食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定

1、食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定發(fā)布單位：太原市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局報送時間：2007年12月19日瀏覽次數(shù):342附件1GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定1范圍本標準規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法。本標準適用于各類食品中菌落總數(shù)的測定。2術(shù)語菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度和田 pH需氧性質(zhì)等)，所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié) 只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標志， 也可以應用這一方法觀察細菌在食 繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價

2、時提供依據(jù)。3引用標準GB/T 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料冰箱：04C。恒溫培養(yǎng)箱：361CO恒溫水浴鍋：461CO均質(zhì)器或滅菌乳缽。架盤藥物天平：0g500g,精確至0.5g。菌落計數(shù)器。放大鏡4X。滅菌吸管：1 mL （具0.01 mL刻度）、10 mL （具0.1 mL刻度）滅菌錐形瓶：500 mL。滅菌玻璃珠。5 mm滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm滅菌試管。16X16 mm廣口瓶或三角瓶：容量為 500mL電爐。試管架。酒精燈。滅菌鐐子、滅菌刀或剪子等。5培養(yǎng)基和試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按 GB/T4789.28中4.7規(guī)定。磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB/

3、T4789.28中3.22規(guī)定。0.85%滅菌生理鹽水。75濃醇。6檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序如下。檢樣選擇23個適宜的稀釋度各取1 mL分別加入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)做成幾個適當倍數(shù)的稀釋液每皿內(nèi)加入適量營養(yǎng)瓊脂菌落計數(shù)36C 1 C 48h 士 2h報告7操作步驟檢樣稀釋及培養(yǎng)以無菌操作，取樣25mW 25 g放入225mL滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分振搖作成1: 均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置均質(zhì)器中以8000r/min10000r/min的速度處理 1min,做成1:10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1 ： 10稀釋液1mL沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽2 其他稀釋液的試管內(nèi)（注意

4、吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管，混合均勻，做成 100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做 10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一 即換用1支1mL火菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)吮疚廴厩闆r的估計，選擇23個適宜稀釋度，分做10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，應及時將涼至 46c營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于461C水* 溫）注入平皿約15mL并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有 1mL稀 的滅菌平皿內(nèi)作空白對照待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置 36 1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)482h。菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)

5、時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。菌落計數(shù)的報告平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平 應采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時， 則不宜采用，而應以無 菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)， 若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌 布又很均勻，即可計算半個平板后乘 2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時 落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則每條鏈作為一個菌落計。稀釋度的選擇應選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，

6、乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1 1）。若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，則視兩者之比如何來決 若其比值小于或等于2,應報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字（見表中例 3）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300,則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以釋倍數(shù)報告之（見表1中例4）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以倍數(shù)報告之（見表1中例5）。若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之（見表1 6）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30300之間，其中一部分大于300或小時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1

7、中例7）。菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位 數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用 10的指數(shù) 示（見表1中“報告方式”欄）。表1稀釋度選擇及菌落數(shù)報告方式例 次稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液 之比菌落總數(shù)cfu/g(mL)報告方式cfu/g(mL)10-110-210-31多/、可計1642016 40016000 或 1.6X1042多/、可計295461.637 75038000 或 3.8X1043多/、可計271602.227 10027000 或 2.7X1044多/、口計多/、口計313313 00031

8、0000 或 3.1X105527115270270 或 2.7X10260001X10107多/、口計30512-30 50031000 或 3.1X104附件2GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸菌群測定1范圍本標準規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本標準適用于食品中大腸菌群的測定。2術(shù)語大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿 該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN/示。3引用標準GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生

9、物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料溫箱：36 1C。冰箱：04C。恒溫水?。?4.5 0.5 C。天平。顯微鏡。均質(zhì)器或乳缽。平皿：直徑為90mm試管。吸管。廣口瓶或三角燒瓶：容量為 500mL玻璃珠：直徑約5mm載玻片。酒精燈。試管架。5培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管：按 GB/T4789.28中4.9規(guī)定。伊紅美藍瓊脂平板：按 GB/T4789.28中4.25瀝規(guī)定乳糖發(fā)酵管：按 GB/T4789.28中4.10規(guī)定。EC肉湯：按 GB/T4789.28 中 4.11 規(guī)定。磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB/T4789.28中3.22規(guī)定。生理鹽水。革蘭氏染色液：按 GB 4789.28中2.

10、2規(guī)定。6檢驗程序大腸菌群檢驗程序如下：（圖略）稀釋檢樣乳糖膽鹽發(fā)酵管36c 1C 48h 2h產(chǎn)氣大腸菌群陰性伊紅美藍瓊脂平板36c 1C 48h 2h不產(chǎn)氣報告革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管36c 1C 48h 2h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽胞桿菌產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性大腸菌群陰性報告報告報告7操作步驟檢樣稀釋以無菌操作將檢樣25mL俄g）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅 璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)予置適當數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1 ： 10的均 釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以 8 00010000r/min的速度處理1min,做成1 ： 10 勻稀釋液。用1mL滅

11、菌吸管吸取1 ： 10稀釋液1mL注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀 的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1 ： 100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換 支1mL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋陽性管教MPN95%T信限1mL(g)X30.1mL(g)X30.01mL(g)X3100mL(g)下限上限種3管7.2 乳糖試驗將待檢接種于乳糖發(fā)酵管內(nèi)，量在1mL者，用雙料 膽鹽發(fā)酵管 及1mL以下用單料乳糖 發(fā)酵管。每 釋度接種3 置 361C內(nèi)，培養(yǎng)242h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰

12、性，如有 者，則按下列程序進行。分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36 1C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18:然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酹 置361C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24士 2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無 桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。報告根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN僉索表，報告每100mL(g)大腸菌群的MPN 表1)000305900013000260003900103051300116001290013120020600219002212002316003

13、090031130032160033190100405200101701021010211010315011070102301111103036011215011：31902009010360201140303702022002032603002304012003013907013003026401503800303950注1:本表米用3個稀釋度1mL(g)、0.1mL(g)、0.01mL(g),每稀釋度三管1大腸菌群能數(shù)(MPN注2:表內(nèi)所列數(shù)量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)時，表內(nèi)數(shù)字應相應降低 10倍;如改用0.1mL(g)、0.01mL(g)、0.001mL(g)

14、時,則表內(nèi)數(shù)字應相應增加 10 倍。其余可類推。表附件3附件3GB/T4789.15-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)1范圍本標準規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本標準適用于食品中大腸菌群的測定。2引用標準GB 4789.28食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑3設(shè)備和材料冰箱：04C。恒溫培養(yǎng)箱：2528C。恒溫振蕩器。顯微鏡：10X100X架盤藥物天平：0500 g ,精確至0.5 g0滅菌具玻塞錐形瓶：300 mL。滅菌廣口瓶：500 mLo 。滅菌吸管：1 mL (具0.01 mL刻度)、10 mL (具0.1 mL刻度)滅菌平皿。滅菌試管：16mmX160m m載玻片、

15、蓋玻片。滅菌牛皮紙袋、塑料袋。滅菌金屬勺、刀。培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，附加抗菌素按 GB/T 4789.28中4.78規(guī)定孟加拉紅培養(yǎng)基：按 GB/T 4789.28中4.25瀝規(guī)定。滅菌蒸儲水。檢驗程序檢樣糧食塊狀食品粉狀食品液狀食品糊狀食品25g+225ml無菌水25ml+225ml 無菌水做成幾個適當倍數(shù)的稀釋液 選擇三個適宜稀釋度，各取1mL加入滅菌平皿內(nèi)每皿加入適量培養(yǎng)基（可先用馬鈴薯-葡萄糖瓊脂附加抗菌素、高鹽察氏培養(yǎng)基或孟培養(yǎng)基）菌落計數(shù)25C 28 c 5d報告6操作步驟以無菌操作將檢樣25mL俄g）放于含有225mL滅菌生理鹽水的具塞錐形瓶中 30min,即為1

16、 ： 10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1 ： 10稀釋液10mL注入滅菌試管中，另用1mL滅菌吸管 吸50次，使霉菌抱子充分散開。取1mL1： 10稀釋注入含有9 mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸 此液為1: 100稀釋液。按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支 1mL滅菌吸管， 樣品污染情況的估計，選擇三個合適的稀釋度，分別在做 10倍稀釋的同時，吸取1 液于滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿，然后將晾至 45c左右的培養(yǎng)基注入平皿 轉(zhuǎn)動平皿使之與樣液混勻，待瓊脂凝固后，倒置于 2528c溫箱中，3d后開始觀察 養(yǎng)觀察5d。計算方法：通常選擇菌落數(shù)在10150之間

17、的平皿進行計數(shù)，同稀釋度的兩個平皿菌落平均 稀釋倍數(shù)，即為每克（或毫升）檢樣中所含霉菌和酵母數(shù)。稀釋度選擇及菌落報告方 考 GB/T4789.2。報告：每克（或毫升）食品所含霉菌和酵母數(shù)以cfu/g（mL）。食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定發(fā)布單位：太原市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局報送時間：2007年12月19日瀏覽次數(shù):342附件1GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗菌落總數(shù)測定1范圍本標準規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法。本標準適用于各類食品中菌落總數(shù)的測定。2術(shù)語菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度彳 pH需氧性質(zhì)等)，所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總

18、數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得 只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判定食品被污染程度的標志，也可以應用這一方法觀察細菌在繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價時提供依據(jù)。3引用標準GB/T 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料冰箱：04C。恒溫培養(yǎng)箱：361CO恒溫水浴鍋：461CO均質(zhì)器或滅菌乳缽。架盤藥物天平：0g500g,精確至0.5g。菌落計數(shù)器。放大鏡4X。滅菌吸管：1 mL （具0.01 mL刻度）、10 mL （具0.1 mL刻度）滅菌錐形瓶：500 mL。滅菌玻璃珠。5 mm滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm滅菌試管

19、。16X16 mm廣口瓶或三角瓶：容量為 500mL電爐。試管架。酒精燈。滅菌鐐子、滅菌刀或剪子等。5培養(yǎng)基和試劑營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按 GB/T4789.28中4.7規(guī)定。磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB/T4789.28中3.22規(guī)定。0.85%滅菌生理鹽水。75濃醇。6檢驗程序菌落總數(shù)的檢驗程序如下。檢樣選擇23個適宜的稀釋度各取1 mL分別加入滅菌培養(yǎng)皿內(nèi) 做成幾個適當倍數(shù)的稀釋液每皿內(nèi)加入適量營養(yǎng)瓊脂菌落計數(shù)36C 1 C 48h 土 2h報告7操作步驟檢樣稀釋及培養(yǎng)以無菌操作，取樣25mW 25 g放入225mL滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分振搖作成 1: 均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置

20、均質(zhì)器中以8000r/min10000r/min的速度處理 1min,做成1:10的均勻稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1 ： 10稀釋液1mL沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽2 其他稀釋液的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管，混合均勻，做成 100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做 10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一 即換用1支1mL火菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)吮疚廴厩闆r的估計，選擇23個適宜稀釋度，分做10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后，應及時將涼至 46c營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于4

21、61C水* 溫）注入平皿約15mL并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有 1mL稀 的滅菌平皿內(nèi)作空白對照待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置 36 1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)482h。菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。菌落計數(shù)的報告平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平 應采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌布又很均勻，即可計算半個平板后乘 2以

22、代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時 落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則 每條鏈作為一個菌落計。稀釋度的選擇應選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1 1）。若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，則視兩者之比如何來決 若其比值小于或等于2,應報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字（見表中例 3）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300,則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以 釋倍數(shù)報告之（見表1中例4）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以倍數(shù)報告之（見表1中例5）。若所有稀釋度均

23、無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之（見表1 6）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，其中一部分大于300或小時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例7）。菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用 10的指數(shù) 示（見表1中“報告方式”欄）。表1稀釋度選擇及菌落數(shù)報告方式例 次稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液 之比菌落總數(shù)cfu/g(mL)報告方式cfu/g(mL)10-110-210-31多/、口計1642016 40016000 或 1.6X

24、1042多/、口計295461.637 75038000 或 3.8X1043多/、可計271602.227 10027000 或 2.7X1044多/、可計多/、可計313313 0005310000 或 3.1X105271152702270 或 2.7X1060001X10107多/、可計3051230 50031000 或 3.1X104附件2GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸菌群測定1范圍本標準規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本標準適用于食品中大腸菌群的測定。2術(shù)語大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿 該菌主要來源于人畜糞便，故

25、以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN/示。3引用標準GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學檢驗染色法、培養(yǎng)基和試劑4設(shè)備和材料溫箱：36 1C。冰箱：04C。恒溫水?。?4.5 0.5 Co天平。顯微鏡。均質(zhì)器或乳缽。平皿：直徑為90mm試管。吸管。廣口瓶或三角燒瓶：容量為 500mL玻璃珠：直徑約5mm載玻片。酒精燈。試管架。5培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管：按 GB/T4789.28中4.9規(guī)定。伊紅美藍瓊脂平板：按 GB/T4789.28中4.25瀝規(guī)定乳糖發(fā)酵管：按 GB/T4789.2

26、8中4.10規(guī)定。EC肉湯：按 GB/T4789.28 中 4.11 規(guī)定。磷酸鹽緩沖稀釋液：按 GB/T4789.28中3.22規(guī)定。生理鹽水。革蘭氏染色液：按 GB 4789.28中2.2規(guī)定。6檢驗程序大腸菌群檢驗程序如下：（圖略）稀釋檢樣乳糖膽鹽發(fā)酵管36c 1C 48h 2h產(chǎn)氣大腸菌群陰性伊紅美藍瓊脂平板36c 1C 48h 2h不產(chǎn)氣報告革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管36c 1C 48h 2h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽胞桿菌產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性大腸菌群陰性報告報告報告7操作步驟檢樣稀釋以無菌操作將檢樣25mL俄g）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)予置適

27、當數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1 : 10的均 釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以 8 00010000r/min的速度處理1min,做成1 ： 10陽性管教MPN95%T信限7.1.2 用 滅菌吸管 1 ： 10 稀 1mL注入 9mL滅菌生 水或其他稀 的試管內(nèi)， 試管混勻，做成1 ： 100的稀釋液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換 支1mL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋 種3管。乳糖發(fā)酵試驗將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵1mL及1mL以下者

28、，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36 1C溫箱內(nèi)養(yǎng)24 2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者 按下列程序進行。分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36 1C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18:然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酹 置361C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24士 2h,觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無 桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。報告根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN僉索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN 表1）。1mL(g)X3

29、0.1mL(g)X30.01mL(g)X3100mL(g)下限上限00030590001300026000390010305130011600129001312002060021900221200231600309003113003216003319010040520010170102101021101031501107010230111110303601121501131902009010360201140303702022002032603002304012003013907013003026401503800303950注1:本表米用3個稀釋度1mL(g)、0.1mL(g)、0.01mL(g),每稀釋度三管注2:表內(nèi)所列數(shù)量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)時，表內(nèi)數(shù)字應相應降低10倍：如改用 0.1mL(g)、0.01mL(g)、0.001mL(g)時、1H表內(nèi)數(shù)字應相應增加10倍。其余可類推。1大腸菌群最可能數(shù)（MPN