剝奪異相睡眠導(dǎo)致大鼠海馬中神經(jīng)元性一氧化氮合酶陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)減

1、剝奪異相就寢導(dǎo)致大鼠海馬中神經(jīng)元性一氧化氮合酶陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)減張?？?，侯一平，宋焱峰，劉向文，王德貴hangesfnNSpsitiveneurnsinhippapusanderynslidatinafterparadxialsleepdeprivatininrats【Abstrat】AI:Tstudythehangesferypressesandnslidatinduringparadxialsleepinratsandtbservethealteratinfneurnalnitrixidesynthaseiunreativity(nNSIR)neurnsinhippapusafterparad

2、xialsleepdeprivatin.ETHDS:AradxialsleepdeprivatinasperfredusingthelerpttehniqueThentrlgrups(),tankntrlgrupsTandparadxialsleepdeprivatingrupsPSDeretestedinrrisateraze.Attheendftheexperient,theanialseresarifiedunderhlralhydrateanesthesia(0.4g/kg)byintraartiperfusinfafixativeslutin.rnalsetinsereutat25t

3、hiknessnafreezingirteanduptfiveseriesfadjaentsetinserelletedfrnNSiunhistheialpressingusingstreptavidinbitinperxidaseplextehnique(SABtehnique).RESULTS:TheerynslidatininPSD24h,PSD48handPSD72hratsdelinedsignifiantlyparediththatinT24,48,72hasellas24,48,72hrats(P0.05),indiatingthatPSDausedasignifiantipai

4、rentinrefereneery.ThenNSexpressingellsinhippapusfPSD24,48,72hratseresignifiantlyfeerthanthseinT24,48,72hasellas24,48,72hrats(P0.05).NLUSIN:Paradxialsleepdeprivatinayauseadisturbaneferypressesandnslidatinandparadxialsleepisassiatedithery.ThenNSIRneurnsinhippapusfratindereaseinPSDgrupsparediththseinan

5、dTgrups.nNSinhippapusayplayakeyrleduringparadxialsleepandspatialery.【Keyrds】sleep;learningery;hippapus;rat;nNS【摘要】目的:展現(xiàn)影象是否在異相就寢中得到加強(qiáng)和結(jié)實(shí)，取消異相就寢是否導(dǎo)致影象維持本領(lǐng)落落及其落落的機(jī)制.神經(jīng)元性一氧化氮合酶neurnalnitrixidesynthase,nNS是否到場(chǎng)影象中樞海馬布局調(diào)治，剝奪異相就寢paradxialsleepdeprivatin，PSD)是否改變它們?cè)诤ｑR的表達(dá).要領(lǐng):接納小平臺(tái)法創(chuàng)立PSD大鼠動(dòng)物模子.應(yīng)用rris水迷宮測(cè)試體系檢測(cè)

6、大鼠空間參考影象得到及維持的變革;海馬的nNS免疫組化研究：PSD24，48和72h后，立即取腦、結(jié)實(shí)、行冰凍切片片厚25、SAB法免疫組化染色、光鏡下舉行不雅察闡發(fā)、攝像.效果：PSD可造成大鼠空間參考影象維持本領(lǐng)的損傷；PSD組大鼠海馬中nNS免疫反響陽(yáng)性細(xì)胞在A1，A2，A3，A4及錐體細(xì)胞層、顆粒層、齒狀回希罕，數(shù)量較相應(yīng)的大平臺(tái)組tankntrlgrups,Tgrup、正?；筐B(yǎng)組ntrlgrups,grup顯著淘汰(P0.05).而T組與組比擬力無(wú)顯著變革.結(jié)論：PSD可以造成大鼠空間影象的結(jié)實(shí)停滯，異相就寢與空間影象維持有關(guān)；PSD可以造成海馬nNS陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)淘汰，海馬中的nN

7、S大概到場(chǎng)了大鼠空間影象結(jié)實(shí)的歷程.【關(guān)鍵詞】就寢；影象；海馬；大鼠；神經(jīng)元性一氧化氮合酶0弁言比年來(lái)人們對(duì)就寢和學(xué)習(xí)影象之間的干系舉行了普及的研究，尤其是異相就寢與學(xué)習(xí)影象的干系是比年來(lái)神經(jīng)科學(xué)研究的熱門題目.以往大量研究會(huì)合在異相就寢與影象得到的機(jī)制上，而異相就寢與影象維持的干系所見(jiàn)報(bào)道不多.我們通過(guò)rris水迷宮創(chuàng)立空間影象得到模子，用小平臺(tái)技能flerpttehnique創(chuàng)立異相就寢剝奪paradxialsleepdeprivatin，PSD)模子1.應(yīng)用空間影象得到后PSD的要領(lǐng)，不雅察PSD后大鼠的影象維持本領(lǐng)的改變，及其神經(jīng)元性一氧化氮合酶neurnalnitrixidesynt

8、hase,nNS)在學(xué)習(xí)影象中樞海馬表達(dá)的變革.旨在探究異相就寢與影象維持的干系及其大概機(jī)制.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料康健雄性istar大鼠45只，體質(zhì)量30820g，由甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供.一連學(xué)習(xí)練習(xí)4d竣事后，立即用隨機(jī)數(shù)字表法將全部大鼠隨機(jī)分為3組(24h組,48h組和72h組),每組15只.每組再分為：PSD組，大平臺(tái)tankntrlgrups,T組；正常豢養(yǎng)組ntrlgrups,grup.每小組5只.nNS多克隆抗體Ab1參考效價(jià)1200，SAB試劑盒，DAB顯色試劑盒，PBS緩沖液等均購(gòu)自武漢博士德公司.1.2要領(lǐng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰：全部數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，一連4d各點(diǎn)第1,2次探究間隔、

9、影象得分接納重復(fù)丈量方差闡發(fā)，別的數(shù)據(jù)接納單因素方差闡發(fā)，均數(shù)兩兩比力行LSDt查驗(yàn)，方差不齊各組間的比力接納非參數(shù)查驗(yàn)，P0.05為有明顯性差異.2效果2.1大鼠rris水迷宮空間學(xué)習(xí)影象本領(lǐng)的測(cè)試隨著練習(xí)次數(shù)的增長(zhǎng)，大鼠空間學(xué)習(xí)影象本領(lǐng)漸漸加強(qiáng),一連4d各點(diǎn)第1，2次探究間隔、影象得分有差異Tab1；PSD24，48和72h后各入水點(diǎn)搜刮平臺(tái)的效果也有差異Tab2.表1一連4d各點(diǎn)第1，2次探究間隔、影象得分的效果略表2剝奪異相就寢24，48和72h后探究間隔、影象得分的效果略2.2海馬的nNS免疫組化nNS陽(yáng)性細(xì)胞均為神經(jīng)元，胞質(zhì)和突起濃染，大部門會(huì)合于錐體細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層內(nèi)或邊沿，胞

10、體多為錐形或梭形.PSD組大鼠海馬各亞區(qū)及齒狀回陽(yáng)性細(xì)胞漫衍希罕，數(shù)量較T和組顯著淘汰(P0.05).而T組與組比擬力無(wú)顯著變革(Tab3,Fig1).表3PSD組大鼠海馬各亞區(qū)及齒狀回陽(yáng)性細(xì)胞漫衍略3討論rris水迷宮是英國(guó)生理學(xué)家rris于20世紀(jì)80年代初方案并應(yīng)用于學(xué)習(xí)影象腦機(jī)制的研究2.今后，該迷宮體系被普及運(yùn)用在神經(jīng)生物學(xué)范疇的底子和應(yīng)用研究中，實(shí)行動(dòng)物重要是大鼠2.我們參考Yungbld等3的方案要領(lǐng)，用每個(gè)入水點(diǎn)的第一次練習(xí)效果來(lái)權(quán)衡空間參考影象的得到和保持程度，用第二次練習(xí)效果來(lái)權(quán)衡空間事情記A:T;B:PSD24h;:PSD48h;D:PSD72h.實(shí)行效果創(chuàng)造，全部大鼠通

11、過(guò)練習(xí)后創(chuàng)立了差異程度的空間影象.從PSD組大鼠在同一時(shí)段其第一次探究游泳暗藏期、間隔均大于其相應(yīng)的T組和組，影象得分S小于T，組大鼠，其差異有明顯性P0.05.由于rris水迷宮各個(gè)差異入水點(diǎn)的第一次效果反響空間參考影象的得到和維持程度，說(shuō)明PSD可造成大鼠空間參考影象得到和維持本領(lǐng)的損傷.T，組大鼠之間其參數(shù)統(tǒng)計(jì)沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明水情況對(duì)學(xué)習(xí)影象的影響不大.但Yungbld等3以為，水情況的應(yīng)激可以造成大鼠出現(xiàn)窘迫狀態(tài)，從而導(dǎo)致學(xué)習(xí)影象本領(lǐng)落落.宋國(guó)同等4以為，水情況應(yīng)激可以促使腎上腺素、乙酰膽鹼、血管告急素的開(kāi)釋，進(jìn)步中樞神經(jīng)體系的快樂(lè)性，進(jìn)步學(xué)習(xí)影象的本領(lǐng).在實(shí)行中，我們創(chuàng)造PSD組大

12、鼠從PSD開(kāi)始后出現(xiàn)自主運(yùn)動(dòng)顯著增多，對(duì)外界刺激敏感，易激惹.T組與PSD組同處于水情況中，固然也出現(xiàn)自主運(yùn)動(dòng)增多，但程度輕.上述效果表白，PSD和T組大鼠都對(duì)水情況有應(yīng)激反響，但程度差異.而實(shí)行中除了平臺(tái)巨細(xì)差異外，兩組的其他條件雷同.有大量研究表白，海馬與學(xué)習(xí)影象嚴(yán)密相干.海馬直接到場(chǎng)信息的儲(chǔ)存后回想，與恒久影象的形成有關(guān)，因此，PSD組學(xué)習(xí)影象本領(lǐng)的落落重要是PSD所至.nNS調(diào)治中樞神經(jīng)體系中的N的開(kāi)釋，長(zhǎng)時(shí)程加強(qiáng)lngterptentiatin,LTP)的表達(dá)與N的產(chǎn)生出現(xiàn)正相干4.Vinent等5在研究中創(chuàng)造，N可以調(diào)治Ah的開(kāi)釋，N開(kāi)釋增多，Ah排泄也增多.應(yīng)用NS按捺劑灌注腦構(gòu)

13、造可以使Ah底子開(kāi)釋量淘汰40%，而Ah與學(xué)習(xí)影象及就寢的周期嚴(yán)密相干.別的，N還到場(chǎng)突觸重塑的調(diào)治，N的淘汰可使突觸重塑本領(lǐng)落落.LTP是神經(jīng)可塑性和突觸通報(bào)的一種表現(xiàn)情勢(shì)，被以為是學(xué)習(xí)影象的細(xì)胞學(xué)底子.而突觸重塑是LTP的底子4,6.實(shí)行中創(chuàng)造，PSD后PSD組與T，組比擬力，PSD組大鼠海馬中nNS陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)希罕，數(shù)量顯著低于T和組.因此可以推測(cè)：PSD可以造成海馬nNS的表達(dá)淘汰，從而導(dǎo)致N的產(chǎn)生淘汰，這大概是導(dǎo)致PSD造成大鼠空間學(xué)習(xí)影象本領(lǐng)落落的緣故原由之一.【參考文獻(xiàn)】1endelsnB,GuthrieRD，F(xiàn)rederikG,etal.Theflerpttehniquefr

14、apideyeveent(RE)sleepdeprivatinJ.PharalBiheBehav,1974;22:553-556.2rrisRG,GarrudP,RalinsJNP,etal.PlaenavigatinipairedinratsithhippapallesinsJ.Nature,1982;297:681.3YungbldBD，SaginGN,ElinsPD,etal.Theeffetsfparadxialsleepdeprivatinandvalinenspatiallearningandbrain5HTetablisJ.PhysilBehav,1999;67(5):643-649.4宋國(guó)平，苗丹民，皇甫恩，等.就寢剝奪對(duì)大鼠學(xué)習(xí)和舉動(dòng)的影響J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000；216：663-666.SngGP,iaD,HuangfuE,etal.Effetsfsleepdeprivatinnratsbehavirandle