分子生物學(xué)-生命科學(xué)與農(nóng)學(xué)學(xué)院復(fù)習(xí)題(共11頁)

1、 2014-2015第二(d r)學(xué)期分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料名詞解釋DNA重組(zhn z)技術(shù)：將不同(b tn)的DNA片段按照人們的設(shè)計(jì)定向連接起來，在特定細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá)，產(chǎn)生影響受體細(xì)胞的新的遺傳性狀?；颍菏窃?、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遺傳效應(yīng)的核苷酸序列，是遺傳的基本單位?；蚪M：細(xì)胞或生物中，一套完整單倍體遺傳物質(zhì)的總和（包括一種生物所需的全套基因及間隔序列）稱為基因組。 C值矛盾：是指真核生物中DNA含量的反?，F(xiàn)象。主要表現(xiàn)為： C值不隨生物的進(jìn)化程度和復(fù)雜性而增加； 關(guān)系密切的生物C值相差甚大； 高等真核生物具有比用于遺傳高得多的C值。重疊基因：同一段DNA

2、的編碼序列，由于閱讀框架的不同或終止早晚的不同，同時(shí)編碼兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽鏈的基因。斷裂基因：在真核生物基因組中，基因是不連續(xù)的，在基因的編碼區(qū)域內(nèi)部含有大量的不編碼序列，從而打斷了對應(yīng)于蛋白質(zhì)的氨基酸序列。這種不連續(xù)的基因又稱斷裂基因或割裂基因。轉(zhuǎn)座子：即可移動(dòng)的基因成分，是指能夠在一個(gè)DNA分子內(nèi)部或兩上DNA分子之間移動(dòng)的DNA片段。質(zhì)粒：是獨(dú)立于許多細(xì)菌及某些真核細(xì)胞染色體外共價(jià)閉合環(huán)狀的DNA分子，能獨(dú)立復(fù)制的最小遺傳單位。基因家族：是真核生物基因組中來源相同，結(jié)構(gòu)相似，功能相關(guān)的一組基因。物理圖譜：是以特異的DNA序列為標(biāo)志所展示的染色體圖。標(biāo)志之間的距離或圖距以物理距離如堿基對（

3、base pair；bp，Kb , Mb)表示。最精細(xì)的物理圖是核苷酸順序圖，最粗略的物理圖是染色體組型圖。遺傳圖：又稱連鎖圖，是通過計(jì)算連鎖的遺傳標(biāo)記之間的重組率來確定他們之間的相對距離，測定單位用cM (厘摩)表示。Holliday模型：即同源重組模型，有四個(gè)要點(diǎn)：兩個(gè)同源染色體DNA排列整齊；一個(gè)DNA的一條鏈裂斷并與另一個(gè)DNA對應(yīng)的鏈連接，形成的連接分子，稱為Holliday中間體；通過分支移動(dòng)產(chǎn)生異源雙鏈DNA；Holliday中間體切開并修復(fù)，形成兩個(gè)雙鏈重組體DNA。操縱子：原核生物在分子水平上調(diào)控基因表達(dá)的單位，由調(diào)節(jié)基因、啟動(dòng)子、操縱基因及其所控制的一組功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因

4、所組成。順式作用(zuyng)元件：存在于基因旁側(cè)序列中能影響基因表達(dá)的序列。順式作用元件包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)(yudo)元件等，它們的作用是參與基因表達(dá)的調(diào)控。順式作用元件本身不編碼任何蛋白質(zhì),僅僅提供一個(gè)(y )作用位點(diǎn)，要與反式作用因子相互作用而起作用。反式作用因子：是指能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。eg,RNA聚合酶 。阻遏蛋白：是負(fù)調(diào)控系統(tǒng)中由調(diào)節(jié)基因編碼的調(diào)節(jié)蛋白，它本身或與輔阻遏物一起結(jié)合與操縱基因，阻遏操縱子結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。啟動(dòng)子：RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。 啟動(dòng)子是基因的一個(gè)組成部分，控制基

5、因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子就像“開關(guān)”，決定基因的活動(dòng)。啟動(dòng)子本身并不控制基因活動(dòng)，而是通過與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合而控制基因活動(dòng)的。衰減子：原核生物的操縱子中可以明顯衰減乃至終止轉(zhuǎn)錄作用的一段核苷酸序列，位于操縱子的上游。核酸分子雜交：核酸分子雜交是指非同一分子來源但具有互補(bǔ)序列(或某一區(qū)段互補(bǔ))的兩條多核苷酸鏈，通過堿基配對形成穩(wěn)定的雙鏈分子的過程。外顯子：真核細(xì)胞基因DNA中的編碼序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA并進(jìn)而翻譯為蛋白質(zhì)。內(nèi)含子：真核細(xì)胞基因DNA中的間插序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成RNA，但隨即被剪除而不翻譯。假基因：基因組中因突變而失活的基因，無蛋白質(zhì)產(chǎn)物。一般是啟動(dòng)子出現(xiàn)問

6、題。管家基因：在生物體幾乎所有的細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因，往往編碼維持細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)與功能的蛋白質(zhì)?；驍U(kuò)增：基因擴(kuò)增是指某些基因的拷貝數(shù)專一性增大的現(xiàn)象，它使得細(xì)胞在短期內(nèi)產(chǎn)生大量的基因產(chǎn)物以滿足生長發(fā)育的需要，是基因活性調(diào)控的一種方式。 基因重排：將一個(gè)基因從遠(yuǎn)離啟動(dòng)子的地方移到距它很近的位點(diǎn)從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，這種方式被稱為基因重排。DNA甲基化： HYPERLINK /wiki/DNA%E7%94%B2%E5%9F%BA%E5%8C%96 DNA甲基化是指生物體在 HYPERLINK /wiki/DNA%E7%94%B2%E5%9F%BA%E8%BD%AC%E7%A7%BB%E9%85%B6 DN

7、A甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體,將 HYPERLINK /wiki/%E7%94%B2%E5%9F%BA 甲基轉(zhuǎn)移到特定的堿基上的過程。染色質(zhì)重塑:是由染色質(zhì)重塑復(fù)合物介導(dǎo)的一系列以染色質(zhì)上核小體變化為基本特征的生物學(xué)過程。增強(qiáng)子：指能使與它連鎖的基因(jyn)轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列(xli)沉默子：某些基因的含有負(fù)性調(diào)節(jié)元件，當(dāng)其結(jié)合特異蛋白因子時(shí)，對基因轉(zhuǎn)錄起阻遏(z )作用。絕緣子：一種負(fù)調(diào)控元件，參與基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控?？煽刂祈樖阶饔迷男袨椋艚^了激活或抑制效果沿染色質(zhì)的過度傳播。鋅指結(jié)構(gòu)：是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的一種結(jié)構(gòu)形式，包含數(shù)個(gè)相同的指

8、結(jié)構(gòu)，每個(gè)指結(jié)構(gòu)含有2等結(jié)構(gòu)形式，其中4個(gè)殘基（Cys2/ His2或者Cys2/ Cys2）與鋅離子形成配位鍵。鋅指結(jié)構(gòu)的指尖部分能夠嵌入DNA雙螺旋的大溝?？勺兗艚樱涸诟叩日婧松飩€(gè)體發(fā)育或細(xì)胞分化過程中可以有選擇性地越過某些外顯子或某個(gè)剪接點(diǎn)進(jìn)行變位剪接，產(chǎn)生出組織或發(fā)育階段特異性mRNA，稱為可變剪接。RNA編輯：是指改變RNA分子序列的一種轉(zhuǎn)錄后修飾現(xiàn)象，包括堿基的插入，缺失或核苷酸的轉(zhuǎn)換等現(xiàn)象。它導(dǎo)致了DNA所編碼的遺傳信息的改變。小干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)：是細(xì)胞內(nèi)一類雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)

9、在特定情況下通過一定酶切機(jī)制，轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂刑囟ㄩL度(2123個(gè)堿基)和特定序列的小片段RNA。類病毒：類病毒是一個(gè)裸露的閉合環(huán)狀RNA分子，它能感染寄主細(xì)胞并在其中進(jìn)行自我復(fù)制使寄主產(chǎn)生病癥。朊病毒：一種不含核酸的、無免疫性的、但具有感染性的小分子蛋白質(zhì);又稱蛋白侵染子.二、簡答題1. 證明生物的遺傳物質(zhì)是DNA的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)有哪些？其主要過程是怎樣的？1)肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 無毒的R型菌與被殺死的有毒的S型菌混合后轉(zhuǎn)化為有毒的S型活菌. 說明S菌體內(nèi)有一種轉(zhuǎn)化因子 2)體外轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 只有加入DNA，R型細(xì)菌才能轉(zhuǎn)化成S型細(xì)菌，并且DNA的純度越高，轉(zhuǎn)化效率越高。 3)噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhun do)實(shí)

10、驗(yàn) 第一步：把宿主細(xì)菌(xjn)培養(yǎng)在含有35S（或32P）培養(yǎng)基中，然后(rnhu)用T2噬菌體去感染，結(jié)果獲得的子代噬菌體被標(biāo)上35S或32P。第二步：標(biāo)記了的噬菌體去感染未標(biāo)記的細(xì)菌。第三步：強(qiáng)烈攪拌洗滌，以便使吸附在菌體外表的 T2 噬菌體蛋白質(zhì)外殼脫離細(xì)胞并均勻分布，再進(jìn)行離心沉淀，分別測定沉淀物和上清液中的同位素標(biāo)記。結(jié)果：幾乎全部 35S都在上清液中，而幾乎全部 32P和細(xì)菌一起出現(xiàn)在沉淀物中2. 玉米的AC-DS系統(tǒng)？答：即激活因子解離系統(tǒng)。包括：Ac：含有5個(gè)外顯子的單個(gè)基因，其產(chǎn)物是轉(zhuǎn)座酶。Ac的存在可以解除Ds對C的抑制作用，從而使色素基因C得以表達(dá)。 Ds：為Ac缺失之

11、后的序列。經(jīng)常變動(dòng)在染色體上的位置，當(dāng)插入到色素基因C的近旁或中間時(shí)，玉米籽粒不能形成色素。3.試說明乳糖操縱子在原核基因表達(dá)調(diào)控中的調(diào)控機(jī)制？答: 1)乳糖操縱子的組成:大腸桿菌乳糖操縱子含Z,Y,A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶,透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶,此外還有一個(gè)操縱序列O,一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I.2)阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié):沒有乳糖存在時(shí),I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處,乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài),不能合成分解乳糖的三種酶;有乳糖存在時(shí),乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu),不能結(jié)合于操縱序列,乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶.所以,乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控

12、.3)CAP的正性調(diào)節(jié):在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn),當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí),cAMP濃度升高,與CAP結(jié)合,使CAP發(fā)生變構(gòu),CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn),激活RNA聚合酶活性,促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄,對乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控,加速合成分解乳糖的三種酶.4)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié):乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制,互相協(xié)調(diào),互相制約.4. 載體是什么？其必須具備的條件？ 載體(Vector):將外源DNA或基因攜帶進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增或表達(dá)的工具。能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并且穩(wěn)定地保存

13、。 具有一至多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)，以便與外源基因連接。 具有某些標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選。 對受體細(xì)胞無害(w hi)。 5.原核(yun h)生物基因組的特點(diǎn)？為一條(y tio)環(huán)狀雙鏈DNA;只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn);具有操縱子結(jié)構(gòu);絕大部分為單拷貝;可表達(dá)基因約50%,大于真核生物小于病毒;基因一般是連續(xù)的,無內(nèi)含子;重復(fù)序列很少.藍(lán)-白篩選的原理？答:某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點(diǎn)的DNA序列.這些位點(diǎn)上如果沒有克隆外源性DNA片段,在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac-的大腸桿菌后,質(zhì)粒攜帶的半乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá),與大腸桿菌的半乳糖苷

14、酶基因互補(bǔ),產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶,加入人工底物X-gal和誘導(dǎo)劑IPTG后,出現(xiàn)藍(lán)色的菌落.如果在多克隆位點(diǎn)上插入外源DNA片段,將使lac Z基因滅活,不能生成半乳糖苷酶,結(jié)果菌落出現(xiàn)白色.由于這種顏色標(biāo)志,重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然.真核基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：答：真核基因組結(jié)構(gòu)龐大 單順反子基因不連續(xù)非編碼區(qū)較多 含有大量重復(fù)序列 DNA甲基化抑制基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)理答：1、DNA甲基化會(huì)導(dǎo)致某些區(qū)域DNA構(gòu)象改變，直接影響了轉(zhuǎn)錄因子于啟動(dòng)區(qū)DNA的結(jié)合效率的結(jié)合活性，不能啟始基因轉(zhuǎn)錄。DNA的甲基化不利于模板與RNA聚合酶的結(jié)合，降低了轉(zhuǎn)錄活性。3、甲基化的CpG 可以通過與甲基化CpG結(jié)

15、合蛋白因子的結(jié)合間接影響轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合。增強(qiáng)子的特點(diǎn)有哪些？答：增強(qiáng)效應(yīng)(xioyng)十分明顯 增強(qiáng)效應(yīng)與其位置和取向(q xin)無關(guān)大多為重復(fù)序列(xli)，一般長約50bp，適合與某些蛋白因子結(jié)合增強(qiáng)效應(yīng)有嚴(yán)密的組織和細(xì)胞特異性沒有基因?qū)Ｒ恍栽S多增強(qiáng)子還受外部信號的調(diào)控反式作用因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域有哪些類型？答：螺旋-轉(zhuǎn)折-螺旋鋅指結(jié)構(gòu) 堿性-亮氨酸拉鏈堿性-螺旋-環(huán)-螺旋可變剪接有些類型？類型：（一）順式間接 不同的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn) 不同的PolyA位點(diǎn) 可選的外顯子 相互排斥的外顯子 可變的外顯子5剪接位點(diǎn) 可變的外顯子3剪接位點(diǎn) 內(nèi)含子滯留 （二）反式剪接 miRNA的特點(diǎn)

16、：答：其長度一般為2025個(gè)堿基；在不同生物體中普遍存在；其序列在不同生物中具有一定的保守性；具有明顯的表達(dá)階段特異性和組織特異性；miRNA 基因以單拷貝、多拷貝或基因簇等多種形式存在于基因組中，大多位于基因間隔區(qū)。 根據(jù)病毒基因組分類，病毒有有哪些類型？答：雙鏈DNA病毒單鏈DNA病毒雙鏈RNA病毒單股正義RNA病毒單股反義RNA病毒反轉(zhuǎn)錄(zhun l)病毒簡述逆轉(zhuǎn)錄病毒(bngd)核酸復(fù)制的過程。答：分二個(gè)階段(jidun)：第一階段，病毒核時(shí)進(jìn)入胞漿后，以病毒RNA為模板，在依賴RNA的DNA多聚酶和RNA引物的作用下，合成負(fù)鏈DNA（即RNA：DNA），正鏈RNA被降解，進(jìn)而以負(fù)鏈

17、DNA為模板形成雙股DNA（即DNA：DNA），轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，整合成宿主DNA中，成為前病毒。第二階段，前病毒DNA轉(zhuǎn)錄出病毒mRNA，翻譯出病毒蛋白質(zhì)。同樣從前病毒DNA轉(zhuǎn)錄出病毒RNA，在胞漿內(nèi)裝配，以出芽方式釋放。被感染的細(xì)胞仍持續(xù)分裂將前病毒傳遞至子代細(xì)胞。簡述DNA分子克隆的步驟：答：基因的分離DNA的體外重組(切、接)重組DNA分子的轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增(轉(zhuǎn)、增)轉(zhuǎn)化子的篩選和鑒定(檢)外源基因的表達(dá)五、綜合分析題1. 簡述Sanger雙脫氧鏈終止法進(jìn)行DNA序列分析的基本原理，并將下列DNA測序膠片的結(jié)果（正向引物測序），從53寫出合成鏈的DNA序列。答案要點(diǎn)：Sanger雙脫氧鏈終止法的

18、最大特點(diǎn)是引入了雙脫氧核苷三磷酸（2,3-ddNTP）作為鏈終止劑。（1）2,3-ddNTP與普通的dNTP不同之處在于前者的脫氧核糖的3位又少了個(gè)羥基。它可以在DNA聚合酶的作用下和多核苷酸鏈的3羥基形成磷酸二酯鍵，但卻不能再與下一個(gè)核苷酸縮合，結(jié)果使得多核苷酸鏈的延伸終止。（2）如果在DNA的合成反應(yīng)中，除了加入4種正常的dNTP外，再加入一種少量的ddNTP，那么多核苷酸鏈的延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止展開競爭，所以反應(yīng)產(chǎn)物是一系列的長短不一的核苷酸鏈。在4組獨(dú)立的DNA合成反應(yīng)中，分別加入4種不同的ddNTP，結(jié)果將生成4組核苷酸鏈，它們將分別終止于每一個(gè)A，每一個(gè)G，每一個(gè)C

19、，每一個(gè)T的位置上。對這4組核苷酸鏈進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，就可讀出序列。 5- CTGACGCATACGGTTCATCGGTAGTCCTAGTGCATC -3 2. 在對E.coli調(diào)控色氨酸合成的弱化(ru hu)子研究中，研究者通過對前導(dǎo)序列1，2，3，4區(qū)域的序列分別進(jìn)行失活突變，可以分析這些區(qū)域在調(diào)控色氨酸合成中的作用。其中有一個(gè)突變株，表現(xiàn)為色氨酸合成缺陷型，即不管培養(yǎng)基中色氨酸濃度高或低，都不能正常轉(zhuǎn)錄色氨酸合成相關(guān)的酶。請根據(jù)色氨酸操縱子前導(dǎo)序列的特點(diǎn)，簡要分析其失活突變位點(diǎn)可能(knng)位于前導(dǎo)序列的哪些區(qū)域？ 答案要點(diǎn)(yodin)：1)色氨酸衰減子的作用機(jī)制 2區(qū)的配對

20、區(qū)域，由于其突變使得無論色氨酸濃度高或低，2區(qū)和3區(qū)的配對均不能形成，3區(qū)只能與4區(qū)配對形成終止子，無法轉(zhuǎn)錄色氨酸合成相關(guān)的基因。 1區(qū)的10，11位色氨酸密碼子突變?yōu)槠渌被崦艽a子，使得前導(dǎo)肽的合成與色氨酸的濃度沒有直接相關(guān)性，無論色氨酸濃度高均能正常通讀前導(dǎo)序列，核糖體沒有停頓，因此2區(qū)被核糖體占據(jù)，3區(qū)只只能與4區(qū)配對形成終止子，下游基因無法轉(zhuǎn)錄。 3. 人的基因組大概有2.53萬個(gè)基因,但它們構(gòu)成的生物體蛋白質(zhì)種類卻有20多萬種。人的基因組是怎樣以有限的基因形成如此多的蛋白質(zhì)的?1)基因的選擇性剪接是造成如此多的蛋白的原因之一：由于選擇性剪接,同一個(gè)基因能得到多種類型的蛋白質(zhì)；2)基

21、因的重排是導(dǎo)致形成蛋白數(shù)量多于基因數(shù)量的又一原因,最常見的是免疫球蛋白基因的重排,重排結(jié)果是大量的免疫球蛋白分子的產(chǎn)生；3)轉(zhuǎn)錄后加工的多樣性可以導(dǎo)致得到的蛋白質(zhì)的數(shù)量遠(yuǎn)多于基因數(shù)量,可以利用5端轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和剪接位點(diǎn)產(chǎn)生不同的蛋白質(zhì),還可以利用加多個(gè)poly A 位點(diǎn)和不同的剪接方式產(chǎn)生不同的蛋白.此外，mRNA前體不需要剪接，但存在多個(gè)轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)或Poly(A)添加位點(diǎn)。4. 有一研究生想使他所感興趣的一大腸桿菌的基因嚴(yán)格(yng)受碳源控制,在葡萄糖供應(yīng)(gngyng)時(shí),該基因(jyn)不表達(dá),當(dāng)供應(yīng)乳糖時(shí),該基因大量表達(dá)?你如何幫助他實(shí)現(xiàn)這種想法?依據(jù)是什么?1) 用乳糖操縱子中的啟動(dòng)

22、子(含操縱基因)取代其本身的啟動(dòng)子。方法：通過PCR擴(kuò)增大腸桿菌基因的啟動(dòng)子及其附近序列，克隆到T載體上，在擴(kuò)增序列內(nèi)部插入lacP和lacO,在lacP上游插入氨芐青霉素抗性基因，將重組T載體用內(nèi)切酶切開后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上篩選陽性克隆，用PCR或Southern blotting技術(shù)進(jìn)一步鑒定陽性克隆。2) 依據(jù)的是乳糖操縱子模型。試說明真核細(xì)胞與原核細(xì)胞在基因轉(zhuǎn)錄，翻譯及DNA的空間結(jié)構(gòu)方面存在的主要差異，表現(xiàn)在哪些方面？答：在真核細(xì)胞中，一條成熟的mRNA鏈只能翻譯出一條多肽鏈，很少存在原核生物中常見的多基因操縱子形式。真核細(xì)胞DNA與組蛋白和大量非組蛋白相結(jié)合，

23、只有一小部分DNA是裸露的。高等真核細(xì)胞DNA中很大部分是不轉(zhuǎn)錄的，大部分真核細(xì)胞的基因中間還存在不被翻譯的內(nèi)含子。真核生物能夠有序地根據(jù)生長發(fā)育階段的需要進(jìn)行DNA片段重排，還能在需要時(shí)增加細(xì)胞內(nèi)某些基因的拷貝數(shù)。在真核生物中，基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)區(qū)相對較大，它們可能遠(yuǎn)離啟動(dòng)子達(dá)幾百個(gè)甚至上千個(gè)堿基對。在原核生物中，轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)區(qū)都很小，大都位于啟動(dòng)子上游不遠(yuǎn)處。真核生物的RNA在細(xì)胞核中合成，只有經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過核膜，到達(dá)細(xì)胞質(zhì)后，才能被翻譯成蛋白質(zhì)，原核生物中不存在這樣嚴(yán)格的空間間隔。許多真核生物的基因只有經(jīng)過復(fù)雜的成熟和剪接過程，才能順利地翻譯成蛋白質(zhì)。試論述真核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)及不同層次？答

24、：真核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)：1、有三種RNA聚合酶，分別起始著不同基因的轉(zhuǎn)錄；2、個(gè)體發(fā)育復(fù)雜，具有調(diào)控基因特異性表達(dá)的機(jī)制；3、多層次調(diào)控真核基因表達(dá)； 4、真核生物活性染色體結(jié)構(gòu)變化對基因表達(dá)具有調(diào)控作用：對核酸酶敏感性、DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)變化 、DNA堿基修飾變化 、組蛋白變化；5、正調(diào)節(jié)占主導(dǎo)，且一個(gè)真核基因通常有多個(gè)調(diào)控序列，需要多個(gè)激活物。6、轉(zhuǎn)錄與翻譯間隔進(jìn)行 ；7、具有轉(zhuǎn)錄后修飾、加工 ；表達(dá)調(diào)控的不同層次：DNA和染色體水平(shupng)；轉(zhuǎn)錄(zhun l)水平轉(zhuǎn)錄(zhun l)后加工水平RNA轉(zhuǎn)運(yùn)水平翻譯水平翻譯后加工及蛋白質(zhì)活性控制mRNA選擇性降解的調(diào)控試論述病毒基

25、因組的特點(diǎn)？答：病毒基因組所含核酸類型不同，且一種病毒只含一種核酸成分不同病毒基因組大小相差較大，病毒基因組的編碼序列大病毒基因組可以是連續(xù)的也可以是不連續(xù)的，基因可以是連續(xù)的也可以是間斷的病毒基因組一般都是單倍體和單拷貝基因重疊病毒基因組含有不規(guī)則結(jié)構(gòu)基因幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)無間隔結(jié)構(gòu)基因本身沒有翻譯起始序列mRNA沒有5端的帽結(jié)構(gòu)試論述PCR反應(yīng)的原理、PCR反應(yīng)體系和引物設(shè)計(jì)原則。答：PCR反應(yīng)的原理：以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5末端和3末端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復(fù)這一過程，即可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系：Buffer、Taq酶、正向引物、反向引物、模板DNA、dNTP、水引物設(shè)計(jì)原則：長度1530 b引物