人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

1、起關(guān)鍵作用，人和小鼠分子這個(gè)區(qū)域結(jié)構(gòu)高度保守，其同源性達(dá)。人和小鼠本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測天然或重組的人，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：法定量測定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中含量。說明1試劑盒保存：C（較長時(shí)間不用時(shí)）；C（頻繁使用時(shí)）。2濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。4剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。概述巨噬細(xì)胞集落刺激因子（，）又稱為集落刺激因子（），是造血系統(tǒng)重要的細(xì)胞因子。主要調(diào)節(jié)單核

2、巨噬細(xì)胞系細(xì)胞的生長、增殖和分化。多種細(xì)胞均可產(chǎn)生，包括成纖維細(xì)胞、子宮內(nèi)膜中分泌型上皮細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、腦星狀細(xì)胞、成骨細(xì)胞；等激活的巨噬細(xì)胞、細(xì)胞、細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等；此外，多種腫瘤細(xì)胞如原粒細(xì)胞性白血病、淋巴母細(xì)胞性白血病、肺腺癌細(xì)胞、乳腺癌和卵巢癌等。人和小鼠天然為糖蛋白，由二硫鍵連接的同源雙體，分子量。人前體長度個(gè)氨基酸不等，均有個(gè)氨基酸的信號肽和個(gè)氨基酸的穿膜部分。膜結(jié)合型表達(dá)在單層培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，可刺激表達(dá)受體的巨噬細(xì)胞的粘附和增殖。成熟分子靠近端氨基酸在與受體結(jié)合中和酸性基因密切基因定位于對染色體，與連鎖。受體為高親和力，表達(dá)于循環(huán)的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞以及胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞。

3、實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗抗體、標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物顯色。在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在波長下測定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制.酶聯(lián)板（:一塊（孑L）。.標(biāo)準(zhǔn)品（)d:瓶（凍干品）。.樣品稀釋液（u):瓶長。.生物素標(biāo)記抗體稀釋液（u)i:瓶長。.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液iu)n:瓶長。.生物素標(biāo)記抗體（.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（)v:.底物溶液（)t:瓶長。.濃洗滌液（)f:瓶長，：使/用時(shí)每瓶用蒸餾水稀

4、釋25倍。終.止液（)t:瓶長（：O)4。需要而未提供的試劑和器材1標(biāo).準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2.高速離心機(jī).電熱恒溫培養(yǎng)箱.干凈的試管和5系.列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6蒸.餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存血清：全血標(biāo)本請于室溫放置小時(shí)或過夜后于離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。血漿：可用或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后分鐘內(nèi)于離心分鐘，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：離心分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。標(biāo)本

5、的稀釋原則：首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至，蓋好后靜置分鐘以上,然后反復(fù)顛倒搓動以助溶解，其濃度為/做系列倍比稀釋后，分別稀釋/樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度，臨用前分鐘內(nèi)配制。如配制標(biāo)準(zhǔn)品：?。ú灰儆?的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含樣品稀釋液的管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔），實(shí)際配

6、制時(shí)應(yīng)多配制。如生物素標(biāo)記抗體加生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔0,實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制。如辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液

7、100，,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100，,注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，7反應(yīng)分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液（取生物素標(biāo)記抗體加生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），7分鐘。溫育分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板次，每次浸泡分鐘，每孔，甩干。每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液），7，分鐘。5溫.育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-分2鐘，350每,孔，/甩干。依序每孔加底物溶液

8、90，,3，77避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-孔4有明顯的梯度藍(lán)色，后3-孔4梯度不明顯，即可終止）。依序每孔加終止溶液50，,終，止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。用酶聯(lián)儀在波長依序測量各孔的光密度（值）。在加終止液后分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。注：1用用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2用每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO。測量時(shí)先用此孔調(diào)值至零。3用為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)

9、，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于C保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。5用建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少注入孔內(nèi)，浸泡分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1用當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。2用洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。用一次加