢者血清+試劑紅細(xì)胞號的試劑應(yīng)作親和力與B細(xì)胞效價驗定.2、此檢測項袂O細(xì)胞研A細(xì)胞目應(yīng)參加衛(wèi)生部臨床檢A0-+驗中央組織的室間質(zhì)評,B0+-且成績合格；3、每次做血O0+型鑒定應(yīng)采

5、用血漿質(zhì)控AB0-品做室內(nèi)質(zhì)量限制,且要求在控.4、嚴(yán)格執(zhí)行查對制度,判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄,防止筆誤等引起的過失,如 有疑問應(yīng)鏡下觀察紅細(xì)胞形態(tài)或用其他介質(zhì)重新檢測.5、檢測標(biāo)本應(yīng)在28 c保存留一周,以備復(fù)查.6、試驗中應(yīng)同時檢測O型紅細(xì)胞,假設(shè)產(chǎn)生陽性反響,那么需要添加自身對照試驗,如 自身對照為陽性,說明是自身冷凝集素導(dǎo)致,如為陰性那么說明被檢者血清或血漿中 可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他系統(tǒng)的抗體干擾.十、生物參考區(qū)間ABO血型：A型,B型,O型,AB型；十一、干擾因素1、冷凝集素：在惡性腫瘤或病原體感染后有時冷反響性自身抗體可異常增高造成溶血.2、自身抗體：紅細(xì)胞被自身抗體強(qiáng)烈致

6、敏后將干擾 ABO定型,且自身抗體的存在 會導(dǎo)致交叉配血不合.3、弱凝集：當(dāng)患者紅細(xì)胞上抗原異?？赡軙?dǎo)致減弱的或缺少的凝集反響,如亞型 紅細(xì)胞抗原性較弱、新生兒、老年人及少數(shù)惡病質(zhì)患者紅細(xì)胞抗原形成缺乏或敏感 性降低.4、細(xì)菌性凝集：常見有類B凝集,A型或O型病人因大腸桿菌O86感染,從而使 紅細(xì)胞上獲得類B抗原,能與抗B抗體發(fā)生凝集,表現(xiàn)為B或AB型.其不受溫度 影響,病情好轉(zhuǎn)類B凝集即消失.另外紅細(xì)胞被細(xì)菌或細(xì)菌酶污染,紅細(xì)胞上的 T 抗原被激活,與供血者中抗 T抗體發(fā)生凝集.5、混合外觀凝集現(xiàn)象：主要見于患者有近期輸血史、骨髓移植、胎盤出血、白血病或其他原因如嵌合現(xiàn)象、A3亞型及Tn多

7、凝集反響.？6、不規(guī)那么抗體：可通過測定唾液中的血型物質(zhì)來鑒定 ABO血型.7、亞型：？亞型紅細(xì)胞抗原性較弱易產(chǎn)生弱凝集；8、假凝集：常見于某些肝病、傳染病、多發(fā)性骨髓瘤、霍金氏病、心肌堵塞、感染 等病；9、血漿樣本血型鑒定時應(yīng)注意排除纖維蛋白原和補(bǔ)體的干擾；十二、考前須知1、檢測標(biāo)本必須正確有標(biāo)識,其血液量、紅細(xì)胞或血漿的質(zhì)量符合實驗要求和受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的血樣預(yù)防受血者在輸血前的 3個月之內(nèi)可能 有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)那么抗體.3、標(biāo)本血液離體后要求盡快送檢,至檢測完畢最長不能超過3d,每次檢測后受血者和供血者的血標(biāo)本應(yīng)在 2 c8 c保

8、存7天；4、每批次試劑均應(yīng)進(jìn)行效價測定,試劑使用前應(yīng)仔細(xì)檢查試劑的貯存條件是否符合 要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度、紅細(xì)胞濃度及抗原抗體的比例對試驗結(jié)果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：如果使用右旋糖酊、PVP等治療,應(yīng)注意將紅細(xì)胞 洗滌；如果受者使用肝素治療,那么應(yīng)用硫酸魚精蛋白對抗,使樣本凝結(jié)；7、疑存在冷凝集素的病人標(biāo)本的血型鑒定時應(yīng)用37c生理鹽水洗滌3次再測定,并放37 C免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果.8、疑存在自身抗體的病人標(biāo)本的正定型血型鑒定時應(yīng) 用37 c45 c生理鹽水洗滌 紅細(xì)胞三次或者用放散后的紅細(xì)胞放散方法需不破壞紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)；9、疑為亞型應(yīng)通過亞型定型

9、試劑來具體定型.鑒定血型時要注意正反定型的結(jié)合,加用抗H和抗A、B型標(biāo)準(zhǔn)血清、A2紅細(xì)胞等檢查唾液中的血型物質(zhì),必要時作吸 收放散試驗以確定.假設(shè)血清中存在不規(guī)那么抗體可在反定型用O細(xì)胞加以鑒定,有些亞型由于抗原的某些位點缺失,也會產(chǎn)生相對于缺失抗原位點的抗體,這些抗體的 產(chǎn)生有助于亞型的判定.10、疑為紅細(xì)胞被細(xì)菌或細(xì)菌酶污染產(chǎn)生的假凝集可置37c免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果,此種凝集在4 c和37c之間隨著溫度的升高凝集程度逐漸減弱,在 37 c時最弱或消失.11、出現(xiàn)混合外觀凝集的情況時一般要核對標(biāo)本,必要時可重新抽取血樣；12、紅細(xì)胞出現(xiàn)弱凝集、假凝集應(yīng)進(jìn)行紅細(xì)胞形態(tài)顯微鏡鏡檢,假凝集用生理鹽水 稀釋或洗滌紅細(xì)胞可使凝集消失.13、注意血漿因抗凝