中藥抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究概況

1、中藥抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究概況 肝纖維化是慢性肝損傷進(jìn)展為肝硬化的一個(gè)重要階段，主要特征是細(xì)胞外基質(zhì)在肝內(nèi)過(guò)度沉積。目前普遍認(rèn)為，在這個(gè)階段，肝臟的病變是可逆的，而肝硬化、原發(fā)性肝癌則不可逆轉(zhuǎn)，因此，如何有效地防治肝纖維化，阻斷其進(jìn)展，已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)中藥治療肝纖維化在臨床研究和實(shí)驗(yàn)研究方面均取得了令人矚目的進(jìn)展，顯示出了特有的優(yōu)勢(shì)。 1、單味中藥及單體有效成分 氧化苦參堿 ：又名苦參素 ，是從中藥苦豆子或苦參根中提取的一種生物堿，具有抗炎、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等作用。宋健等以NIH3T3成纖維細(xì)胞為靶細(xì)胞，用噻唑藍(lán)（MTT）法及Northern雜交檢測(cè)苦參素對(duì)NIH3T3成纖維細(xì)胞

2、増殖及型原膠原mRAN的表達(dá)的影響。結(jié)果表明，苦參素能明顯抑制成纖維細(xì)胞增殖及型原膠原mRAN的表達(dá),并呈劑量依賴性。并采用CCI4制備肝纖維化模型，同時(shí)設(shè)立苦參素預(yù)防組及治療組，發(fā)現(xiàn)苦參素可顯著降低肝纖維化大鼠血清型前膠原（PC ）、層粘連蛋白（LN）及透明質(zhì)酸（HA）水平，并能明顯改善肝臟功能，血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血清白蛋白（ALB）、血清總膽紅素（TB）等各項(xiàng)指標(biāo)均改善，與模型組比較差異具有顯著性（P0.01)。組織學(xué)檢查顯示，苦參素能降低肝纖維化程度，具有明顯的防治纖維化作用。 楊文卓等參照J(rèn)onker的方法復(fù)制了大鼠半乳糖胺誘導(dǎo)肝纖維化模型，設(shè)立苦參堿預(yù)防觀察組及治療觀察組，

3、發(fā)現(xiàn)苦參堿可明顯降低肝粉的羥脯氨酸含量，改善肝功能，組織學(xué)觀察到預(yù)防用藥組肝細(xì)胞變性輕，匯管區(qū)纖維間隔纖細(xì)，型、型膠原的沉積減少，治療組病理改變也 較自然恢復(fù)組輕，得出結(jié)論：苦參堿對(duì)半乳糖胺誘導(dǎo)的肝纖維化具有明顯的預(yù)防及治療作用。王俊學(xué)等發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可阻斷撤除苯巴比妥鈉（PB）誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞的凋亡。據(jù)以上推測(cè)，氧化苦參堿可能通過(guò)以下環(huán)節(jié)達(dá)到抗纖維化作用：（1）抑制炎癥的發(fā)生；（2）抑制肝星狀細(xì)胞激活及成纖維細(xì)胞增殖。 川芎嗪：別名四甲基吡嗪，在傘形科植物川芎根莖及姜科植物溫莪術(shù)等植物中存在，為一種提純的生物堿。它具有改善微循環(huán)，増加冠狀動(dòng)脈血流量的作用。王紅等應(yīng)用50%CCI4油劑腹腔注射

4、6周誘導(dǎo)出大鼠肝纖維化模型的同時(shí)，予川芎嗪溶液20mg/kg腹腔注射，每日1次，每周6次，共6周，結(jié)果川芎嗪治療組的動(dòng)物血清ALT水平，HA、PC及肝組織中丙二醛（MDA）含量均較對(duì)照組明顯降低（P0.01），而肝組織超氧化物歧化酶（SOD）的活性則明顯增加（P0.05），同時(shí)病理組織學(xué)檢查可見(jiàn)肝細(xì)胞變性壞死及膠原纖維增生程度均顯著減輕，免疫組織化學(xué)染色示肝組織星狀細(xì)胞數(shù)量明顯減少，表明川芎嗪具有保護(hù)肝細(xì)胞、抗脂質(zhì)過(guò)氧化及抗纖維化的作用。對(duì)于體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，川芎嗪能使成纖維細(xì)胞發(fā)生顯著的形態(tài)改變，并能依制細(xì)胞的核分裂和増殖。 丹參及丹酚酸B：是近年來(lái)研究較多的抗肝維化藥物。河北醫(yī)科大學(xué)肝

5、病研究所研究了丹參對(duì)肝纖維化大鼠肝組織勻漿和離體線粒體的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用，結(jié)果表明，丹參可有效地抑制肝纖維化大鼠抗脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA地產(chǎn)生，并增強(qiáng)SOD的活性，且兩者均呈劑量及時(shí)間依賴性。采用MTT法測(cè)定丹參素對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖抑制作用并檢測(cè)細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)丹參素作用后肝星狀細(xì)胞的生長(zhǎng)受到明顯抑制，且抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果表明，隨著丹參濃度的增加，凋亡的星狀細(xì)胞明顯增多。 鎂一丹酚酸B是上世紀(jì)80年代后期從丹參中分離出來(lái)的一種水溶性成分，為含兒茶酚結(jié)構(gòu)的化合物?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，丹酚酸B能抑制體外傳代培養(yǎng)的貯脂細(xì)胞的增殖，減少其膠原合成與分泌，從細(xì)胞水平證實(shí)了丹酚酸B具

6、有抗纖維化的作用和部分機(jī)理。胡義楊等采用CCI4法及DMN法制備兩種大鼠肝纖維化模型，予丹參提取物（含丹酚酸B75%）治療，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B可顯著提高ALB含量并降低肝組織MDA含量及羥脯氨酸（Hyp）含量，病理學(xué)染色標(biāo)本及免疫組化結(jié)果表明，丹酚酸B治療組減輕了肝臟的炎癥活動(dòng)度，降低了肝纖維化程度，并推測(cè)其抗纖維化的作用機(jī)制與抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)。 ?；撬幔菏菑闹兴幣｜S中提取的有效成分，具有多種細(xì)胞保護(hù)作用。李寶剛采用牛血清白蛋白靜脈注射復(fù)制大鼠肝纖維化模型，并預(yù)防性使用?；撬幔Y(jié)果?；撬峤M動(dòng)物的肝Hyp含量和肌成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯低于模型組，肝切片中膠原沉積明顯減輕。陳岳祥對(duì)CCI4誘導(dǎo)的大鼠實(shí)驗(yàn)

7、性肝纖維化的研究表明，?；撬崮苊黠@降低肝Hyp和、型前膠原mRNA含量，降低HA和LN水平，改善肝功能和肝組織學(xué)的病理變化。其它：甘草酸可降低由CCI4聯(lián)合乙醇所致的不同階段的肝纖維化大鼠星狀細(xì)胞、型前膠原mRNA表達(dá)，減少肝臟、型膠原沉積，尤以早期、中期明顯。體外試驗(yàn)中，已證實(shí)燈盞細(xì)辛黃酮及木樨草素具有抗纖維化作用。 2、活血化淤中藥復(fù)方 活血化瘀中藥復(fù)方能改善血液微循環(huán)及血管通透性，保護(hù)肝細(xì)胞，促進(jìn)炎癥病灶的消退及增生性病變的軟化和吸收，改善機(jī)體免疫功能。 復(fù)方861合劑：包括丹參、黃芪、陳皮、香附、雞血藤在內(nèi)共10味中藥。給予免疫損傷性肝纖維化大鼠復(fù)方861灌胃3個(gè)月，病理學(xué)觀察結(jié)果表明

8、，861治療可使纖維化肝臟的纖維吸收消散，紊亂的肝血竇等血管結(jié)構(gòu)得到改建恢復(fù)，肝纖維化得到阻斷和逆轉(zhuǎn)。作用機(jī)理研究證實(shí)，復(fù)方861合劑除抑制膠原合成外，還可通過(guò)提高膠原酶活性、降低基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制因子的表達(dá)來(lái)減少基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子對(duì)金屬蛋白酶的抑制，增加膠原的降解，從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。對(duì)于膽管阻塞性肝纖維化大鼠也得到同樣結(jié)果。體外試驗(yàn)研究表明，復(fù)方861可能通過(guò)減少肝星狀細(xì)胞分泌內(nèi)皮素1，從而抑制內(nèi)皮素1對(duì)星狀細(xì)胞的收縮作用，肝竇阻力降低，對(duì)預(yù)防、治療肝纖維化及早期門靜脈高壓有重要意義。 益肝康：在益肝沖劑基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。研究發(fā)現(xiàn)，益肝康能改善肝臟炎癥損傷積分，減輕、型膠原的沉積，并對(duì)C

9、CI4和免疫損傷性兩種肝纖維化模型均有明顯的防治作用，表現(xiàn)在假小葉和纖維隔數(shù)目明顯減少，纖維間隔變薄。 漢丹肝樂(lè)：是以活血化淤，通絡(luò)養(yǎng)肝為基本治則的復(fù)方中藥制劑。臨床及實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)，可通過(guò)減輕肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化，保護(hù)肝細(xì)胞，抑制肝星狀細(xì)胞增殖及膠原合成，提高膠原酶活性，促進(jìn)膠原蛋白降解等多種作用來(lái)發(fā)揮抗肝纖維化效應(yīng)，同時(shí)還從分子水平上觀察到漢丹肝樂(lè)對(duì)肝纖維化大鼠的結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）mRNA和TGF1mRNA的增高表達(dá)具有抑制作用，一定程度上延緩了肝纖維化的形成和發(fā)展。 其他：柔肝沖劑（主要為黃芪、丹參、郁金）用于治療二甲基亞硝胺（DMN）誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠，并以秋水仙堿作為對(duì)照，結(jié)果

10、表明，柔肝沖劑能減輕肝臟炎癥反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞，同時(shí)可降低肝臟型、型、型前膠原mRNA的含量,減少膠原的生成,抑制肝纖維花的發(fā)展。王健等采用益氣活血方藥(桃仁黃芪等5味中藥)予免疫損傷性肝纖維化大鼠灌胃,結(jié)果顯示出較好的抗纖維化作用 ,其含藥大鼠血清具有抑制內(nèi)毒素脂多糖體外誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖的作用. 3、扶正化瘀類復(fù)方 王麗春等采用溫陽(yáng)法(主藥為干姜、桂枝、附子)治療CCI4中毒性肝纖維化大鼠，結(jié)果治療組的肝Hyp含量較對(duì)照組明顯下降，腸系膜微循環(huán)得到改善，病理學(xué)觀察到纖維增生程度降低。 劉成海等將扶正化瘀方（319方，由丹參、桃仁、蟲(chóng)草菌絲等組成）的全方及拆方予二甲基亞硝胺所致的肝纖維化大鼠

11、治療，發(fā)現(xiàn)全方及拆方均可降低肝組織羥脯氨酸含量及膠原沉積，全方較拆房綜合效果更好。體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，將319方拆方的含藥血清作用于培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)319方全方及其拆方均可抑制星狀細(xì)胞的活化、增殖，抑制其膠原、TGF1的基因表達(dá)與蛋白合成，一定程度上揭示了其作用機(jī)理。 4、疏肝健脾類復(fù)方 山東中醫(yī)藥大學(xué)從疏肝理氣、健脾化瘀入手研制了肝脾舒合劑，由柴胡、白術(shù)、丹參、大腹皮、紫河車、生黃芪、白芍、鱉甲、女貞子、漢防己等藥物組成，用豬血清腹腔注射復(fù)制出肝纖維化模型，予肝脾舒合劑灌胃，結(jié)果治療組的肝功能明顯優(yōu)于對(duì)照組（P0.05）,肝組織Hyp含量明顯低于對(duì)照組（P0.01）,病理改變顯示肝纖維

12、化程度明顯下降。 5、結(jié)語(yǔ) 中醫(yī)藥抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的研究，經(jīng)過(guò)20余年的努力探索，已發(fā)現(xiàn)了一些中草藥及其有效成分具有較好的抗肝纖維化作用，初步闡明了重要抗肝纖維化的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥防治肝纖維化展現(xiàn)了廣闊的前景，為今后更深層次的研究打下了基礎(chǔ)?？偟膩?lái)說(shuō)，中藥抗肝纖維化的作用機(jī)制主要有：（1）保護(hù)肝細(xì)胞，抑制炎癥損傷；（2）調(diào)節(jié)免疫功能；（3）抑制膠原合成，促進(jìn)膠原降解。 就目前的研究現(xiàn)狀而言，還存在以下一些問(wèn)題：（1）目前仍缺乏理想的肝纖維化模型，人類肝纖維化的病因與病毒復(fù)制、免疫調(diào)控、遺傳等因素相關(guān)，而目前采用的模型多位單一因素制造，模型的病理進(jìn)展變化與人類肝纖維化病理過(guò)程存在一定差異，而能

13、結(jié)合中醫(yī)病因病機(jī)理論造模的更少，對(duì)中醫(yī)治則、方劑藥物的研究有很大的局限，同時(shí)動(dòng)物自愈較人類明顯，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床應(yīng)用不僅吻合；（2）研究思路欠廣，從現(xiàn)有文獻(xiàn)看，主要集中在具有活血化瘀、補(bǔ)氣補(bǔ)陰等功效的方藥上，這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的；（3）在細(xì)胞和分子水平上進(jìn)行系統(tǒng)而深入研究的較少，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)欠科學(xué)，缺乏系統(tǒng)化研究，從而影響療效的判斷，導(dǎo)致其研究結(jié)果難以令人信服。針對(duì)以上問(wèn)題，在今后的工作中應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物模型的研究，開(kāi)展多因素造模，建立能真實(shí)客觀反映人類肝纖維化發(fā)病機(jī)理、并結(jié)合中醫(yī)理論探尋符合“證”本質(zhì)的動(dòng)物模型，拓展思路，努力從眾多的中草藥中有目的、有計(jì)劃地進(jìn)行篩選、發(fā)掘，對(duì)有苗頭的藥物進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)