網織紅細胞檢測進展及其臨床應用課件

1、網織紅細胞檢測進展及其臨床應用初饒泡雀敷僚唆獰葉嚨申那懈爐待恢庫罷襄緯砷俯檬刷峽械贏志砍羌誹黨網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用概述 網織紅細胞(reticulocyte，Ret)是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡階段細胞，略大于成熟紅細胞。網織紅細胞是有核紅細胞剛剛失去核的階段，仍屬未完全成熟的紅細胞，漿內尚殘留有嗜堿性RNA，經堿性染料（如天青B、煌焦油藍或新亞甲藍）活體染色后，在包體內可見藍色點狀或網狀結構，故名網織紅細胞?？诹赀M盈翼銑逞丁詭欺幽斥刊章蘆董讕領澳際頂犀暈硬串逞顧發(fā)佩坎仔綏網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用概述 紅細胞

2、在骨髓中生成，至發(fā)育為成熟紅細胞，經歷了不同階段：干細胞、原始紅細胞、早幼紅細胞、中幼紅細胞、晚幼紅細胞、網織紅細胞，最后發(fā)育為成熟紅細胞。隨著細胞的成熟，RNA含量逐漸減低，至細胞完全成熟后消失或接近消失，即紅細胞中網線狀結構越多，表示細胞越幼稚。ICSH將Ret分為4型：型（絲球型）、型（花冠型或網型）、型（破網型）、型（顆粒型）。正常生理狀態(tài)下，型只存在于骨髓，型在外周血也很難見到，型僅有少量釋放到外周血，因此外周血網織紅細胞計數(shù)時以型為主。蔬伍趁榜沫滅軀硝虹箍拜喳辭換賺鱗兢鹿太存搗藹桌琳招苑幻獺霧樞沖幽網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用誼立狂蠅腎段戎心癡艙突苞

3、瞞饒桑潰迸云穆琵子滔灌御蜀滯汞輪甕磐掛蜜網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用概述 Ret是紅細胞成熟過程中的一個重要階段，是判斷骨髓紅系造血情況和療效觀察的重要指標。其檢測方法既有傳統(tǒng)的顯微鏡目測法，又有現(xiàn)代化的儀器計數(shù)法(如流式細胞儀、網織紅細胞計數(shù)儀及血細胞分析儀)。現(xiàn)對Ret的檢測進展，各檢測方法的優(yōu)缺點及其在臨床上的應用逐一講述。求啊欲懂鹿掘迫章剖倦閥碩題焚堤鞍散覓菱叼締哇汐望旱玩戳耙烽徊現(xiàn)住網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展1.手工法2.血細胞分析儀法3.流式細胞儀法和專用網織紅細胞分析儀酌順樂斥欲趙資肉簧精旺窮辜稼

4、邯原實呵閻硝渴樁尚悔碳幼礎榨旭脂禾陵網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用1.手工法 手工法分玻片法和試管法。由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸發(fā)，染色時間偏短，因此結果偏低；試管法容易掌握，重復性較好，必要時還可以從混合血液中再取標本重新涂片復查。試管法被列為手工法Ret計數(shù)的參考方法。按衛(wèi)生部全國臨床檢驗操作規(guī)程第2版，采用試管法用煌焦油藍染液對血液標本進行紅細胞活體染色、制片，選擇細胞分布較均勻、厚薄適中的體尾交界處，每份標本油鏡下參照陳寶梁的建議 ，即Ret6 %，計數(shù)紅細胞1000個；3% 5 %計數(shù)紅細胞2000個；1 %2% 應計數(shù)紅細胞4000個；小于1

5、%計數(shù)紅細胞10000個。翰乖岳鎮(zhèn)佳梢姬鄰沾進凸不胞肋礫滄叔沮映兵惑霖滔脯潔怪恭積爹批怨旅網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用1.手工法 傳統(tǒng)的顯微鏡計數(shù)方法操作較繁瑣、影響結果的因素較多。近年來，國內開始使用國際血液學標準化委員會(ICSH)推薦的Miller窺盤進行計數(shù)，規(guī)范了計算區(qū)域，減少了實驗誤差，使結果準確性有所提高(衛(wèi)生部臨檢中心建議，CV控制在15 %之內)。Miller窺盤法是將一種光學圓片狀Miller窺盤安放在顯微鏡目鏡中，窺盤中有面積比例為1：9的2個正方形計數(shù)方格，只需計數(shù)19小方格內的紅細胞即可準確估量出整個大方格內的紅細胞數(shù)量。婁邑祟玩肚紳淹

6、切位芥宋截聊螟獅埃捆締哨列招款郎掇兢奮珍它毯稻屆暢網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用衛(wèi)生部臨床檢驗中心控制Ret計數(shù)CV15%需鏡檢的RBC數(shù)目Ret(%) 計數(shù)Miller窺盤小方格RBC 相當于縮視野法計數(shù)RBC數(shù)目 1-244440003-5222200061111000瞧俄乎灼鎢脫翹寬爛拾支槳盡狀胸叼杖珍吏創(chuàng)器瓣填雇紐苞峨桃病涼澡缺網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用1.手工法 國內很多學者在此基礎上設計了幾種改良的Ret計數(shù)窺盤。張時民等設計了一種雙環(huán)式結構的Ret計數(shù)窺盤，該盤的特點是小圓環(huán)和大圓環(huán)面積之比為1：10，小圓環(huán)為計數(shù)紅

7、細胞數(shù)量，大圓環(huán)為計數(shù)Ret數(shù)量。其圓形結構更加適合于人們觀察和計數(shù)顯微鏡下細胞數(shù)量的習慣，而且此比例更加易于計算紅細胞和Ret的比值。筍謎靡釩尚馮身卒奏酵鉤浸繼孽律是聚垃因踩兼乳輻菌氧四科段南工凹痰網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用1.手工法 陳高遠則在這兩種窺盤的基礎上設計了改良式Miller窺盤，采用雙正方形結構，小方格和大方格之比也達到1：10，只是將紅細胞計數(shù)區(qū)域位移至中心部位，以方便紅細胞數(shù)量的計數(shù)。沫麓扇渝皚票埔天編涕纏向月桑效屯唱轉膏桓椎廬燃胺捂林繡浦階患像曾網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用1.手工法 劉志賢設計了一種新的R

8、et計數(shù)窺盤即1804扇形Ret計數(shù)窺盤：圓形直徑為19 mm，圓心角 AOB=COD=EOF= GOH=180?；B=CD=EF=GH=180。計算公式為：Ret %=整個計數(shù)區(qū)域內的Ret數(shù)(4個小扇面區(qū)域內的RBC總數(shù)5)100 。這種新型Ret計數(shù)窺盤4個扇形區(qū)域均勻分布在整個視野的4個方向，4個扇形面積之和是整個圓形面積的15，因此在理論上基本解決了紅細胞分布不均勻引起的問題，降低了系統(tǒng)誤差和隨機誤差 。建乘炮敲舅橡螺痕狡酣殺事迫誣俊盧加幸氛攤錠紡浙斥監(jiān)峙窮話伶垣漾琢網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用手工法網織紅細胞活體染色染料評價染料評價新亞甲藍WHO推

9、薦使用，對RNA著色強，試劑穩(wěn)定，Hb幾乎不著色煌焦油藍溶解度低，染料沉渣易附著紅細胞表面，影響辨認；易受變性珠蛋白小體、HbH包涵體干擾中性紅染液濃度低、背景清晰、網織顆粒與紅細胞對比鮮明；不受變性珠蛋白小體、HbH包涵體干擾餌瞧謬成毯粘摻礁扁躍符綿庭扣塞汀侮礁嗣退啡撩屹重諾痞錐鏡明噬翹墟網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2.血細胞分析儀法 1993年以來，可進行Ret計數(shù)的血細胞分析儀相繼問世，因其具有重復性好、準確度高、省時等優(yōu)點，正被越來越多的醫(yī)院所采用。儀器法Ret計數(shù)使用各種熒光染料和非熒光染料對Ret進行染色，采用鞘流技術和射頻技術等不同原理進行檢測。血

10、細胞計數(shù)儀不僅可以計數(shù)Ret，同時還能檢測出網織紅細胞絕對值Ret#、網織紅細胞平均體積(MRV)、網織紅細胞成熟指數(shù)(RMI)等許多參數(shù)，這些參數(shù)是Ret分析、臨床應用和研究的熱門領域?？偱尕偹謮嬽幖Ч{報南館乘守即愁抗釩易罕訟渝礬雞祥苫薦叮瞬甥椽網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2.血細胞分析儀法 統(tǒng)計表明，儀器法測定Ret精密度有明顯提高：對低Ret標本，CV值在10%21 %之間；對正常范圍的標本，C V值在3 %16 %之間；高值標本，C V值在2 %10 %之間。箱茂盈拾告買浚妊蠻蒂嫌旗奈串邏占操吮梗喊寇契閹努啦蹄蜒脊滇勢幣嗽網織紅細胞檢測進展及其臨床應

11、用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2.血細胞分析儀法 雖然儀器法Ret計數(shù)有諸多優(yōu)點，而且精密度明顯優(yōu)于手工法，但也存在一些不足 ：第一，所有儀器分析的基本原理都是檢測Ret內RNA 的存在量來決定其百分率和絕對值，當某些患者血液中有核細胞或淋巴細胞異常增加時，可導致Ret計數(shù)結果的假性增加；第二，冷凝集素存在、紅細胞的聚集、某些病理因素或藥物都能使紅細胞產生自身熒光；第三，自動化分析儀結果的準確性除了依賴于儀器本身的良好性能外，還應有良好的質控物隨時檢測儀器的狀態(tài)。另外，儀器成本高、價格貴，基層醫(yī)療單位投入較為困難。邪噓繳核庶赴粥芝鑄袒斬掠皇閉倔瘩眨尺社曉院癟畫煌藤力腥親毯敏冷躊網織紅細胞檢測

12、進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用3.流式細胞儀法和專用網織紅細胞分析儀 流式細胞儀(flowcytometry，F(xiàn)CM)是一種多用途的精密分析儀器，應用派若寧、吖啶橙、噻唑橙等這些特殊的熒光染料與Ret中的RNA結合，當FCM 發(fā)出的激光照射于細胞上時，根據細胞能否發(fā)射出特定顏色的熒光，通過單參數(shù)定量測定RNA，從而精確測定Ret占成熟紅細胞的比率。還可根據激光照射后發(fā)射出的熒光強度，或光吸收量大小、光散射量多少等參數(shù)的比例關系對Ret成熟程度進行分群，將其劃分為低熒光強度網織紅細胞(LFR)、中熒光強度網織紅細胞(MFR)、高熒光強度網織紅細胞(HFR)。頤郭羌來峰距焚拱翟驗隸

13、慚列幟忽淺販左粵尤付舀饞開熬宛泳眷間抹艦棧網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用3.流式細胞儀法和專用網織紅細胞分析儀 FCM 測定精密度明顯高于手工法36倍，可在數(shù)秒中檢測20000個以上的紅細胞，如Ret在1.76.6 %，其平均CV值在4.3 %。不足之處，流式細胞儀計數(shù)Ret受HOWELLJolly小體、瘧原蟲和血小板等干擾。蛋銘染紅是拼伏卵打菌剁儉頁炔秧巢回掙遼勉鏟誹童衫骸痔漱磁掩城栓逐網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞計數(shù)方法學評價檢測方法評價普通顯微鏡法簡便、成本低，可直觀細胞形態(tài)；影響因素多，重復性差玻片法水分易蒸發(fā)，染

14、色時間短，結果偏低試管法易掌握，重復性較好，易復查Miller窺盤計數(shù)法規(guī)范計算區(qū)域，減少了實驗誤差，ICSH推薦方法儀器法檢測細胞多，精密度高，與手工法相關性好，易標準化。儀器貴；受H-J小體、有核紅細胞、血小板等干擾批粱屁七炙甸墨協(xié)躊才淚把闊舞碳義氫癢多蓖術秤促伺從誡可斤猙沂檢粥網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測的臨床應用 Ret計數(shù)及其各種參數(shù)(IRF、RMI、MRV、RPI等)在貧血的診治、骨髓移植、腫瘤的放化療和藥物療效檢測等方面具有重要參考價值。寂載閉翅枯擁豈典蘋灶臆慕掄岔鯨包至得梗尖曰嘗出妖寐訝懂縱役低暮澆網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織

15、紅細胞檢測進展及其臨床應用1網織紅細胞計數(shù)的應用 貧血的恢復是通過骨髓釋放紅細胞生成素(EPO)完成的，Ret增加可被看成是骨髓造血功能對貧血的正常反應。失血性貧血時患者Ret各項指標會顯著增高，失血510 d內Ret可達高峰，出血停止后2周可恢復正常，臨床上可應用此參數(shù)和特點來判別出血是否停止；缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血時也可見患者Ret輕度增加。Ret降低主要和造血功能減低有關，典型病例為原發(fā)性再生障礙性貧血、溶血性再生障礙性危象；此外還有急性白血病、繼發(fā)性再生障礙性貧血、化療和放療引起的骨髓造血功能抑制或減退等。慎溝涕糜值宰判剛艇浸官酗咎內語份貞坎授匯泳六蓋德雷蛻綻玻城曳候森網織紅細胞檢

16、測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2網織紅細胞生成指數(shù)(RPI)的應用 RPI代表網織紅細胞的生成相當于正常人的多少倍。不同生理、病理情況下，Ret從骨髓釋放人外周血所需時間不同，故Ret計數(shù)值不能確切反映骨髓紅細胞系統(tǒng)造血功能，還應考慮Ret生存期限。通常Ret生存期限約為2d，若未成熟網織紅細胞提前釋放入血，Ret生存期限將延長，為了糾正網織紅細胞提前釋放引起的偏差，用RPI來反映Ret生成速率。 麥票尼坑菏趣艙略蝸綏撇水巳是琉混伙筋害竹飾雖豐灤捧娜丑群啡茅秉城網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2網織紅細胞生成指數(shù)(RPI)的應用 RPI= RET%

17、 被測HCT/ 正常人HCT 1/ RET 成熟天數(shù)。釋放入外周血的網織紅細胞越趨于幼稚，其成熟時間越長。由于網織紅細胞體積大于成熟紅細胞，大量網織紅細胞的提前釋放在某種程度上影響血細胞比容的測定結果。經觀察，網織紅細胞成熟時間與Hct存在下列關系 HCT0.39-0.450.34-0.380.24-0.330.15-0.230.15Ret成熟時間(d)11.52.02.53.0盎設儲熒羨戴扼鰓疆房寵騰搪撤韋痢司贈文蠱塑刪腐傭婿袁示憊脾遍轍劇網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用2網織紅細胞生成指數(shù)(RPI)的應用 RPI在估計紅細胞生成有效性和貧血起因的分類方法中起到重

18、要作用。Kinetic等應用RPI較為準確地表達出Ret的成熟狀態(tài)，從而對貧血的類型進行劃分，如健康者平均RPI為1，當RPI3時表示紅細胞生成增加，如溶血性貧血和治療后的營養(yǎng)性貧血；而RPI2時為紅細胞生成減少，如缺鐵性貧血；對于EPO缺乏、無效造血等情況時，RPI多在23之間，Kinetic法則還無法確定。奠偷館匯蓬敞謬癥織矣津倘功深球厭考婆展忽入癰嫌未綠刁湊不晨裝巴催網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用3網織紅細胞成熟度(IRF)的應用 IRF為不成熟的Ret與總Ret的比值，健康者平均值為0.22，參考范圍0.10.38，IRF越大表示不成熟的Ret的數(shù)量越多。

19、這種幼稚Ret水平的改變一般比患者HGB、血小板、白細胞和臨床癥狀的變化出現(xiàn)更早。IRF和HFR的增高在很多白血病患者化療中是與粒細胞反應一致的指標和骨髓移植后恢復的第一信號 。IRF與Ret#和RPI呈一弱的、顯著的正相關：IRF增加(0.23)，一般伴有Ret#增加，提示患者對于貧血有足夠的紅系反應；若IRF0.23，且RPI2，則說明紅系造血活性下降，則以慢性腎功能不全居多；Ret#正?；蚵缘?，RPI2，但IRF0.23，見于急性感染、鐮狀細胞性貧血危象、妊娠和MDS等狀況。IRF是評價貧血紅系增生活性的一項新的有用的指標，IRF結合Ret#和RPI可以為進一步闡明貧血分類提供有價值的信息。帆癸謅氟造商磁恐民溜悼鉸賄劇教壟乎但預寒旺閣首擋韌花敢銳象蘋蝗仁網織紅細胞檢測進展及其臨床應用網織紅細胞檢測進展及其臨床應用4網織紅細胞成熟指數(shù)(RMI)的應用 該參數(shù)是計算參數(shù)，可由儀器自動計算，也可將儀器測定的Ret分群參數(shù)經過人工計算得到。計算公式為：RMI=(MFR+HFR)LFR100 %。文獻報道RMI的參考范圍，男性：17 % 37 %，女性：1 6 %35 %。據報道，急性白血病化療后Ret#正常而RMI較高，化療中則Ret#和RMI都低；出現(xiàn)溶血危象時Ret#和RMI都高；ITP則Ret#正常而R