實(shí)驗(yàn)四中性粒細(xì)胞吞噬試驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)(shyn)二中性(zhngxng)粒細(xì)胞吞噬功能測定共十六頁 吞噬細(xì)胞的吞噬作用是構(gòu)成機(jī)體非特異性免疫的重要因素。吞噬細(xì)胞分為兩類：一類為大吞噬細(xì)胞，即固定于組織中的巨噬細(xì)胞和血液中的單核細(xì)胞；另一類為小吞噬細(xì)胞，即血液中的中性粒細(xì)胞。它們對外來的異物有吞噬、消化和清除的功能，是機(jī)體天然防御的重要機(jī)制(jzh)之一。檢查吞噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)可反映吞噬細(xì)胞的吞噬功能，也有助于判斷動物機(jī)體的免疫機(jī)能。共十六頁【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、熟悉中性粒細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)的原理(yunl) 和方法。2、通過本實(shí)驗(yàn)理解機(jī)體的非特異性 免疫機(jī)制。共十六頁【實(shí)驗(yàn)原理】 中性粒細(xì)胞具有吞噬殺菌功能，當(dāng)與顆粒性 抗原物質(zhì)

2、（如葡萄球菌等）在體內(nèi)或體外試 管中混合孵育(f y)一定時間后，顆粒性抗原物質(zhì) 被吞噬殺滅，根據(jù)吞噬率、吞噬指數(shù)可反映 該細(xì)胞的吞噬功能。共十六頁（一）體內(nèi)法【實(shí)驗(yàn)(shyn)材料】1、無菌肉湯、無菌生理鹽水2、白色葡萄球菌1824h培養(yǎng)物3、小白鼠4、瑞氏染液，無菌注射器、載玻片等共十六頁【實(shí)驗(yàn)方法】1、實(shí)驗(yàn)前l(fā)h注射無菌肉湯lml于小白鼠腹 腔內(nèi)，誘導(dǎo)漿液滲出。2、用無菌生理鹽水(shnglynshu)洗下白色葡萄球菌普通 斜面l824h培養(yǎng)物，經(jīng)麥?zhǔn)媳葷岱ǎ?配成含3億個ml的細(xì)菌懸液。3、給小白鼠腹腔內(nèi)注射上述菌液lml，讓 其活動。4、分別于20min、40min、60min后抽取

3、腹 腔液涂片，瑞氏染色后鏡撿。共十六頁【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)100個中性(zhngxng)粒細(xì)胞，分別計(jì)數(shù) 吞噬有細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)和所吞噬的細(xì) 菌總數(shù)，按下述公式，計(jì)算出吞噬百分率和吞噬指數(shù)。共十六頁【實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果】共十六頁中性(zhngxng)粒細(xì)胞吞噬試驗(yàn)共十六頁共十六頁【注意事項(xiàng)】1、細(xì)菌濃度要合適。太高的菌液濃度，易 造成假陽性，增加結(jié)果判斷的難度，濃 度不夠又會造成吞噬率低，同樣也會給 觀察結(jié)果帶來麻煩。2、掌握好吞噬時間(shjin)，以免細(xì)菌被吞噬細(xì)胞 所消化，造成吞噬率偏低。共十六頁（二）體外法【實(shí)驗(yàn)材料】1、白色葡萄球菌菌液（濃度610億/ml)2、肝素溶液（2

4、5U/ml）；甲醇，堿性(jin xn)美 藍(lán)（或瑞氏）染液。3、血紅蛋白吸管，凹玻片，載玻片，采 血針，微量加樣器，濕盒，顯微鏡， 恒溫培養(yǎng)箱，75%酒精，棉簽等。共十六頁【實(shí)驗(yàn)方法】1、用微量加樣器，吸取肝素20ul加入凹玻片凹孔內(nèi)。2、用酒精棉簽消毒手指后，刺破皮膚(p f)，以血紅蛋白吸 管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔內(nèi)， 并充分混勻。3、用微量加樣器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片 凹孔內(nèi)，充分混勻。4、將凹玻片置于濕盒內(nèi)，30溫箱中30min，其間每 隔10min搖勻一次。5、取一小滴上述混合液，置于載玻片上，用另一載玻 片推成薄血片，待干。6、滴加甲醇固定3mi

5、n，水洗。7、加堿性美藍(lán)染色12min，水洗，印干。8、置油鏡下觀察吞噬和未吞噬的白細(xì)胞并計(jì)數(shù)。共十六頁【實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果】共十六頁【實(shí)驗(yàn)思考】1、在吞噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)細(xì)菌時，如何區(qū)別 吞噬的細(xì)菌和粘附(zhn f)在吞噬細(xì)胞表面的 細(xì)菌？共十六頁內(nèi)容摘要實(shí)驗(yàn)二。吞噬細(xì)胞的吞噬作用是構(gòu)成機(jī)體非特異性免疫的重要因素。吞噬細(xì)胞分為兩類：一類(y li)為大吞噬細(xì)胞，即固定于組織中的巨噬細(xì)胞和血液中的單核細(xì)胞。它們對外來的異物有吞噬、消化和清除的功能，是機(jī)體天然防御的重要機(jī)制之一。斜面l824h培養(yǎng)物，經(jīng)麥?zhǔn)媳葷岱?，。鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)100個中性粒細(xì)胞，分別計(jì)數(shù)。造成假陽性，增加結(jié)果判斷的難度，濃。恒溫培養(yǎng)箱，75%酒精，棉簽等。2、用酒精棉簽消毒手指后，刺破皮膚，以血紅蛋白吸。管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔