甲狀腺乳頭狀癌Survivin、p53表達(dá)與臨床病理特征

1、甲狀腺乳頭狀癌Survivin、p53表達(dá)與臨床病理特征 【摘要】目的探討新的凋亡抑制基因survivin和抑癌基因p53在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展、臨床病理特征之間的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)(SP法)，檢測(cè)survivin、p53在102例甲狀腺乳頭狀癌組織及10例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中的表達(dá)。結(jié)果102例甲狀腺乳頭狀癌組織中survivin、突變型p53（mt-p53）基因的陽性表達(dá)率分別為66.7%和81.4。與良性病變組survivin、p53的陽性表達(dá)率30、O相比較二者差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭癌組織中survivin

2、的陽性表達(dá)率為79.5，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，survivin的陽性率為57.1%，二者差別有顯著性(P0.05)。結(jié)論Survivin與mt-p53在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)上調(diào)。Survivin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),突變型p53表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。 【關(guān)鍵詞】甲狀腺乳頭狀癌survivinp53基因免疫組織化學(xué) 遺傳學(xué)研究表明甲狀腺癌是多基因相關(guān)腫瘤，基因水平的變化可能在甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起到一個(gè)關(guān)鍵的作用1，survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的成員，survivin可對(duì)抗G2M期誘導(dǎo)的凋亡，在癌組織中過度表達(dá)克服凋亡檢測(cè)點(diǎn)，通過有絲分裂促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的異常增殖2。P53為

3、抑癌基因,survivin及mt-p53在大部分腫瘤組織中過表達(dá)與腫瘤細(xì)胞死亡缺陷關(guān)聯(lián)密切。本實(shí)驗(yàn)旨在采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)survivin、p53基因在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)，探討其與甲狀腺乳頭狀癌臨床病特征的關(guān)系。 1資料與方法 1.1標(biāo)本選擇 選取廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和寧夏醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院2001年1月一2003年12月臨床和病理資料完整的102例甲狀腺乳頭狀癌根治術(shù)組織標(biāo)本，患者術(shù)前均未經(jīng)過任何抗腫瘤治療。其中男性24例，女性78例，最大年齡73歲，最小年齡12歲，中位年齡42歲。根據(jù)癌的浸潤范圍，組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)等特點(diǎn)，按WHO分類標(biāo)準(zhǔn)分類，其中微小癌15例，濾泡乳頭型21例

4、，高細(xì)胞型14例，嗜酸細(xì)胞型5例，彌漫硬化型2l例，包裹型26例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例。另選取結(jié)節(jié)性甲狀腺腫標(biāo)本10例作為對(duì)照組，其中男4例，女6例，中位年齡44歲。 1.2免疫組織化學(xué)染色 小鼠抗人p53(D01)和人survivin(FL-142)單抗及S-P試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化采用S-P方法，操作步驟如下：石蠟切片脫蠟至水；3H202室溫孵育510min；微波抗原修復(fù)；正常山羊血清封閉，室溫15min，滴加p53和surivin-抗原工作液，冰箱內(nèi)40C過夜；PBS沖洗，滴加第二代生物素，標(biāo)記二抗工作液，室溫20min；PBS沖洗，滴加第二

5、代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白索工作液，室溫20min；PBS沖洗，DAB顯色，自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，封片。已知的乳腺癌切片為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為空白對(duì)照。 1.3結(jié)果判定 采用雙盲法，觀察切片至少5個(gè)以上具有代表性高倍視野，不少于1000個(gè)細(xì)胞，對(duì)免疫結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺乳頭狀癌中p53和survivin的表達(dá)情況，survi誠n陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，p53陽性表達(dá)則定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，均呈棕黃色。根據(jù)常規(guī)，p53和survivin陽性細(xì)胞在同類細(xì)胞中所占比例分4個(gè)等級(jí)。陽性細(xì)胞51為“+”。 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 根據(jù)實(shí)驗(yàn)資料的性質(zhì)，對(duì)所得資料進(jìn)行2檢驗(yàn)，P0.05認(rèn)為差別有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1Survivin、mt-p53在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)情況 Survivin陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，p53陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，均呈棕黃色。102例甲狀腺狀癌組織中，mt-p53陽性表達(dá)83例，陽性率為81.4，而對(duì)照組10例全結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中無mt-p53表達(dá)，差別有顯著性(x2=314，P001)。102例甲狀腺乳頭狀癌組織中survivin陽性表達(dá)為68例，陽性率為66.7，而10例對(duì)照組中survivin陽性表達(dá)3例，陽性率為30，差別有顯著性(2=5.3，P0.05)，mt-p53基因表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)，而survivin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著

7、正相關(guān)。 3討論 Mt-p53及survivin參與了細(xì)胞周期調(diào)控及細(xì)胞凋亡等過程，與腫瘤細(xì)胞死亡調(diào)控有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)使用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)102例甲狀腺乳頭狀癌組織中survivin、mt-p53的表達(dá)情況，結(jié)果表明甲狀腺乳頭狀癌組織中survivin的陽性表達(dá)率為66.7(68102)，與結(jié)節(jié)性甲狀腫的陽性表達(dá)率30(310)比較有顯著性差異(P0.05)；mt-p53在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達(dá)率為81.4(83102)，而l0例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織中無陽性表達(dá)，二者有顯著性差異(P0.05)；mt-p53陽性者survivin表達(dá)陽性率明顯高于mt-p53陰性者，二者有顯著性差異(P0

8、.05)。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭癌組織中survivin的陽性表達(dá)率為79.5，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，survivin的陽性率為57.1，二者差別有顯著性(P0.05)。mt-p53及survivin在甲狀腺乳頭狀癌組織過表達(dá)，突變型p53(mt-p53)上調(diào)survivin在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)3，二者在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。wt-p53在人類腫瘤組織的突變率為50，因?yàn)閟urvivin缺乏引起的細(xì)胞死亡不依賴于p53和Bcl2，那么以survivin通路上的survivin分子或其他相關(guān)分子為靶點(diǎn)的抗癌治療就成為可能，靶向作用使survivin失活可以誘發(fā)p53功能缺乏

9、并由此產(chǎn)生凋亡抵抗的腫瘤細(xì)胞發(fā)生有絲分裂突變而死亡4。甲狀腺乳頭狀癌對(duì)化療藥物不敏感，以survivin為靶點(diǎn)的新藥開發(fā)也許會(huì)對(duì)甲狀腺癌的治療產(chǎn)生影響。 參考文獻(xiàn) 1WrightPA.LemoineNR，GiretxkiPE，etal.Mutatinonofthep53geneindifferentiatedhumanthyroidcarinomacellline，butnotthroidtumorsJ.Oneogene，1991，6(9)：16931697. 2AmbrosiniG，AdiaC,AltieriDC.Anovelanti-apoptosisgene，survivin,expressedincancerandlymhomaJ.Nat，1997，3(8)917-921. 3HoffmanWH,BiadeS,ZilfouJT,etal.Teanscriptionalreperessionoftheanti-apoptoticsurvivingenebywildtypep53J.JBiolChem,2002,277(5):3247-3257 4ZhouM,GuL,LiF,etal.D