HPLC法檢測(cè)面條中的乙二胺四乙酸二鈉

1、HPLC法檢測(cè)面條中的乙二胺四乙酸二鈉作者：許秦，劉依涵來(lái)源：現(xiàn)代食品2018年第21期摘要：采用高效液相色譜法檢測(cè)面條中乙二胺四乙酸二鈉。試樣通過(guò)水提取，加入FeCl3衍生化成穩(wěn)定的絡(luò)合物，采用DAD檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，乙二胺四乙酸二鈉的絡(luò)合物質(zhì)量濃度為2.080.0ugmL-1，相關(guān)系數(shù)為1.0000,加標(biāo)回收率為92.48%98.02%,RSD為0.065%。該方法簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高，精確度和精密度好，適合面條中乙二胺四乙酸二鈉的含量檢測(cè)。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；乙二胺四乙酸二鈉；面條乙二胺四乙酸二鈉是食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)中允許使用的添加

2、劑，有防腐、穩(wěn)定、抗氧化、凝固的作用，可以被用于飲料制品、乳制品、醬腌菜、罐頭及果脯等食品中。若不按規(guī)定或超限量使用乙二胺四乙酸二鈉，就會(huì)影響人的身體健康，導(dǎo)致人體中微量元素的流失，對(duì)上呼吸道、眼睛、黏膜產(chǎn)生影響，可引起嘔吐、腹瀉、和急腹痛等癥狀，還可引起暫時(shí)性的腎臟功能障礙或血壓下降。我國(guó)食品安全標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了乙二胺四乙酸二鈉作為食品中添加劑的使用規(guī)則、允許使用的食品種類和允許使用量的范圍及殘留量，但面條中不允許添加乙二胺四乙酸二鈉1。在實(shí)際的食品監(jiān)管中發(fā)現(xiàn)，乙二胺四乙酸二鈉能降低面粉中多酚氧化酶的活性，延緩面條酶促褐變的過(guò)程，減少對(duì)面條感官品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分的影響。因此，一些面條商販為了使面條的

3、外觀好看、勁道和口感好，存在超限量使用乙二胺四乙酸二鈉的情況。目前，國(guó)內(nèi)外有很多快速高效檢測(cè)乙二胺四乙酸二鈉的相關(guān)文獻(xiàn)，主要的檢測(cè)方法有HPLC法、LC-MS法、氣相色譜法、分光光度法、毛細(xì)管電泳法、離子色譜法等2-7。我國(guó)關(guān)于檢測(cè)食品中乙二胺四乙酸二鈉的標(biāo)準(zhǔn)有SN/T3855-2014和GB5009.249-2016等，適用于飲料、果脯、醬腌菜和鐵強(qiáng)化醬油等食品的檢測(cè)，沒(méi)有面條中乙二胺四乙酸二鈉的檢測(cè)方法8。本文擬建立一種快速高效檢測(cè)面條中乙二胺四乙酸二鈉的方法，為實(shí)際的食品監(jiān)管工作中乙二胺四乙酸二鈉含量的測(cè)定提供一定的技術(shù)參考。實(shí)驗(yàn)部分儀器與試劑賽默飛Ultimate3000高效液相色譜儀

4、（配備DAD檢測(cè)器）、AL104電子天平（梅特勒-托利多）、ALLEGRAX-30R離心機(jī)（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）、KQ5200DB超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)于StanfordChemicals公司）、鹽酸（GR）、甲醇（色譜純）、三氯甲烷（色譜純）、三氯化鐵（AR）、抗壞血酸（AR）、乙酸鈉（AR）、四丁基溴化銨（AR），試驗(yàn)用水均為去離子水；超市購(gòu)買2種面條。實(shí)驗(yàn)方法1.2.10.02molL-1三氯化鐵溶液的配制準(zhǔn)確稱取0.5406gFeCl36H20，溶解于90mL水中，加入0.03mL鹽酸，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。標(biāo)準(zhǔn)溶液

5、的配制準(zhǔn)確稱取乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.10040g至50mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，得2.008mgmL-l的乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取乙二胺四乙酸二鈉儲(chǔ)備液0.05、0.1、0.25、0.5、1.0mL和2.0mL于含有20mg抗壞血酸的50mL容量瓶中，加入適量水和1mLFeCl3溶液，超聲15min，冷卻至室溫后，用水定容至刻度，即得含乙二胺四乙酸二鈉2.008、4.016、10.04、20.0840.16ugmLT和80.32ugmL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。樣品前處理及衍生化準(zhǔn)確稱取粉碎過(guò)的樣品5g（精確到0.01g）于50mL已具有20mg抗壞血酸的離心管中,加入15

6、mL水，渦旋2min，4500rminT離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，15mL水重復(fù)提取1次，合并提取液于50mL容量瓶中。向提取液中加入1.0mLFeCl3溶液超聲20min，冷卻至室溫后定容至刻度，混勻后過(guò)0.45um濾膜，濾液備用。色譜條件色譜柱：WatersSunfireC184.6X150mm，5um；流速：1.0mLminT，柱溫：30C，流動(dòng)相為甲醇：水（含有0.02molL-1四丁基溴化胺和0.03molL-1乙酸鈉緩沖溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH=4）=1:4。進(jìn)樣量：20uL，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。結(jié)果與分析2.1檢測(cè)波長(zhǎng)和絡(luò)合劑的選擇乙二胺四乙酸二鈉能夠與大多數(shù)金

7、屬離子形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，且優(yōu)先與穩(wěn)定常數(shù)大的金屬離子進(jìn)行絡(luò)合。乙二胺四乙酸二鈉與三價(jià)鐵離子絡(luò)合化合物的穩(wěn)定常數(shù)大于與二價(jià)銅離子絡(luò)合化合物的穩(wěn)定常數(shù)，因此選用FeCl3作為絡(luò)合劑。對(duì)其絡(luò)合物在190400nm進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，最大吸收波長(zhǎng)在250nm附近（見(jiàn)圖1），因此本方法采用254nm波長(zhǎng)檢測(cè)。2.2流動(dòng)相的選擇據(jù)相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，乙二胺四乙酸二鈉檢測(cè)流動(dòng)相有兩種：SN/T3855-2014出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定中所用的流動(dòng)相，為0.075molL-1的磷酸二氫鉀（pH=2.3）-甲醇（90:10,V/V）。SN/T1018-2001出口食品罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定方法中所用的四丁

8、基溴化胺-乙酸鈉混合溶液（pH=4.0）-甲醇（80:20,V/V）。高效液相色譜法測(cè)定腌漬蔬菜罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量中，對(duì)兩種流動(dòng)相的研究表明四丁基溴化胺-乙酸鈉混合溶液作為流動(dòng)相時(shí)，檢測(cè)更佳9-11。因此本實(shí)驗(yàn)選擇四丁基溴化胺-乙酸鈉混合溶液作為流動(dòng)相。在該實(shí)驗(yàn)條件下，乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合物峰型良好（見(jiàn)圖2），滿足實(shí)驗(yàn)2.3線性范圍在該確定的實(shí)驗(yàn)條件下，以乙二胺四乙酸二鈉絡(luò)合物的濃度為橫坐標(biāo)，其峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明當(dāng)絡(luò)合物的質(zhì)量濃度2.080.0ugmL-1時(shí)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為1.0000（見(jiàn)圖3），回歸方程為y=0.4748x-0.0356。cJO.f

9、lTB-.UD4.a岡旱二二胺田乙戢二料盜合栩標(biāo);也曲線囹樣品前處理SN/T3855-2014出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測(cè)定中在提取時(shí)均需要加入三氯甲烷，衍生化后也需要加入三氯甲烷進(jìn)行凈化12-13。加入三氯甲烷的原因是為了除去色素、脂肪等雜質(zhì)的干擾，但由于面條中雜質(zhì)較少，結(jié)果顯示面條樣品中加入三氯甲烷進(jìn)行除雜質(zhì)和凈化和不加三氯甲烷，不會(huì)在色譜圖上產(chǎn)生明顯差異（見(jiàn)圖4和圖5）。在樣品中均未檢測(cè)到乙二胺四乙酸二鈉。方法的加標(biāo)回收率前處理方法按加三氯甲烷和不加氯甲烷兩種，以不含乙二胺四乙酸二鈉的面條為樣品，做個(gè)添加水平，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，檢測(cè)方法的回收率。1m結(jié)果表明前處理方法加三氯甲烷和不加三氯甲烷的加標(biāo)回收率也無(wú)太大差異，見(jiàn)表1、表2。因此，對(duì)于面條樣品的處理，可以不加三氯甲烷除雜質(zhì)和凈化。2.6檢出限與定量限向空白面條粉末基質(zhì)中標(biāo)準(zhǔn)品，以3倍信噪比（S/N=3）確定檢出限（LOD）為3.34mgkg-1；以10倍信噪比（S/N=10）確定定量限（LOQ）為11.15mgkg-1。2.7精密度稱取5g面條樣品，加入0.5mL2.008mgmL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，平行測(cè)定6次，測(cè)得RSD為0.065%，表明該方法重復(fù)性良好，準(zhǔn)確可靠，滿足實(shí)驗(yàn)需求。3結(jié)論本文建立了面