參照CLSI EP方案評價(jià)直接膽紅素試劑分析性能(共6頁)

1、PAGE PAGE 6參照(cnzho)CLSI EP方案(fng n)評價(jià)直接(zhji)膽紅素試劑分析性能摘要目的 通過應(yīng)用CLSI EP方案分別對國產(chǎn)和進(jìn)口直接膽紅素（DBil）試劑分析性能進(jìn)行評價(jià)，了解國產(chǎn)直接膽紅素試劑分析性能能否滿足臨床需要。方法 在同一臺全自動生化分析儀上，同時(shí)測定試劑準(zhǔn)確度、精密度、最低檢測限、線性范圍、干擾試驗(yàn)、方法比對實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性觀察等7項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)。結(jié)果 兩種試劑準(zhǔn)確度測定，其相對偏差10%；批間變異系數(shù)小于4.0%；國產(chǎn)DBil試劑線性范圍0.2-595.0mol/L，進(jìn)口試劑線性范圍-0.4-595.7mol/L；國產(chǎn)DBil試劑的最低檢測限為0.4mo

2、l/L，進(jìn)口試劑的最低檢測限為0.9mol/L；方法比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果Y0.997X+5.2467，R20.9996（濃度范圍0.2-595.0mol/L）；抗干擾能力無明顯差異；試劑穩(wěn)定性相近。結(jié)論：國產(chǎn)直接膽紅素試劑與進(jìn)口試劑的分析性能無顯著性差異，能滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的需要。關(guān)鍵詞CLSI EP方案；釩酸鹽氧化法； 直接膽紅素；分析性能評價(jià)Evaluation of the analytical performance of Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI EP document Xie Wen Hui.( PingChang District

3、 Chinese Medicine Hospital, Ba Zhong 636400,China)【Abstract】 Objective Through evaluate the analytical performance of domestic Direct Bilirubin (DBil) reagents and imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents with CLSI document, understanding performance differences of domestic and imported WAKO D

4、irect Bilirubin. Methods On the same automatic biochemical analyzer, determinate the reagents analytical performance at the same time, such as accuracy, precision, minimum detection limit, linear range, anti-interference ability, stability, method comparison. Results Determinate accurate of the two

5、reagents, the relative deviation 10%; the within run coefficient of variation 4.0%; The linear range of self-made DBil reagent is 0.2-595.0mol/L, and the linear range of imported reagent is-0.4-595.7mol/L) ; The minimum detection limit of domestic DBil reagents was 0.4mol/L, of the import reagents w

6、as 0.9mol/L; the result of the method comparation was Y0.997X+5.2467，R20.9996; there was no significant difference with anti-interference ability; the two reagents had similar stability. Conclusions There was no significant difference of analytical performance with self-made Direct Bilirubin (DBil)

7、reagents and imported WAKO Direct Bilirubin (DBil) reagents.【key words】CLSI document；Vanadate Oxidizing Method ; Direct Bilirubin (DBil); performance evaluation 膽紅素是紅細(xì)胞正?；蚍钦＝到?jin ji)后在內(nèi)皮系統(tǒng)形成的有機(jī)復(fù)合物，在臨床(ln chun)實(shí)驗(yàn)室測定直接膽紅素（DBil）主要(zhyo)用于肝細(xì)胞損害、膽道阻塞、Dubin-Johnson綜合征和Rotor綜合征等疾病的輔助診斷。直接膽紅素與總膽紅素結(jié)合用于鑒別黃疸

8、類型。所謂直接膽紅素，即結(jié)合膽紅素，能溶于水，能直接與重氮試劑起反應(yīng)產(chǎn)生重氮色素。DBil測定方法主要有重氮測定法和釩酸氧化法，重氮測定方法主要應(yīng)用是改良J-G法。1993年日本學(xué)者Tokuda發(fā)表了血清膽紅素的釩酸鹽氧化測定法，與傳統(tǒng)方法重氮測定法具有良好的相關(guān)性。此前國內(nèi)生化試劑廠家，也對釩酸氧化法直接膽紅素測定試劑進(jìn)行研究開發(fā)，但與進(jìn)口試劑相比較，在試劑性能指標(biāo)上仍存在較大差異。近來，四川新成生物經(jīng)過長達(dá)7年的自主創(chuàng)新，推出了釩酸氧化法直接膽紅素測定試劑盒。我們依照臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制

9、訂的一套評價(jià)方案(Evaluation Protocols)，包括EP5-A(臨床化學(xué)設(shè)備精密度性能的評價(jià))，EP6-P （定量分析方法線性的評價(jià)），EP9-A（用患者樣本的方法比較和偏差的估計(jì)），EP10-A（定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評價(jià)），現(xiàn)將國產(chǎn)與進(jìn)口試劑在分析性能方面進(jìn)行評價(jià)。1 材料與方法 1.1 材料1.1.1國產(chǎn)試劑及配套校準(zhǔn)品四川新成生物科技有限責(zé)任公司直接膽紅素測定試劑（規(guī)格R1 60ml3, R2 45ml1；批號是0609091；效期是一年）。1.1.2 進(jìn)口試劑及配套校準(zhǔn)品日本和光（WAKO）直接膽紅素測定試劑（批號AM672 AJ192 效期2010年7月）。1.1.3

10、 儀器 奧林巴斯AU400全自動生化分析儀1.1.4質(zhì)控品：寶靈曼質(zhì)控品(批號PU181949、PU181528)；朗道（RANDOX）質(zhì)控品（批號578UN）。 1.2 方法1.2.1 測定試劑的試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置 ：按照試劑說明書的要求設(shè)置。1.2.2 測定(cdng)方案 有關(guān)精密度、準(zhǔn)確度、最低檢測(jin c)限、線性范圍、方法比對試驗(yàn)、干擾實(shí)驗(yàn)等評價(jià)指標(biāo)參照相關(guān)EP文件及國內(nèi)外慣用方法進(jìn)行。 精密度按EP-5A文件(wnjin)評價(jià)1：取高值和低值的病人混合血清各1份，分批測定DBil 20次，計(jì)算批間精密度。取上述高、低值混合血清在暗室中各自分裝成20份，并于-20避光冰凍保存。每天取

11、高、低值混合血清各1份，待其在避光狀態(tài)下完全溶解后測定DBil，計(jì)算批間精密度。線性評價(jià)按EP-6A文件評價(jià)2：取病人黃疸血清和健康人正常血清標(biāo)本各1份，分別編為號、 號。將 號高值和號低值分別按3：1、2：2、1：3的比例混合作為 、 、 號。將5個(gè)不同濃度的標(biāo)本隨機(jī)排列，測定每份標(biāo)本中的DBil，重復(fù)測定4次，取其均值為測定值，與設(shè)定值做線性對比。干擾實(shí)驗(yàn)按照CLSI EP-7A文件評價(jià)3：分別對高、低值混合血清加入干擾物做該實(shí)驗(yàn)。方法比對試驗(yàn)按CLSI EP-9A 文件評價(jià)4：對40例以上臨床樣品分別用兩種試劑測定，將結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算其相關(guān)系數(shù)和回歸方程。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)

12、據(jù)統(tǒng)計(jì)用Excel統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。2 結(jié)果2.1準(zhǔn)確度：分別用國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑測定寶靈曼和朗道質(zhì)控品，通過對測定結(jié)果比較（參見表1），相對偏差滿足臨床的要求（誤差10%）。表1：準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果寶靈曼PU181528 寶靈曼PU181949 朗道578UE均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%) 均值(mol/L) 靶值(mol/L) 偏差(%)國產(chǎn)試劑 10.9 10.4 4.81 27.8 27.5 1.09 13.5 13.1 3.10進(jìn)口試劑 10.8 10.4 3.85 27.9 27.5 1.45 13.4 13.

13、1 2.292.2 精密度：國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑分批測定高值混合血清各20次（參見表2），批間變異系數(shù)（CV%）分別為3.53%、3.82%；測定低值混合血清時(shí)，批間變異系數(shù)（CV%）分別為3.75%、4.00%（參見表2），符合臨床要求。表2：精密度試驗(yàn)(shyn)結(jié)果高值混合血清 低值混合血清國產(chǎn)(guchn)試劑 進(jìn)口(jn ku)試劑 國產(chǎn)試劑 進(jìn)口試劑均值(mol/L) 65.2 64.2 2.4 2.5SD 2.30 2.45 0.09 0.01 CV% 3.53 3.82 3.75 4.002.3最低檢測限：以蒸餾水為樣本，分別用國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑重復(fù)測定20次，結(jié)果為國產(chǎn)DBil

14、試劑的最低檢測限為0.4mol/L，進(jìn)口試劑的最低檢測限為0.9mol/L（參見表3）。表3：最低檢測限實(shí)驗(yàn)結(jié)果國產(chǎn)試劑 和光試劑均值(mol/L) 0.25 0.63SD 0.06 0.10CV% 24.00 15.872.4 線性范圍測定：國產(chǎn)試劑線性范圍評估時(shí)相關(guān)方程及相關(guān)系數(shù)分別為Y0.997X+5.2467，R20.9996（濃度范圍0.2-595.0mol/L）；進(jìn)口試劑和線性范圍評估時(shí)相關(guān)方程及相關(guān)系數(shù)分別為Y0.9984X+9.5042，R20.9986（濃度范圍-0.4-595.7mol/L）。2.5 干擾試驗(yàn)：將混合血清分成若干份，加入不同濃度的干擾物質(zhì)，測定加入干擾物前后

15、TBil的濃度，以相對偏差10%作為有明顯干擾的評判指標(biāo)（參見表4）。表4：最低檢測限試驗(yàn)結(jié)果乳糜（相當(dāng)TG濃度mmol/L） VitC（g/L） Hb（g/L）國產(chǎn)試劑 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L進(jìn)口試劑 35mmol/L 0.5g/L 5.0g/L2.6 方法比對實(shí)驗(yàn)：國產(chǎn)試劑與進(jìn)口試劑同時(shí)測定臨床標(biāo)本52例，將測定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)回歸分析，計(jì)算出相關(guān)方程和相關(guān)系數(shù)為Y1.0014X-2.0832，R20.9946。2.7 穩(wěn)定性觀察(gunch)：國產(chǎn)試劑經(jīng)14天熱破壞（37）和試劑(shj)倉開瓶（4-10）35天后，測定質(zhì)控結(jié)果和線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比熱破壞前無顯著偏差(pi

16、nch)，反應(yīng)曲線也沒有明顯的變化，均能達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，與進(jìn)口試劑相近。3 討論血清直接膽紅素測定是肝、膽功能檢查中的一項(xiàng)重要檢測項(xiàng)目，是對黃疸性疾病進(jìn)行診斷和鑒別診斷的重要指標(biāo)，對病程觀察有一定意義5。重氮法中的改良JG法有較高的靈敏度、精密度和較寬的線性，但試劑無法長期穩(wěn)定，溶血可使膽紅素測定值偏低，以疊氮鈉作為防腐劑時(shí)能破壞偶氮試劑，終止偶氮反應(yīng)，使重氮反應(yīng)不完全，甚至不呈色。釩酸鹽氧化法都是采用無機(jī)氧化劑氧化膽紅素，引起450 nm波長吸光度的下降，檢測結(jié)果與傳統(tǒng)的重氮法有較好的相關(guān)性。膽紅素氧化酶法試劑可以長期穩(wěn)定，特異性好，干擾少，但因?yàn)槊傅膩碓础⒓兌?、穩(wěn)定性及一個(gè)波長測定不同膽紅素

17、成分等問題，應(yīng)用具有局限性6，7。參考臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）標(biāo)準(zhǔn)化文件中的EP系列文件，對國產(chǎn)釩酸鹽氧化法測定直接膽紅素試劑進(jìn)行分析性能的系統(tǒng)評價(jià)，為臨床實(shí)驗(yàn)室工作者提供了對方法學(xué)評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)化途徑，為臨床實(shí)驗(yàn)室出據(jù)可靠、準(zhǔn)確的結(jié)果奠定了基礎(chǔ)，對提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量起到了積極的推動作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：釩酸氧化法測定總膽紅素的準(zhǔn)確度測定，其相對偏差10%；批內(nèi)變異系數(shù)小于4.0%；具有較好的線性范圍0.2-595.7mol/L；與進(jìn)口試劑比對相關(guān)方程和相關(guān)系數(shù)為Y1.0014X-2.0832，R20.9946；對抗脂肪、VitC和Hb干擾的能力較強(qiáng)；試劑開瓶穩(wěn)定性可達(dá)35天?，F(xiàn)市面上公認(rèn)最好

18、的釩酸鹽氧化法膽紅素測定試劑是進(jìn)口的和光試劑,但因其價(jià)格高,購買周期長,使用效期短等因素限制其應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，國產(chǎn)釩酸鹽氧化法膽紅素測定試劑不僅與WAKO（日本和光）試劑在分析性能上無顯著差異，而且價(jià)格低于進(jìn)口試劑。 參考文獻(xiàn)1 NCCLS.Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices;Approved GuidelineS. EP5-A2,1999,19(2):1-49.2 NCCLS.Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods:A Statistical Approach; Approved GuidelineS. EP6-