免疫學(xué)原理與應(yīng)用 2_課件

1、第一節(jié) 海水魚類及其他動(dòng)物的免疫概念一、水產(chǎn)動(dòng)物免疫及其主要功能1 . 水產(chǎn)動(dòng)物免疫1免疫ImmunisImmune, Immunity：指生物機(jī)體識(shí)別自身和異己物質(zhì)，對(duì)自身物質(zhì)形成天然免疫耐受，對(duì)異己物質(zhì)產(chǎn)生去除作用的一種生理反響. 簡(jiǎn)單說(shuō)，免疫是機(jī)體對(duì)病原產(chǎn)生抵抗力，使其免受感染的過(guò)程。正常：免疫對(duì)機(jī)體有利，可產(chǎn)生抗感染、抗腫瘤等維持機(jī)體生理平衡和穩(wěn)定的免疫保護(hù)反響；異常：免疫可對(duì)機(jī)體造成傷害，如超敏反響、自身免疫疾病和腫瘤等。 2水產(chǎn)動(dòng)物免疫學(xué)Immunology：指研究水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物免疫系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)與生理功能的一門新興學(xué)科。Chapter 3. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用2.

2、抗原與抗體的概念1) 抗原： 但凡能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反響的物質(zhì)，稱為抗原。2) 抗體：機(jī)體免疫活性細(xì)胞受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)的由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白。簡(jiǎn)單說(shuō)，抗體是一種免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)Chapter 2. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用3. 免疫反響的功能1) 免疫防御：為機(jī)體去除異己物質(zhì)的一種免疫保護(hù)功能。 正常：抗感染消滅病原生物、中和毒素 異常： 過(guò)高變態(tài)反響(超敏反響)；過(guò)低免疫缺陷癥變態(tài)反響：某些抗原或半抗原再次進(jìn)入致敏機(jī)體，在體內(nèi)引起特異性體液或細(xì)胞免疫反響，由此導(dǎo)致

3、組織損傷或生理功能紊亂。免疫缺陷癥：指機(jī)體免疫系統(tǒng)由于先天性發(fā)育不良或后天遭受損傷所致的免疫功能降低或缺乏的系統(tǒng)綜合癥。Chapter 2. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用2) 免疫穩(wěn)定：機(jī)體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定的一種生理功能。 正常：消除體內(nèi)衰老的和被破壞的細(xì)胞 異常：過(guò)高自身免疫病自身免疫?。鹤陨砜贵w或自身致敏淋巴細(xì)胞攻擊自身靶抗原細(xì)胞和組織，使其產(chǎn)生的病理性改變或功能障礙。3) 免疫監(jiān)督：機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別、去除體內(nèi)突變、畸形的細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的一種生理保護(hù)作用。 正常： 識(shí)別和消除突變細(xì)胞 異常： 過(guò)低易生惡性腫瘤、病毒持續(xù)感染。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念 二、免 疫 系

4、統(tǒng) 的 組 成 中樞免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊禽類 免疫器官 外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)的淋巴組織 造血干細(xì)胞 淋巴細(xì)胞：T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、第三淋巴細(xì)胞群 自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)免疫 免疫細(xì)胞 抗原提呈細(xì)胞：?jiǎn)魏送淌杉?xì)胞、樹突細(xì)胞、并指細(xì)胞、系統(tǒng) 朗罕細(xì)胞、B細(xì)胞 其他免疫細(xì)胞：中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒 細(xì)胞、肥大細(xì)胞、紅細(xì)胞 抗體 免疫分子 補(bǔ)體 細(xì)胞因子：淋巴因子和單核因子一 免疫器官1、中樞免疫器官1 骨髓(Bone marrow)樣組織：魚類無(wú)淋巴造血的骨髓，但在軟骨魚的眶區(qū)和顱下區(qū)存在淋巴組織或骨髓樣組織，可形成血細(xì)胞

5、，具有與高等脊椎動(dòng)物骨髓相似的結(jié)構(gòu)與功能。 真骨魚的腎臟也屬骨髓樣組織，是重要的淋巴器官，具造血功能。它分為頭腎前腎和中腎后腎、體腎二局部。其中頭腎失去排泄功能而成為免疫器官和造血組織，為魚類中第二個(gè)發(fā)育的免疫器官，免疫細(xì)胞的發(fā)源地(產(chǎn)生B細(xì)胞和紅細(xì)胞等，相當(dāng)于哺乳類骨髓)；此外，受抗原刺激后，頭腎增生并存在抗體產(chǎn)生細(xì)胞，說(shuō)明其為魚類重要的抗體產(chǎn)生器官(相當(dāng)于哺乳類的淋巴結(jié))。2 胸腺(Thymus)：真骨魚類的胸腺位于？，它無(wú)皮質(zhì)與髓質(zhì)的分界線，胸腺由結(jié)締組織被膜環(huán)繞，實(shí)質(zhì)由上皮細(xì)胞網(wǎng)組成，在上皮細(xì)胞網(wǎng)中分布由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和成熟的漿細(xì)胞等。魚類的胸腺是T細(xì)胞分化成熟為具免疫

6、活性的T細(xì)胞的場(chǎng)所，T細(xì)胞移至外周免疫器官后，可接受抗原刺激增殖分化產(chǎn)生免疫效能。 魚類胸腺的結(jié)構(gòu)與功能隨著季節(jié)和年齡的變化而變化。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念 2) 脾的功能： a. 在胚胎期為造血干細(xì)胞增殖分化的場(chǎng)所，具有造血功能； b. 是血液的濾過(guò)器，可以去除血中的病原微生物和自身衰老損傷的血細(xì)胞。 c. 為T、B細(xì)胞移居和接受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答、產(chǎn)生免疫效應(yīng)等重要場(chǎng)所。脾中的淋巴細(xì)胞60%為B淋巴細(xì)胞。B. 魚類脾的結(jié)構(gòu)與功能 a. 有頜類才有真正的脾，軟骨魚類脾較大，分化為紅髓和白髓，為造血器官；硬骨魚類無(wú)明顯紅髓和白髓分化，但同時(shí)有造血和免疫功能。 b. 與頭腎相比，脾在體液

7、免疫反響中處于相對(duì)次要的地位，其受抗原刺激后的增殖反響以彌散的方式發(fā)生在整個(gè)器官上。 c. 硬骨魚類受免疫接種后，其脾、腎和肝等器官的黑色素巨噬細(xì)胞增多，并與淋巴細(xì)胞和抗體生成細(xì)胞聚集在一起形成黑色素巨噬細(xì)胞中心，它的作用有：參與體液免疫和炎癥反響；對(duì)異物進(jìn)行貯存、破壞和脫毒；記憶細(xì)胞原發(fā)中心；保護(hù)組織免受自由基損傷。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念2粘膜淋巴組織(Mucosa Associated Lymphatic Tissue, MALT)： a. 魚類皮膚、鰓和消化道等器官的上皮組織中存在的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和各類粒細(xì)胞等都屬于MALT。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后，巨噬細(xì)胞可對(duì)抗原進(jìn)行處理和呈遞

8、，抗體分泌細(xì)胞(Antibody secreting cell, ASC)會(huì)分泌抗體，與粘液中的溶菌酶和補(bǔ)體等非特異性的保護(hù)組織一道組成抵御病原感染的防線。 b. 魚類MALT相對(duì)于其系統(tǒng)免疫系統(tǒng)有一定自主性，在其免疫接種方法選擇和改進(jìn)中有實(shí)際意義：口服免疫后，頭腎、血液和腸都出現(xiàn)ASC，但鰓中和皮膚粘液中無(wú)；肛門插管接種抗原后可誘導(dǎo)腸、皮膚粘液和膽汁中產(chǎn)生特異性抗體，但血清中無(wú)；腹腔免疫4周后，頭腎、血液和鰓中抗體分泌同時(shí)到達(dá)峰值，而腸只有到第7周才有顯著反響；顆?？乖菝庖邥r(shí)，皮膚攝取能力遠(yuǎn)大于鰓，因此，口腔和腹腔免疫可明顯刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)答，浸泡和肛門免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反響。 c.

9、 教材中的腸道淋巴組織也屬于MALT的范疇。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念二 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞：泛指所有參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞及其前體細(xì)胞，包括：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞及其它抗原提呈細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞和肥大細(xì)胞等。 魚類免疫細(xì)胞主要存在于免疫器官、組織以及血液和淋巴液中。1。T 淋巴細(xì)胞：它由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞組成，在胸腺內(nèi)分化成熟，為胸腺依賴性淋巴細(xì)胞(Thymus dependent lymphocyte)的簡(jiǎn)稱。成熟的T細(xì)胞隨血流分布于外周免疫器官，并通過(guò)血液與組織間的淋巴細(xì)胞再循環(huán)游走于全身，執(zhí)行其免疫功能。其在外周血中所占淋巴細(xì)胞總數(shù)的6580%。2。B 淋巴細(xì)

10、胞：在骨髓骨髓樣組織中分化成熟，稱骨髓依賴淋巴細(xì)胞。成熟的B細(xì)胞隨血流分布于外周淋巴組織，主要功能為產(chǎn)生抗體，執(zhí)行體液免疫。外周血中占淋巴細(xì)胞總數(shù)的1015%。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念3. NK細(xì)胞 它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細(xì)胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞具較強(qiáng)殺傷作用。約占510%。4. 單核吞噬細(xì)胞 它包括血液中的單核細(xì)胞Monocyte, MC和組織中的巨噬細(xì)胞。它不僅在非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，在特異性免疫中也是不可缺少的細(xì)胞，有吞噬殺傷、抗原遞呈和合成分泌細(xì)胞因子等作用。5. 其他免疫細(xì)胞 除上述免疫細(xì)胞外，血液中許多細(xì)胞均直接或間接參與免疫應(yīng)

11、答過(guò)程，如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血小板等。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念三免疫因子免疫因子： 由機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生，與免疫應(yīng)答有關(guān)的、分泌到體液中或存在于細(xì)胞膜外表的分子統(tǒng)稱為免疫因子。 組成：它主要包括抗體、補(bǔ)體系統(tǒng)各成分、細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞膜分子等。 細(xì)胞因子(Cytokines) ：由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞如纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等合成和分泌的，具有調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理功能的可溶性小分子蛋白質(zhì)。 細(xì)胞因子種類繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用重大。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念三、免疫的主要類型1. 天然免疫定義： 指機(jī)體先天具有的正常生理防御功能，對(duì)各種不同的病原微生物與

12、異物都有排斥和屏障作用，也稱非特異性免疫。 如：皮膚和粘液、粘液中的溶菌酶、吞噬細(xì)胞等2. 獲得性免疫定義：指機(jī)體對(duì)某一種或一類微生物或其產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性 抵抗力，它是后天的，是生物體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中由于自 然感染或預(yù)防接種后產(chǎn)生的。也稱特異性免疫。 1) 自動(dòng)免疫：因感染病原或注射抗原疫苗而獲得的免疫 抗原：凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反響的物質(zhì)。 2) 被動(dòng)免疫：從母體獲得抗體或因人工注射抗體而獲得的免疫 免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念3) 自動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫的區(qū)別： a. 發(fā)生作用時(shí)間： 自動(dòng)免疫：慢1-4周； 被動(dòng)免疫：快立即 b. 效果： 自動(dòng)免疫：

13、可刺激機(jī)體持續(xù)產(chǎn)生抗體，再次接收抗原刺激 將表現(xiàn)出再次反響或反響增強(qiáng) 被動(dòng)免疫：體內(nèi)抗體數(shù)量不會(huì)增多，再次接觸抗原也不出 現(xiàn)增強(qiáng)反響 c. 維持時(shí)間： 自動(dòng)免疫：長(zhǎng)半年至終生； 被動(dòng)免疫：短2-3周 d. 用途： 自動(dòng)免疫：預(yù)防感染； 被動(dòng)免疫：應(yīng)急治療 免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念四、水產(chǎn)動(dòng)物免疫的特點(diǎn)1. 水產(chǎn)動(dòng)物病原與人類疾病關(guān)系不大，不易引起重視；2. 水產(chǎn)動(dòng)物免疫機(jī)制依賴于外界環(huán)境變化較為明顯；3. 水產(chǎn)動(dòng)物抗體與人等高等生物的抗體不同，其疾病的免疫學(xué)防治方法尚在探索中；4. 水產(chǎn)動(dòng)物是變溫動(dòng)物，其免疫學(xué)研究必須在同一條件下進(jìn)行五、水產(chǎn)動(dòng)物免疫在病害防治中的意義1. 通過(guò)人工免疫或?qū)?/p>

14、病后有免疫力個(gè)體篩選，培育免疫新品種(SPR)；2. 通過(guò)人工免疫，可有效預(yù)防流行病的發(fā)生；3. 免疫防治可有效防止藥物殘留及化學(xué)藥物對(duì)水體的污染；4. 免疫防治可防止長(zhǎng)期使用抗生素等而產(chǎn)生的耐藥性；5. 疫苗防治可維持較長(zhǎng)的藥效時(shí)間。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念第二節(jié) 水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的非特異性免疫魚蝦貝類的非特異性免疫因子 外部屏障：皮膚和粘膜 屏障作用 內(nèi)部屏障：血腦屏障(血胎屏障)非特異性免疫 細(xì)胞：吞噬細(xì)胞粒細(xì)胞等 細(xì)胞和 體液作用 體液：補(bǔ)體、溶菌酶等Chapter 2. 免疫原理及應(yīng)用一、魚蝦貝類的非特異性免疫 1) 作用： a. 機(jī)械阻擋和排除作用 b. 具非特異性抗菌物質(zhì)：溶菌酶

15、、皮脂腺產(chǎn)乳酸等 c. 正常菌群的拮抗作用 2) 種類 A. 粘液: a. 屏障保護(hù)作用 (可限制病原菌運(yùn)動(dòng)，阻止其侵入) b. 含有溶菌和殺菌的多糖類和蛋白類，如溶菌酶等 B. 甲殼、皮膚和鱗片等： 機(jī)械屏障作用2. 體內(nèi)屏障 血腦屏障：由腦膜、脈絡(luò)叢和腦血管等組成。為大腦與軀干屏障 作 用：防止病原和其他異物進(jìn)入大腦 免疫：非特異性免疫 1) 吞噬細(xì)胞：包括粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞 作用： 受病原和宿主產(chǎn)生的趨化因子作用接近并吞噬 或殺傷病原 2) 非特異性細(xì)胞毒細(xì)胞：主要存在于腎臟和腹腔，血中少。 作用：與哺乳動(dòng)物NK細(xì)胞類似，能夠殺傷病毒感染的 靶細(xì)胞，從而具有抗感染作用 免疫：非特

16、異性免疫4. 非特異性體液因子 1) 補(bǔ)體： A. 來(lái)源與成分：存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白 組成，它對(duì)熱敏感，4520min失活 B. 作用：a. 在抗原抗體反響中通過(guò)補(bǔ)體第二激活通路補(bǔ)充 抗體作用； b. 激活后的補(bǔ)體能溶解細(xì)胞膜，殺滅病毒； c. 激活后的補(bǔ)體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬和釋放組 胺等多種功能，協(xié)助殺滅病原. 免疫：非特異性免疫2) 干擾素： A. 定義：是一類在同種細(xì)胞上具有抗病毒活性的蛋白質(zhì). (其活性的發(fā)揮受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及RNA和DNA的合成) B. 來(lái)源與成分：主要為由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)； 機(jī)體產(chǎn)生干擾素的數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響明顯。如： 硬

17、頭鱒感染病毒后，10 下，4d產(chǎn)生； 15 下，2d產(chǎn)生 C. 作用： 干擾素為重要的抗病毒感染因子 a. 抗病毒增殖活性； b. 免疫調(diào)節(jié)活性； c. 細(xì)胞分裂抑制活性； d. 抑制腫瘤生長(zhǎng)活性； e. 改變細(xì)胞生物學(xué)特性等。 免疫：非特異性免疫3) 溶菌酶 A. 來(lái)源與成分：存在于粘液、血清和巨噬細(xì)胞中，是一種 水解酶低分子堿性多肽 B. 作用： 可直接溶解殺死G+菌等病原微生物4) C反響性蛋白 A. 來(lái)源與成分：為存在于鰈科魚類中的一種蛋白質(zhì) B. 作用： a. 作為調(diào)理素可增加吞噬細(xì)胞的吞噬量 b. 能使真菌、細(xì)菌乃至寄生蟲中的糖類和磷酸酯 產(chǎn)生沉淀，從而殺滅病原體。5) 備解素：為

18、 - 球蛋白，可在補(bǔ)體協(xié)助下殺死許多細(xì)菌、原 蟲甚至某些病毒等免疫：非特異性免疫二、影響非特異性免疫的因素 1) DO： 缺氧可引起水生動(dòng)物抗病力下降 據(jù)此，有時(shí)可采用沖水、換水和充氣等方法緩解病情 2) 水質(zhì)：水體有毒物質(zhì)可阻礙機(jī)體正常機(jī)能，免疫力下降 3) 水溫：適宜的溫度變化可抑制疾病的爆發(fā)2. 營(yíng)養(yǎng)因素 1) 營(yíng)養(yǎng)缺乏，體質(zhì)下降，機(jī)體抗菌力降低 2) 營(yíng)養(yǎng)缺乏，機(jī)體細(xì)胞代謝下降，病毒感染率降低3. 個(gè)體差異和年齡影響免疫：非特異性免疫第三節(jié) 特異性免疫一、抗原Antigen, Ag1. 抗原的概念 1) 抗原：是一種能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物或效

19、應(yīng)體細(xì)胞在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。 2) 抗原的兩種性能： a. 免疫原性：指抗原分子能刺激機(jī)免疫細(xì)胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子抗體或細(xì)胞體致敏T細(xì)胞 的性能。 b. 免疫反響性：指抗原分子能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反響的性能。 免疫原性和免疫反響性統(tǒng)稱為抗原性。Chapter 2. 免疫原理及應(yīng)用3) 抗原的主要種類： a. 完全抗原complete antigen： 既有免疫原性又有免疫反響性的抗原稱為完全抗原。 大多異種蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、細(xì)菌外毒素和動(dòng)物免疫血清等都為完全抗原 b. 不完全抗原(incomplete antigen)

20、： 那些本身沒(méi)有免疫原性而只有免疫反響性的物質(zhì),又稱半抗原h(huán)apten 半抗原大多為小分子物質(zhì)，如大多數(shù)多糖、脂類、某些藥物和簡(jiǎn)單化合物等、 半抗原單獨(dú)作用無(wú)免疫原性，當(dāng)與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合形成半抗原載體復(fù)合物使，便可獲得免疫原性。該復(fù)合物不但可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)半抗原的抗體，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)蛋白質(zhì)載體的抗體。 4) 特殊抗原： a. 變應(yīng)原(allergen)：能刺激機(jī)體產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)答(超敏反響)的抗原。 b. 耐受原(tolerangen)：能誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)其表現(xiàn)無(wú)免疫應(yīng)答 (免疫耐受)的抗原。 免疫類型：特異性免疫2. 抗原的特性 1) 特異性：具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反響的能力；

21、2) 異物性：正常情況下，能引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原都是異種或 異體物質(zhì)，機(jī)體本身的物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；并且， 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強(qiáng)。 3) 大分子膠體性：抗原的分子量較大 (1萬(wàn)Da以上)，分子量小于4000 Da的物質(zhì)一般不具抗原性。同一類物質(zhì)，其抗原性隨分子量增大而增強(qiáng) 4) 結(jié)構(gòu)復(fù)雜性：抗原要有一定的化學(xué)組成和復(fù)雜的結(jié)構(gòu) 抗原性：芳香類Pr.非芳香類Pr 多糖核酸類脂 5) 完整性：抗原必須保持完整的化學(xué)活性基團(tuán)才能具有抗原性，否那么， 將不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體免疫：特異性免疫3. 決定抗原免疫原性的因素 某物質(zhì)是否具有免疫原性，能否作為免疫原誘

22、導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與其本身的性質(zhì)、機(jī)體對(duì)該物質(zhì)的反響性及免疫的方式等直接相關(guān)。 1) 分子大?。悍簿哂忻庖咴缘奈镔|(zhì)均為大分子的有機(jī)物質(zhì)無(wú)機(jī)物不能作為免疫原，分子量低于4000的物質(zhì)通常也無(wú)免疫原性； 為什么大分子物質(zhì)免疫原性較強(qiáng)呢？ a. 分子量越大，其外表攜帶的抗原決定簇越多，因而對(duì)淋巴細(xì)胞刺激也越強(qiáng)； b. 大分子膠體物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在體內(nèi)不易被破壞和去除，存留時(shí)間較長(zhǎng)，使淋巴細(xì)胞得到較持久的刺激，有利于免疫應(yīng)答的發(fā)生。 2) 化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成：大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與結(jié)構(gòu)有關(guān) 如：明膠分子量雖達(dá)10萬(wàn)，但其組分為直鏈a.a. ，易被分解破壞，免疫原性弱; 假設(shè)明膠

23、分子上連接少量酪氨酸或谷氨酸等芳香族a.a. ，免疫原性顯著增強(qiáng); 以芳香族a.a.為主的Pr.，其免疫原性要明顯高于非芳香族a.a.為主的Pr.免疫：特異性免疫3) 異物性： 免疫系統(tǒng)能識(shí)別自己和異己物質(zhì)，對(duì)自身物質(zhì)免疫耐受；對(duì)異己物質(zhì)免疫應(yīng)答 。 免疫原性與抗原和宿主種系關(guān)系遠(yuǎn)近有關(guān)，種系關(guān)系越遠(yuǎn)，免疫原性越強(qiáng)。 具有異物性的物質(zhì)包括以下三類： a. 異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等； b. 同種異體物質(zhì)：如人類紅細(xì)胞外表血型抗原A、B、O、Rh等； c. 改變和隱蔽的自身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的“自身物質(zhì)和釋放入血的自身抗原，如甲狀腺蛋

24、白，等。4) 免疫途徑：相同抗原因免疫途徑不同，產(chǎn)生的免疫效果也不同 多數(shù)抗原須經(jīng)非消化道(皮下、肌肉、體表或血液等)途徑才能產(chǎn)生良好免疫效果； 有些抗原(如須刺激腸粘膜相關(guān)淋巴組織的抗原)，只有口服免疫才有良好效果。5) 機(jī)體應(yīng)答性：抗原物質(zhì)能否產(chǎn)生免疫原性還與機(jī)體的免疫應(yīng)答能力有關(guān)。 如：純化多糖對(duì)人和小鼠有良好免疫原性，而對(duì)豚鼠那么不能引起免疫應(yīng)答。 此外，抗原的免疫原性還與抗原劑量、佐劑、機(jī)體年齡與生理狀態(tài)等因素有關(guān)。免疫：特異性免疫4. 抗原的特異性與交叉反響 抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在免疫反響性上。 表現(xiàn)在免疫原性：指某一抗原分子只能誘導(dǎo)相應(yīng)淋巴細(xì)胞發(fā)生專一應(yīng)答； 表

25、現(xiàn)在免疫反響性：指某一抗原分子只能與相應(yīng)抗體或淋巴細(xì)胞發(fā)生專一結(jié)合。 抗原的特異性是由抗原分子外表的抗原決定簇決定的。1) 抗原決定簇antigenic determinant： 指位于抗原分子外表、決定抗原特異性的特定化學(xué)基團(tuán)，它是決定抗原反響性呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)根底。又稱表位epitope 具體說(shuō)，抗原決定簇就是與相應(yīng)淋巴細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合的部位，并且，只有兩者結(jié)合才能激活淋巴細(xì)胞并引起免疫反響 免疫：特異性免疫2) 抗原決定簇的種類與組成 a. 種類：一個(gè)抗原外表可以有一種或多種不同的抗原決定簇； 功能性(抗原)決定簇：指位于抗原分子外表易被相應(yīng)淋巴細(xì)胞識(shí)別、啟動(dòng)免疫應(yīng)答，同時(shí)能與相

26、應(yīng)抗體或致敏T細(xì)胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反響的決定簇。 隱蔽性(抗原)決定簇：位于抗原分子內(nèi)部，不能被淋巴細(xì)胞識(shí)別，無(wú)法觸發(fā)免疫應(yīng)答的抗原決定簇。它假設(shè)經(jīng)理化因素處理或經(jīng)抗原提呈細(xì)胞加工后，也可將隱藏與抗原分子內(nèi)部的決定簇暴露，稱為功能性決定簇而發(fā)揮免疫作用。b. 抗原結(jié)合價(jià)：一個(gè)抗原分子上能與相應(yīng)抗體分子結(jié)合的抗原決定簇的總數(shù) 單價(jià)抗原：有些半抗原只能和抗體分子中一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價(jià)抗原 多價(jià)抗原：多數(shù)抗原有多個(gè)相同和不同抗原決定簇，能和多個(gè)抗體分子結(jié)合。c. 組成：不同類型的抗原決定簇組成不同，一般有5-7個(gè)單體組成 如：Pr類抗原：其抗原決定簇有5 個(gè)左右氨基酸 多糖類抗原：其抗原決

27、定簇有6 個(gè)左右單糖 核酸類抗原：其抗原決定簇有6-8 個(gè)左右核苷酸殘基 免疫：特異性免疫3) 抗原決定簇對(duì)抗原特異性的影響 抗原決定簇的化學(xué)組成、排列及空間結(jié)構(gòu)決定著抗原的特異性。 天然抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，同種抗原有多種不同抗原決定簇，不同抗原也具有不同的抗原決定簇，因而各具特異性。4) 共同抗原與交叉反響共同抗原：指具有相同的抗原決定簇的抗原。其中： 類屬抗原：存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱類屬抗原； 異嗜性抗原：存在于不同種屬生物間的共同抗原稱異嗜性抗原。交叉反響：由共同抗原決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可和兩種抗原結(jié)合發(fā)生反響。 交叉反響有時(shí)也在兩種抗原決定簇構(gòu)型相似時(shí)發(fā)生。免疫：特異性免

28、疫免疫：特異性免疫5. 抗原的分類 根據(jù)分類方法不同，可以將抗原分為不同的類型。A. 根據(jù)抗原的來(lái)源及與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(1) 異種抗原：指來(lái)自另一物種的抗原物質(zhì)。如各種微生物及其代謝產(chǎn)物、(2) 同種異體抗原：指來(lái)自同種而基因型不同的個(gè)體的抗原物質(zhì)，如人血型抗原；(3) 自身抗原：指能引起自身免疫應(yīng)答的自身組織成分，如改變和隱蔽的自身物質(zhì)。B. 根據(jù)抗原激活B細(xì)胞是否依賴T細(xì)胞輔助來(lái)分類(1) 胸腺依賴性抗原thymus dependant antigen, TD-Ag： TD抗原：含T細(xì)胞抗原決定簇、需T細(xì)胞協(xié)助才能激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab 的抗原。 如：病毒、細(xì)菌、細(xì)胞及各種蛋白質(zhì)等抗原都屬

29、TD抗原(2) 胸腺非依賴性抗原thymus independant antigen, TI-Ag： TI抗原：只含B細(xì)胞抗原決定簇、不需T細(xì)胞協(xié)助可直接激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab 的抗原 如：革蘭氏陰性菌的LPS、莢膜多糖等。 C. 抗原的其它分類方法：如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等。免疫：特異性免疫6. 細(xì)菌抗原 細(xì)菌是重要的病原體，其成分十分復(fù)雜，每種結(jié)構(gòu)及其代謝產(chǎn)物均有不同的抗原成分，每種細(xì)菌都是一個(gè)由多種抗原組成的復(fù)合體。 細(xì)菌抗原的種類： a. 外表抗原：包括莢膜抗原和微莢膜抗原； b. 菌

30、體抗原：指位于細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上的抗原； c. 鞭毛抗原：存在于鞭毛上的抗原； d. 菌毛抗原：存在于菌毛上的抗原； e. 外毒素和類毒素：毒素是Pr，具很強(qiáng)免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素 外毒素：為細(xì)菌產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì)，具強(qiáng)抗原性 類毒素：為外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛脫毒而成，具強(qiáng)抗原性 外毒素和類毒素均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素 免疫：特異性免疫7. 佐劑adjuvant 1) 定義：指與抗原同時(shí)或預(yù)先注入機(jī)體后，能夠非特異性地增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力的物質(zhì)。 2) 種類： a. 無(wú)機(jī)佐劑：主要為含鋁化合物，如：銨明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁等 b. 有機(jī)佐劑：主要為微生物及其代謝產(chǎn)物

31、，如分枝桿菌(結(jié)核桿菌)、LPS等 c. 合成佐劑：一些合成物質(zhì)，如PolyI:C、PolyA:U 等 d. 油劑：如礦物油石蠟油、植物油、花生油乳化佐劑、弗氏佐劑等 3) 弗氏佐劑：由礦物油(石蠟油)、乳化劑(羊毛脂或吐溫80)和殺死的分支桿菌(如結(jié)核桿菌)等組成的佐劑。 a. 完全氟氏佐劑：以上三種成分俱全的佐劑 b. 不完全氟氏佐劑：不含分支桿菌的氟氏佐劑，其對(duì)機(jī)體刺激作用較弱免疫：特異性免疫4) 作用： a. 增加抗原的免疫原性增加抗原的外表積； b. 增強(qiáng)抗體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力； c. 改變抗體產(chǎn)生的類型； d. 引起或增強(qiáng)IV型超敏反響。5) 作用機(jī)制：作用機(jī)制尚未完全了解，主要

32、可能有以下原因 主要是促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖、分化，改變抗原的物理形狀，使抗原在體內(nèi)維持較長(zhǎng)時(shí)間，易于巨噬細(xì)胞的攝取、處理并提呈給淋巴細(xì)胞，從而提高抗原的免疫原性，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的應(yīng)答能力。6) 使用方法： 預(yù)先使用或與抗原同時(shí)使用 免疫：特異性免疫二、免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)1. 免疫球蛋白與抗體的根本概念(1)免疫球蛋白：指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。 Ig 過(guò)去稱為 球蛋白，主要存在于血液和其他分泌液中。(2) 膜外表免疫球蛋白(Surface membrane immunoglobulin, SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為抗原識(shí)別受體的免疫球蛋白。(3

33、)抗體(Antibody, Ab)：機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的終末B細(xì)漿細(xì)胞所合成與分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 抗體是重要的免疫分子，主要存在于血液、體液和粘膜分泌液中。 細(xì)胞免疫：由免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反響。 體液免疫：由抗體介導(dǎo)的免疫反響。 抗體 = 免疫球蛋白？Why?免疫：特異性免疫 抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗體。 如：骨髓瘤蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相似(屬Ig)，但無(wú)抗體活性，無(wú)免疫功能； SmIg的化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相似，能與Ag特異性結(jié)合，但它不是激活的B細(xì)胞產(chǎn)生。 免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)上的概念，但抗體是生物學(xué)功能上的概念。2. 作

34、為抗體必須具備的條件： 1) 只有脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞才能產(chǎn)生； 2) 必須有抗原刺激； 3) 能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合； 4) 其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。免疫：特異性免疫3. Ig的化學(xué)結(jié)構(gòu) H鏈V區(qū) Ig 分子是由一個(gè)或多個(gè)單體組成； L鏈V區(qū) 如：IgG、IgD和IgE 均為單體分子 L鏈C區(qū) 每個(gè)Ig單體呈Y形對(duì)稱結(jié)構(gòu)。 H鏈C區(qū) 每個(gè)單體是由二硫鍵連接的四條肽鏈組成； 四條肽鏈包括2條重鏈(H鏈)和2條輕鏈(L鏈)； Ig單體的結(jié)構(gòu) 重鏈：約由450個(gè)或570個(gè)氨基酸組成，它包括5類： 、 、 、 、 。 Ig因重鏈的種類不同分為5類： IgG (鏈)，IgA (鏈)，IgM

35、 (鏈)，IgD (鏈)，IgE (鏈) 輕鏈：約由214個(gè)氨基酸組成，以二硫鍵與重鏈相連。它有2類：型和型 每條肽鏈包括可變區(qū)(V區(qū)) 和穩(wěn)定區(qū)(C區(qū))。重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)都是抗原特異性結(jié)合部位。在結(jié)構(gòu)上與抗原結(jié)構(gòu)互補(bǔ)(因而又稱互補(bǔ)決定區(qū))免疫：特異性免疫4. 不同動(dòng)物中Ig的類型 根據(jù)CH上同種型決定簇的不同，將Ig分為5種：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE.其中，IgG、IgA和IgM又依CH氨基酸組成和H鏈間二硫鍵數(shù)目的差異，分成假設(shè)干亞類： IgG1、IgG2、IgG3、IgG4；IgA1、IgA2；IgM1和IgM2。1) 哺乳類：a. 人、鼠：IgG,

36、IgA, IgM, IgD, IgE; b. 兔： IgG, IgA, IgM; c. 其他：IgG, IgA, IgM, IgE; 2) 鳥類： IgG, IgA, IgM; 3) 兩棲類： IgG, IgM; 4) 魚類： IgM; 5) 無(wú)脊椎動(dòng)物：無(wú)Ig免疫：特異性免疫5. 各種Ig的特性與功能1) IgG： a. 來(lái)源與性質(zhì)：主要由脾和淋巴結(jié)的漿細(xì)胞合成，常以單體形式存在于血清和其他血清中。它在人體的含量最高(3/4)、半衰期最長(zhǎng)(23d)、易透過(guò)毛細(xì)血管，因而可廣泛分布到組織和其他體液中。分子量15萬(wàn)Da. b. 作用：(1) 抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗體均屬IgG；

37、IgG還是唯一能通過(guò)胎盤的Ig，是新生兒抗感染的重要因素。 (2) 不少自身抗體和引起II、III型變態(tài)反響的抗體也屬IgG; (3) IgG與補(bǔ)體結(jié)合后可通過(guò)傳統(tǒng)途徑激活補(bǔ)體； (4) IgG能與巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞外表相應(yīng)受體結(jié)合， 從而發(fā)揮調(diào)理吞噬和ADCC效應(yīng)。免疫：特異性免疫2) IgM： a. 來(lái)源與性質(zhì)： (1)主要由脾的漿細(xì)胞合成，它是由5個(gè)IgM單體借一個(gè)J鏈和假設(shè)干個(gè)二硫鍵連接而成的五聚體，是5類Ig中分子量最大的(95萬(wàn)Da)，故稱巨球蛋白。 (2) 它不能透過(guò)血管壁，主要分布于血液中，占血清Ig總量的10%左右； (3) 為個(gè)體發(fā)育中合成最早的Ig，在胎兒晚期

38、已能合成，但它不能通過(guò)胎盤； (4) 是人體免疫后最早出現(xiàn)的抗體； (5) IgM是目前魚類中唯一確認(rèn)的抗體類型。 b. 作用： 其作用與IgG類似，具有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過(guò)，由于IgM抗原結(jié)合效價(jià)最高，是高效能的抗菌抗體，它的上述作用均比IgG強(qiáng)。免疫：特異性免疫單體3) IgA： (1) 分為血清型IgA和分泌型IgA(SIgA)兩種類型。前者85%為單體，少數(shù)為含J鏈的二聚體，主要由腸系膜淋巴組織漿細(xì)胞產(chǎn)生；后者為二聚體(雙體)。 (2) 人體含量?jī)H次于IgG (占10- 15%)，分子量為18-20萬(wàn)Da。 (3) 是少數(shù)在消化道中不被消化的Pr之一； (4) 嬰兒出

39、生4-6個(gè)月后才能合成，但可從母乳中獲得SIgA (5) SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜外表以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是局部粘膜防御感染的重要因素； (6) 血清型IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。免疫：特異性免疫4) IgD：(1) 以單體形式存在于血清中，含量低，僅占人體血清Ig總量的1%。(2) 結(jié)構(gòu)與IgG類似，不能通過(guò)胎盤，也不能激活補(bǔ)體。(3) 血清中的IgD功能尚不清楚，但B細(xì)胞外表的IgD(SIgD)是成熟B細(xì)胞的重要標(biāo)志，它是B細(xì)胞的抗原識(shí)別受體，在接受抗原刺激后對(duì)B細(xì)胞活化、增生和分化其調(diào)節(jié)作用； 5) IgE： (1) 以單體形式存在

40、于血清中，是系統(tǒng)進(jìn)化最晚出現(xiàn)的Ig，也是含量最低的Ig，僅占血清Ig總量的0.001%. (2) 在過(guò)敏性疾病和某些寄生蟲感染病人血清中其含量顯著增高； (3) 產(chǎn)生部位與SIgA相似，主要由呼吸道如鼻咽、扁桃體、支氣管)和胃腸道粘膜固有層的漿細(xì)胞產(chǎn)生。免疫：特異性免疫第四節(jié) 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用一、根本概念1. 血清學(xué)反響：抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反響;2. 免疫學(xué)反響：抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反響;3. 抗原抗體反響：抗原與相應(yīng)抗體在體外或體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反響；4. 免疫診斷學(xué)：用體液免疫和細(xì)胞免疫的方法來(lái)診斷有關(guān)疾病的科學(xué)。 二、血清學(xué)反響的特點(diǎn) 1. 特異性與

41、交叉性：a. 特異性：一種抗原一般只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合； b. 交叉性：當(dāng)不同抗原具有相同抗原決定簇時(shí)，其結(jié)合又具有交叉性2.外表性與可逆性：a. 外表性：抗原與抗體分子結(jié)合是分子外表的結(jié)合； b. 可逆性：抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開，且其性質(zhì)不變?？赡嫘允敲庖呶綄游龇ㄌ崛∶庖呒兛乖蚩贵w的理論根底。Chapter 2. 免疫原理及應(yīng)用3. 定比性：抗原與抗體需按一定的比例結(jié)合 一般情況下，抗原外表的抗原決定簇是多價(jià)的，而抗體上的抗 原受體通常是單價(jià)的或二價(jià)的，二者只有以一定比例結(jié)合才能出現(xiàn) 可見(jiàn)的血清學(xué)反響。4. 階段性: 抗原抗體反響具有明顯的階段性 1) 抗原抗體的特異性結(jié)

42、合階段：時(shí)間短數(shù)秒，不可見(jiàn) 2) 抗原與抗體反響的可見(jiàn)階段：慢數(shù)分至數(shù)天，有凝集、沉淀等5. 高度敏感性：可用于檢測(cè)極微量的抗原與抗體。如： 血清中和試驗(yàn)可用于檢測(cè)含量低至10-3 g / ml的魚類病毒； ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))可檢測(cè)含量為10-3 g / ml的細(xì)菌性病原6. 條件依賴性：抗原抗體間出現(xiàn)可見(jiàn)反響要提供最適的條件，如： pH值(一般為6-8)；溫度(37-45)；適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)(如生理鹽水)； 震蕩(增加抗原抗體相互接觸的時(shí)機(jī))等。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用三、主要的抗原抗體反響一凝集反響 Agglutination1. 定義：顆粒性抗原(如完整的紅細(xì)胞或細(xì)菌)與相應(yīng)抗體

43、結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間形成肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱為凝集反響。 用于凝集反響的抗原稱為凝集原；用于凝集反響的抗體稱凝集素2. 種類: (1)直接凝集反響(direct agglutination) ：顆粒性抗原直接與相應(yīng)抗體結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。 玻片法：屬定性試驗(yàn)，常用于細(xì)菌和ABO血型鑒定 試管法：屬定量試驗(yàn)，用Ag測(cè)定血清中相應(yīng)Ab及其數(shù)量。在該試驗(yàn) 中，將出現(xiàn)明顯凝集反響的血清最高稀釋度稱為該抗體的效價(jià)或滴度。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法 (2) 間接凝集反響(indirect or passive agglutination) ：將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒外表，再與相

44、應(yīng)抗體作用，在適宜電解質(zhì)存在時(shí)，出現(xiàn)載體顆粒被動(dòng)凝集現(xiàn)象。 常用載體有人O型紅細(xì)胞、乳膠顆粒、活性炭等，并因載體不同而分別稱為間接血凝試驗(yàn)、間接乳凝試驗(yàn)和間接炭凝試驗(yàn)。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法二沉淀反響(precipitation)1. 定義：可溶性抗原(如血清蛋白、多糖和細(xì)菌抽提液等)與其相應(yīng)抗體在適宜條件下出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)沉淀物的現(xiàn)象。 用于沉淀反響的抗原稱為沉淀原；用于沉淀反響的抗體稱沉淀素 沉淀反響包括環(huán)狀沉淀反響、絮狀沉淀反響以及由此派生出來(lái)的瓊脂擴(kuò)散免疫試驗(yàn)等。其中，前兩者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛應(yīng)用。2. 沉淀反響的種類與應(yīng)用： 1) 經(jīng)典方法： a. 環(huán)狀沉淀反響：在小試管

45、中參加抗血清 + 緩慢參加待測(cè)抗原 (數(shù) 分鐘)結(jié)果：陽(yáng)性 白色沉淀環(huán)； 陰性 無(wú) b.絮狀沉淀反響：將抗體與待測(cè)抗原混勻于試管或凹玻片結(jié)果： 陽(yáng)性 絮狀沉淀； 陰性 無(wú)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法2) 現(xiàn)代方法： a. 單免疫擴(kuò)散(single immunodiffusion)：將適當(dāng)濃度的抗體預(yù)先混在11.5% 瓊脂內(nèi)制成凝膠板，再以適當(dāng)距離在板上打孔，孔中參加待測(cè)抗原，當(dāng)抗原向周圍擴(kuò)散時(shí)，與板上的抗體相遇，并在最適宜的比例處形成白色沉淀環(huán)。因沉淀環(huán)直徑與抗原濃度成正比，因此，假設(shè)先用濃度的抗原制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，便可依沉淀環(huán)直徑測(cè)定待測(cè)抗原濃度。 結(jié)果：陽(yáng)性 白色沉淀環(huán)； 陰性 無(wú) b. 雙向免疫擴(kuò)散

46、(double immunodiffusion)：預(yù)先制備瓊脂板，根據(jù)需要在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別參加不同孔內(nèi)，使兩者相互擴(kuò)散，假設(shè)抗原抗體相對(duì)應(yīng)，那么二者在適宜比例處形成白色沉淀線。假設(shè)反響中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上的沉淀線。該方法可用來(lái)分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分，或測(cè)定抗原、抗體提取物的純度。缺點(diǎn)是所需時(shí)間較長(zhǎng)和靈敏度不高。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法c. 對(duì)流免疫電泳(Counter immunoelectrophoresis, CIE)：為在雙向瓊脂擴(kuò)散的根底上進(jìn)行電泳的方法。將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)，在負(fù)極端孔內(nèi)加抗原，正極端孔內(nèi)加抗體，然后通電?？乖?/p>

47、在pH8.6的緩沖液中帶負(fù)電荷，故向正極移動(dòng)；抗體為大分子球蛋白，移動(dòng)慢，并受瓊脂電滲影響由正極向負(fù)極移動(dòng)，在兩者相遇的適宜比例處出現(xiàn)白色沉淀線。因該法使抗原抗體相向而行，提高了敏感性，缺點(diǎn)是多組抗原抗體存在時(shí)沉淀線易重疊在一起，缺乏分辨力。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法三補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)1. 定義：有補(bǔ)體參與，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作指示系統(tǒng)的抗原抗體反響2. 組成：有2個(gè)系統(tǒng)共5種成分 1) 檢測(cè)系統(tǒng)：包括抗原(或抗體)和待測(cè)抗體(或抗原) 2) 指示系統(tǒng)：包括綿羊紅細(xì)胞和溶血素(綿羊紅細(xì)胞的特異性抗體) 3) 補(bǔ)體：取自豚鼠的新鮮血清3. 補(bǔ)體結(jié)合反響的根本原理 1) 補(bǔ)體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合；

48、 2) 指示系統(tǒng)遇補(bǔ)體后就出現(xiàn)明顯的溶血反響免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法4. 操作過(guò)程和結(jié)果1) 陽(yáng)性反響： + 補(bǔ)體 抗原(體)+待測(cè)抗體(原) 抗原抗體復(fù)合物 抗原抗體和補(bǔ)體復(fù)合物 + 指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物) 結(jié)果：因此時(shí)無(wú)游離的補(bǔ)體與指示系統(tǒng)結(jié)合不發(fā)生溶血2) 陰性反響： + 補(bǔ)體抗原(體)+待測(cè)抗體(原) 抗原+抗體 抗原+抗體+補(bǔ)體(游離) + 指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物) 發(fā)生溶血 綿羊紅細(xì)胞、溶血素及補(bǔ)體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法四 中和反響定義：特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原的多種生物學(xué)活性如：毒性、酶活性和病毒感染性等的反響。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用四、

49、現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù)immunolabelling technique 定義：將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)記，以提高抗原抗體反響以及抗原或抗體檢測(cè)靈敏度的一類新技術(shù)。免疫標(biāo)記技術(shù)敏感性高、特異性強(qiáng)、應(yīng)用范圍廣 (抗原或抗體定量、定性、定位)一免疫熒光技術(shù)immunofluorecence technique1. 定義：用熒光物標(biāo)記抗體來(lái)檢測(cè)細(xì)胞或組織中相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)。2. 熒光物種類：異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等3. 種類：包括直接法、間接法和補(bǔ)體法免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法例：直接法：將待測(cè)標(biāo)本固定于玻片外表，滴加熒光抗體

50、后再以緩沖液沖洗，枯燥后于熒光顯微鏡下觀察。 (1) 過(guò)程： +待測(cè)抗原 熒光素+抗體 熒光抗體 (一段時(shí)間后沖洗) 熒光鏡檢測(cè)結(jié)果： (2) 結(jié)果：陽(yáng)性 可見(jiàn)帶熒光的抗原抗體復(fù)合物； 陰性 無(wú)熒光 (因?yàn)閹晒獾目贵w不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉) (3) 用途：用以檢測(cè)病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和沉積于組織中的免疫復(fù)合物等。 (4) 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、特異性高；敏感性低、同時(shí)檢測(cè)多種抗原時(shí)較復(fù)雜。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法(二)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) or 酶免疫測(cè)定1. 定義：用酶標(biāo)記抗體或抗原來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的方法.應(yīng)用范圍極廣。2. 顯示方法：用酶的特殊底物來(lái)處理反響

51、后的標(biāo)本，通過(guò)酶催化底物的顯色反響來(lái)測(cè)定抗原或抗體的存在。以酶標(biāo)依作定量或定性分析。3. 標(biāo)記酶：辣根過(guò)氧化物酶HRP和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。4. 底物：鄰苯二胺和對(duì)硝基苯磷酸酯。5. 特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)，既可定性又可定量。6. 常用方法：目前應(yīng)用最多的為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)enzyme linked immusorbent assay, ELISA) ：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體外表的特性，使抗原-抗體反響在固相載體外表進(jìn)行的一種免疫酶技術(shù)。它目前包括直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競(jìng)爭(zhēng)法、抑制性測(cè)定法和橋聯(lián)法等多種。免疫應(yīng)用：

52、免疫學(xué)方法例1. 直接法：用于檢測(cè)抗原或抗體特別是總抗體濃度a. 用于檢測(cè)抗原時(shí)：以不同稀釋毒的待測(cè)樣品(Ag)包被酶標(biāo)板反響板，孵育后洗滌封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌參加酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌參加底物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。b.用于檢測(cè)抗體待測(cè)樣品中的總抗體時(shí)：以不同稀釋毒的待測(cè)樣品(Ab)包被酶標(biāo)板反響板，孵育后洗滌封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌參加酶標(biāo)抗抗體，孵育后洗滌參加底物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。 免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法例2. 雙抗體夾心法：主要用于測(cè)定大分子抗原過(guò)程：以純化的特異性抗體或含抗體的血清包被酶標(biāo)反響板，孵育后洗滌封閉液封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌參加待測(cè)樣品，孵育后洗滌參加酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌參加酶底

53、物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。 加待測(cè)抗原 加酶標(biāo)抗體 抗體吸附 抗原抗體復(fù)合物 酶聯(lián)抗體抗原抗體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法三放射免疫測(cè)定技術(shù) (Radioimmunoassay, RIA) 1. 定義：用放射性同位素標(biāo)記來(lái)檢測(cè)抗原抗體反響的高靈敏度的技術(shù)。2. 原理與方法：其根本原理為：待測(cè)抗原和標(biāo)記抗原對(duì)有限量抗體存在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合： Ag* + Ab Ag*-Ab；Ag + Ab Ag-Ab (1) 抗原用同位素(如131I、3H等) 標(biāo)記后仍能與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合； (2) 將兩類抗原與抗體混合后，兩類抗原均能與抗體結(jié)合，當(dāng)Ag*和Ab數(shù)量恒定，且Ag*與Ag之和大于Ab上結(jié)合點(diǎn)數(shù)目時(shí)， Ag*與

54、Ag 存在競(jìng)爭(zhēng)抑制：Ag數(shù)量增加，Ab-Ab生成量增加， Ag*-Ab數(shù)量就減少，游離的Ag*就增多。 (3) 用層析等方法將Ag*-Ab和Ag-Ab復(fù)合物(B)與游離Ag*和Ag (F)別離，測(cè)定B和F的放射活性。計(jì)算B/F值，繪制B/F和Ag量的關(guān)系曲線圖。 (4) 預(yù)先用一系列濃度的未標(biāo)記抗原和一定量的標(biāo)記抗原及抗體混合，以相同方法繪制B/F和Ag量的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線圖。 (5) 試驗(yàn)時(shí)，在同樣條件下，根據(jù)待測(cè)Ag的放射性結(jié)合率，依標(biāo)準(zhǔn)曲線查出Ag量。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法四熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) A. 熒光免疫技術(shù)1. 定義：用熒光素如異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅

55、丹明標(biāo)記來(lái)檢測(cè)抗原抗體反響的免疫分析技術(shù)。2. 種類：包括熒光免疫組織化學(xué)(如熒光抗體)技術(shù)和熒光免疫測(cè)定。B. 發(fā)光免疫分析定義：利用物質(zhì)的發(fā)光特征(如輻射光波長(zhǎng)、發(fā)光的光子數(shù))與產(chǎn)生輻射的物質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)常數(shù)、構(gòu)型、數(shù)量等密切相關(guān)，通過(guò)受激分子發(fā)射的光譜，發(fā)光衰減常數(shù)、發(fā)光方向等來(lái)判斷該分子的屬性；通過(guò)發(fā)光強(qiáng)度來(lái)判斷物質(zhì)的量的免疫分析技術(shù)。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法五免疫電鏡技術(shù)1. 定義：在保持抗體免疫性的前提下，用高電子密度的標(biāo)記物如鐵蛋白、金等，或用經(jīng)細(xì)胞化學(xué)方法處理使電子密度增高的標(biāo)記物如辣根過(guò)氧化物酶等酶類標(biāo)記抗體后，將標(biāo)記抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡觀察的技術(shù)。又稱電子顯微鏡免

56、疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。 2. 種類： (1) 非包埋法免疫染色：該法是以超薄冷凍切片免疫染色。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原保護(hù)較好，且有利于免疫試劑在組織中的滲透；但在技術(shù)上困難較多，需配制專用設(shè)備。 (2) 包埋前免疫染色：組織固定 厚切片免疫染色 包埋 超薄切片 投射電鏡觀察。 (3) 包埋后免疫染色：組織固定 包埋超薄切片免疫染色 EM觀察。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法第五節(jié) 免疫學(xué)原理在魚蝦病害防治中的應(yīng)用一、用于疾病的診斷 免疫診斷方法有二類1.用抗原診斷病原：用抗原與從患病動(dòng)物中提取的抗體進(jìn)行血清學(xué)反響，以確定病原種類。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。2.用抗體診斷病原

57、：將抗體與從病體中別離的病原進(jìn)行血清學(xué)反響，以確定病原的種類，該法適于所有被診斷動(dòng)物。二、用于疾病的治療 利用被動(dòng)免疫，即給患病動(dòng)物接種抗體進(jìn)行應(yīng)急治療。過(guò)程：先將抗原疫苗注入同種或其他種動(dòng)物機(jī)體，1-4周后從接種動(dòng)物的血液等部位提取抗體或制備卵黃抗體，并將提取的抗體接種到患病動(dòng)物中進(jìn)行疾病治療。三、用于疾病的預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物免疫最重要的應(yīng)用方向?yàn)檠兄埔呙邕M(jìn)行疾病的預(yù)防在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中，由于只有魚類、兩棲類和爬行類等脊椎動(dòng)物 才能在接種抗原后產(chǎn)生抗體，目前因此也認(rèn)為只有這些動(dòng)物才能用免疫學(xué)方法進(jìn)行疾病的預(yù)防。免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用一魚用疫苗的種類 A. 根據(jù)疫苗的獲得方法來(lái)分： 1. 死疫苗(滅活

58、疫苗)：熱滅活、化學(xué)滅活、紫外線滅活、超聲滅活等 優(yōu)點(diǎn)：平安性好，制造簡(jiǎn)單； 缺點(diǎn)：免疫劑量大，免疫持久性差。 2. 活疫苗：包括弱毒疫苗和異種疫苗 優(yōu)點(diǎn)：弱毒疫苗 免疫原性好，免疫劑量少，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng) 異種疫苗 平安性好，免疫時(shí)間長(zhǎng)。 缺點(diǎn)：弱毒疫苗 平安性差 異種疫苗 獲得比較困難 3. 化學(xué)疫苗：以化學(xué)方法提取病菌有效成分(如LPS)制成 優(yōu)點(diǎn)：免疫劑量小，免疫原性強(qiáng)，作用穩(wěn)定； 缺點(diǎn)：制造較復(fù)雜，本錢稍高。免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用 4. 亞單位疫苗：病原微生物中能使機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)力的成分只占病原體小局部，將這些成分別離出來(lái)制成的疫苗為亞單位疫苗。 優(yōu)點(diǎn)：可除去有害成分，減少異常反響，提高免疫效果； 缺點(diǎn)：制造過(guò)程復(fù)雜、本錢高。5. 基因工程疫苗：將病原的主要免疫原性蛋白的密碼基因DNA 轉(zhuǎn)移、重組后獲得 優(yōu)點(diǎn)：易于規(guī)模生產(chǎn)，本錢低； 缺點(diǎn)：研究周期長(zhǎng)，免疫原成分單一，產(chǎn)生抗體量小。 6. 合成疫苗：將具有保護(hù)性免疫