現(xiàn)代分離分析技術(shù)考試

1、LC-MS的分類(lèi)及其各自的特點(diǎn)其分類(lèi)有液相色譜-四級(jí)桿質(zhì)譜儀，液相色譜-離子阱質(zhì)譜儀，液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀， 以及各種各樣的液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。各自特點(diǎn)如下：液相色譜-四級(jí)桿質(zhì)譜儀中 四級(jí)桿質(zhì)量分析器的主要優(yōu)點(diǎn)是可在較低的真空度下工作；掃描速度快結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、 體積小、自動(dòng)化程度高。主要缺點(diǎn)是分辨率低于雙聚焦質(zhì)量分析器；質(zhì)量范圍較窄， 一般為101000amu ；不能提供亞穩(wěn)離子信息。在LC-MS中使用較廣泛的串聯(lián)四級(jí)質(zhì)量分析器的優(yōu)點(diǎn)是比單級(jí)質(zhì)量分析器的選擇性更高， 使質(zhì)譜中化學(xué)噪音降低從而得到高的多的靈敏度，方便改變離子的動(dòng)能，掃描速度快，體 積小。缺點(diǎn)是質(zhì)量范圍及分辨率有限，不能進(jìn)

2、行高分辨測(cè)定。液相色譜-雙聚焦質(zhì)譜儀雙聚焦質(zhì)量分析器由電場(chǎng)和磁場(chǎng)共同實(shí)現(xiàn)質(zhì)量分離的分析器， 同時(shí)具有方向聚焦和能量聚焦作用。雙聚焦分析器的優(yōu)點(diǎn)是分辨率高，缺點(diǎn)是掃描速度 慢，操作、調(diào)整比較困難,而且儀器造價(jià)也比較昂貴。液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜儀飛行時(shí)間質(zhì)量分析器的特點(diǎn)是質(zhì)量范圍寬，掃描速度快，既不 需電場(chǎng)也不需磁場(chǎng)。目前，通過(guò)采取激光脈沖電離方式，離子延遲引出技術(shù)和離子反射技 術(shù)，具有很高的靈敏度液相色譜-離子阱質(zhì)譜儀離子阱的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)小巧，質(zhì)量輕，靈敏度高，而且還有多級(jí)質(zhì) 譜功能，對(duì)于物質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒定非常有用。傅里葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀（FT-ICRMC）:低準(zhǔn)確率、較寬的質(zhì)量范圍及較高的分

3、 辨率。全二維氣相色譜技術(shù)全二維氣相色譜（GCXGC）是把分離機(jī)理不同而又互相獨(dú)立的兩支色譜柱以串聯(lián)方式結(jié)合成 二維氣相色譜，在這兩支色譜柱之間裝有一個(gè)調(diào)制器，這個(gè)調(diào)制器起捕集再傳送的作用。 經(jīng)第1支色譜柱分離后的每一個(gè)餾分，都需先進(jìn)入調(diào)制器，進(jìn)行聚焦后再以脈沖方式送到第 2支色譜柱中進(jìn)行進(jìn)一步的分離。所有組分從第2支色譜柱進(jìn)人檢測(cè)器。信號(hào)經(jīng)數(shù)據(jù)處理系 統(tǒng)處理后，得到以第1支柱上的保留時(shí)間為第一橫坐標(biāo)，第2支柱上的保留時(shí)間為第二橫坐 標(biāo)，信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的三維色譜圖，或二維輪廓圖。全二維氣相色譜技術(shù)的關(guān)鍵部件是調(diào)制器調(diào)制器需滿(mǎn)足的條件是：（1）能定時(shí)濃縮從第1根 柱流出的分析物；（2）能轉(zhuǎn)移很

4、窄的區(qū)帶到第2根柱的柱頭，起第二維進(jìn)樣器的作用；（3）聚 焦和再進(jìn)樣的操作應(yīng)是再現(xiàn)的，且非歧視性的。發(fā)展如果在一臺(tái)儀器上同時(shí)具有熱調(diào)制和冷調(diào)制的功能，對(duì)GCxGC擴(kuò)展樣品分析的范圍將 非常有幫助。同時(shí)，全自動(dòng)的、用戶(hù)界面友好的、能處理由GCxGC檢測(cè)器產(chǎn)生的大量數(shù)據(jù)的 軟件程序（工作站）尚需進(jìn)一步的發(fā)展、完善?；瘜W(xué)計(jì)量學(xué)如模式識(shí)別有助于快速識(shí)別輪廓 圖中的化合物組成。GCXGC與選擇性檢測(cè)器的聯(lián)用將進(jìn)一步增強(qiáng)其有用性，從而減少樣品 制備的時(shí)間。TOF-MS與GCXGC聯(lián)用對(duì)二維色譜的定性分析將非常有幫助。完全可以說(shuō)， GCxGC技術(shù)的將來(lái)是非常光明的。峰容量大。具一次進(jìn)樣分出一萬(wàn)多個(gè)峰的能力。

5、靈敏度高。比通常的一維色譜提高2050倍。分析時(shí)間短，定性可靠性強(qiáng)，一個(gè)GCXGC方法可覆蓋幾個(gè)ASTM方法。定性可靠性大大增強(qiáng)。三個(gè)因素對(duì)此起作用，第一，大多數(shù)目標(biāo)化合物和化合物組 可基線(xiàn)分離，減少了干擾。第二，峰被分離成容易識(shí)別的模式。第三，一個(gè)峰相對(duì)于同族 的其它成員來(lái)說(shuō)，在每次運(yùn)行中其位置是穩(wěn)定的。由于系統(tǒng)能提供的高峰容量和好的分辨率，一個(gè)方法可覆蓋原來(lái)要幾個(gè)ASTM方法才 能做的任務(wù)。到目前為止，已有很多GC GC應(yīng)用的例子。其有用性正逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，可能的應(yīng)用領(lǐng) 域會(huì)比已開(kāi)展的廣泛的多。一般來(lái)說(shuō)，當(dāng)樣品中物質(zhì)的個(gè)數(shù)多于100時(shí)，使用GC GC會(huì)比一 維GC好得多。當(dāng)柱系統(tǒng)選擇得當(dāng)

6、時(shí)，此種技術(shù)更適于需族分離的復(fù)雜樣品分析。即使樣品 中物質(zhì)個(gè)數(shù)在30100間，GC GC也會(huì)具顯著優(yōu)越性。盡管GC GC最適合于分離復(fù)雜混合 物，但它也適用于對(duì)相對(duì)簡(jiǎn)單的混合物進(jìn)行快速掃描分析。加壓毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn)（毛細(xì)管電色譜以?xún)?nèi)含色譜固定相的毛細(xì)管為分離柱，靠外加電場(chǎng)作用于毛細(xì) 管內(nèi)壁的雙電層而產(chǎn)生的電滲流來(lái)驅(qū)動(dòng)緩沖溶液，使帶電物質(zhì)因電泳淌度的差 異而得到分離既可以分離帶電物質(zhì)也可以分離中性物質(zhì)。與液相色譜相比，采 用推動(dòng)流動(dòng)相，使流動(dòng)相流形呈柱塞狀，大大地減少了色譜過(guò)程中的峰展寬， 同時(shí)因不受柱內(nèi)反壓的限制，可使用比液相色譜更小顆粒的填料，使柱效、分 辨率、峰容量和分離速度都得到極大的

7、提高。它結(jié)合了毛細(xì)管電泳和高效液相 色譜兩者的優(yōu)點(diǎn)，兼具高柱效、高分辨率、高選擇性和高峰容量的特點(diǎn)，同時(shí) 具有色譜和電泳的雙重分離機(jī)理。然而，“純粹”的電色譜在實(shí)際應(yīng)用中有著 天然的弱點(diǎn)，即：在電流通過(guò)毛細(xì)管柱中的流動(dòng)相時(shí)容易產(chǎn)生氣泡（焦耳熱作 用），從而使電流中斷和電滲流停止，毛細(xì)管柱必須被重新用流動(dòng)相潤(rùn)濕后方 能再次使用。加壓毛細(xì)管電色譜將液相色譜中的壓力流引入系統(tǒng)中，不僅解決 了氣泡、干柱等問(wèn)題，而且實(shí)現(xiàn)了定量閥進(jìn)樣和二元梯度洗脫。pCEC是電動(dòng)分 離與液相色譜技術(shù)的理想結(jié)合，具有高柱效、高選擇性、高分辨率、快速分離 的特點(diǎn)，在一臺(tái)儀器上可同時(shí)實(shí)現(xiàn)PCEC, CEC和微徑液相色譜三種功能

8、；它的 溶劑和樣品的消耗量只有液相色譜的萬(wàn)分之一。）中藥質(zhì)量控制有哪些模式、缺陷、改進(jìn)、例子。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法是否適合于相應(yīng)檢測(cè) 要求。在建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方需經(jīng)驗(yàn)證；在處方、工藝等變更或改變 原分析方法時(shí)，也需對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥 品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明或修訂說(shuō)明中。需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、限量檢查和含量測(cè)定，以及其他需控制 部分（如殘留物、添加劑等）的測(cè)定。中藥制劑溶出度、釋放度等檢查中，其 溶出量等檢測(cè)方法也應(yīng)作必要驗(yàn)證。驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù) 性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線(xiàn)性、范圍和

9、耐用 性。目前的模式：目前中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)模式卻僅停留在對(duì)藥材或制劑本身 的穩(wěn)定性和一致性的檢測(cè)上，即注重對(duì)中藥成分的分析和檢測(cè)，對(duì)其進(jìn)行定性 和定量的研究。隨著行業(yè)的不斷發(fā)展，中藥質(zhì)量控制的基本模式又向著參照植 物藥的質(zhì)量控制方式，結(jié)合化學(xué)藥品的指標(biāo)分析和檢測(cè)進(jìn)行中藥的定性、定量 的研究。缺陷：忽略了中藥個(gè)體與整體的不一致性。它并不像西藥通過(guò)簡(jiǎn)單的化學(xué) 結(jié)構(gòu)分析就能準(zhǔn)確的定位出藥品的性狀和結(jié)構(gòu)原理，而是根據(jù)不同的條件就會(huì) 呈現(xiàn)出完全不同的用藥結(jié)果。對(duì)于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥，尤其是復(fù)方制劑， 卻不能建立由檢測(cè)部分活性成分體現(xiàn)整體療效的方法。中藥與化學(xué)藥品有著本 質(zhì)的區(qū)別，即使在明確有效成分的

10、中藥中，也存在著量效關(guān)系不明確或本身沒(méi) 有量效關(guān)系等現(xiàn)象。如何改進(jìn)：因此，以點(diǎn)蓋面的研究方式不適應(yīng)建立健康、安全的中藥質(zhì)量 控制與評(píng)價(jià)模式，只有明確中藥的質(zhì)控方向，采用多元化的質(zhì)控策略，通過(guò)反 復(fù)的研究與臨床實(shí)踐，才能在漫長(zhǎng)的中藥研究之路中找到捷徑，實(shí)現(xiàn)真正的突 破。建立基于道地藥材和生物效價(jià)檢測(cè)的中藥質(zhì)量管理模式：生物效價(jià)檢測(cè)方 法以其穩(wěn)定的適應(yīng)性、靈活性和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性而不僅在生物制劑中得到廣 泛的應(yīng)用，更滲透到了中藥質(zhì)量管理中。從常規(guī)、化學(xué)和生物三重角度出發(fā)， 借鑒生物制品生產(chǎn)質(zhì)量管理模式，層層把關(guān)的建立基于道地藥材和生物效價(jià)檢 測(cè)的中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)模式，對(duì)于補(bǔ)充和完善現(xiàn)行中藥質(zhì)量控

11、制、改善評(píng)價(jià) 標(biāo)準(zhǔn)有著積極有效的促進(jìn)作用。道地藥材參照物的采集與標(biāo)定應(yīng)在遵循中國(guó) 藥典的基礎(chǔ)上采取整體抽樣與典型抽樣相結(jié)合的方式，發(fā)表論文.進(jìn)行化學(xué)分 析及生物效價(jià)的原始標(biāo)定，從而確定道地藥材參照物的屬性。方法和標(biāo)準(zhǔn)的篩 選應(yīng)本著快速、有效、客觀、適應(yīng)性高、可量化，重現(xiàn)性好等原則，根據(jù)所選 中藥的藥理作用，開(kāi)展常規(guī)藥效藥理學(xué)試驗(yàn)，以驗(yàn)證生物效價(jià)檢測(cè)方法所得結(jié) 論的客觀性和可靠性，篩選便捷、穩(wěn)定、高效、經(jīng)濟(jì)、適用性強(qiáng)、通用性好的 生物效價(jià)檢測(cè)方法，從而得出準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。在藥典常規(guī)檢測(cè)和化學(xué)組份檢 測(cè)的基礎(chǔ)上，選取與中藥主治功能相似、與中藥毒副作用相關(guān)、與中藥有效 性、安全性相連的生物效價(jià)檢測(cè)指

12、標(biāo)和方法，建立基于道地藥材和生物效價(jià)檢 測(cè)的中藥有效性評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)，從而構(gòu)建安全、穩(wěn)定、有效、統(tǒng)一的中藥質(zhì) 量管理模式。另外，仿生物制劑生產(chǎn)質(zhì)量管理模式的中藥生產(chǎn)質(zhì)量全程控制管 理體系的構(gòu)建也是影響中藥質(zhì)量控制模式的因素之一。在藥典常規(guī)檢測(cè)基礎(chǔ)上，分別從原料藥、半成品、成品的質(zhì)量控制管理三方面入手，增加化學(xué)檢測(cè) 及生物學(xué)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)化學(xué)和生物學(xué)雙管齊下的管理方式。中藥指紋圖譜的特點(diǎn)及分類(lèi)按應(yīng)用對(duì)象分類(lèi)，可分為中藥材指紋圖譜、中藥原料指紋圖譜、中間產(chǎn)品指紋圖譜、中藥 制劑指紋圖譜。根據(jù)測(cè)定時(shí)所采用的分析手段不同，可分為中藥生物指紋圖譜和中藥化學(xué) 指紋圖譜。中藥生物指紋圖譜包括中藥材DNA指紋圖譜

13、、中藥基因組學(xué)指紋圖譜、中藥蛋 白組學(xué)指紋圖譜；中藥化學(xué)指紋圖譜又可以分為中藥光譜指紋圖譜、色譜指紋圖譜、波譜 指紋圖譜、以及采用多種現(xiàn)代分析儀器聯(lián)用得到的多維多息特征譜。中藥指紋圖譜的特點(diǎn)：整體性中藥指紋圖譜提供的信息應(yīng)該是比較全面的，其所代表或反 映的化學(xué)成分應(yīng)包括該中藥所含的主要成分類(lèi)型。同樣，在利用指紋圖譜進(jìn)行中藥鑒別 時(shí)，也必須考慮到中藥指紋圖譜的完整性，要完整地比較指紋圖譜的特征面貌，而不是將 其肢解后過(guò)多地注意局部和枝節(jié)，要抓大放小，“求大同，存小異”。特征性是指中藥指 紋圖譜所反映或標(biāo)示的該中藥化學(xué)成分種類(lèi)和數(shù)量的信息應(yīng)是具有高度選擇性的。這種高 度選擇性就類(lèi)似于人的指紋。同樣

14、，每味中藥所含化學(xué)成分種類(lèi)和數(shù)量不同，建立的中藥 指紋圖譜就應(yīng)有差異。將指紋圖譜中各色譜峰所包含的信息提取出來(lái)，加以綜合分析比 較，就可建立該中藥的特征性的“化學(xué)條碼”。這樣的“化學(xué)條碼”，對(duì)我們特征性地區(qū) 分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣非常有好處。模糊性是中藥指紋圖譜的重要屬性之一。穩(wěn)定性是指在 規(guī)定的實(shí)驗(yàn)方法與檢測(cè)條件下建立的中藥指紋圖譜，在不同的操作者和不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有 可重復(fù)性，其誤差應(yīng)在允許的范圍內(nèi)，這樣才能保證指紋圖譜的通用性和實(shí)用性。（專(zhuān)屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性好）UPLC的特點(diǎn)超高效液相色譜（UPLC），與傳統(tǒng)的HPLC技術(shù)相比，提供了更高的效率，因而 具有更強(qiáng)的分離能力。作為世界第一個(gè)商

15、品化UPLC產(chǎn)品的Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜系統(tǒng)，利用創(chuàng)新技術(shù)進(jìn)行整體設(shè)計(jì)，大幅度地改善了液 相色譜的分離度、樣品通量和靈敏度。UPLC的商品化，是分離科學(xué)和技術(shù)的巨 大進(jìn)步，液相色譜亦由此進(jìn)入了全新的時(shí)代?；?.7 p m小顆粒技術(shù)的 UPLC，與人們熟知的HPLC技術(shù)具有相同的分離原理。不同的是：UPLC不僅比 傳統(tǒng)HPLC具有更高的分離能力，而且結(jié)束了人們多年不得不在速度和分離度之 間取舍的歷史。使用UPLC可以在很寬的線(xiàn)速度、流速和反壓下進(jìn)行高效的分離 工作，并獲得優(yōu)異的結(jié)果。UPLC具有以下優(yōu)點(diǎn)：一、超高分離度UPLC發(fā)揮了 1.7 p m顆粒提供柱效

16、增高的全部?jī)?yōu)越性。尤其是1.7p m顆粒提 供的柱效比5p m顆粒提高了 3倍。因?yàn)榉蛛x度與粒度的平方根成反比，1.7 p m顆粒的分離度比5p m顆粒提高了 70%。在梯度分離中也具有同樣的優(yōu)越 性，此時(shí)分離能力用峰容量衡量。UPLC用1.7p m顆粒提高了分離能力，可以 分離出更多的色譜峰，從而對(duì)樣品提供的信息達(dá)到了一個(gè)新的水平。而且又最 大地縮短了開(kāi)發(fā)方法所需的時(shí)間。二、超高速度由于UPLC系統(tǒng)用1.7p m顆粒，柱長(zhǎng)可以比用5p m顆粒時(shí)縮短3倍而保持柱效 不變，而且使分離在高3倍的流速下進(jìn)行，結(jié)果使分離過(guò)程快了多倍而分離度 保持不變。其快速分析亦節(jié)省了以往一向耗時(shí)的方法認(rèn)證的時(shí)間，使

17、方法認(rèn)證 變得簡(jiǎn)單快速。三、超高靈敏度UPLC使用小顆粒技術(shù)可以得到更高的柱效（因而改善了分離度）、更窄的色譜 峰寬，即更高的靈敏度。因?yàn)樯V峰變得更窄，峰高也就更高了；同樣，當(dāng) UPLC用于快速分析、用較短色譜柱而使柱效不變時(shí)，色譜峰高會(huì)相應(yīng)增加。因 此，使用UPLC技術(shù)，不僅可以在保持與HPLC相同分離度時(shí)提高峰高，而且在 改善分離度的同時(shí)亦可提高峰高即靈敏度。四、成本節(jié)省因?yàn)橐陨先c(diǎn)優(yōu)勢(shì)，可以更快,更高效分離樣品，所以節(jié)省很多溶劑，而且進(jìn)樣量 減少，可以節(jié)省樣品。此外，UPLC與Q-TOF （四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀）聯(lián)用之后，能提高質(zhì)譜分 析的靈敏度，這也是UPLC具有的優(yōu)勢(shì)的體現(xiàn)。結(jié)

18、合自己分析現(xiàn)代分離分析技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用隨著藥物現(xiàn)代化研究的不斷深入及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的升級(jí)，藥物產(chǎn)品的國(guó)際化，需 要以科學(xué)的方法制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以闡明其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。尤其是中藥制劑的 成分復(fù)雜，有效成分難以確定，單方制劑也是由多種成分組成的混合物，因此， 要求更嚴(yán)格和更先進(jìn)的分離分析手段進(jìn)行定性、定量。現(xiàn)代分離分析技術(shù)在藥 物研究中被大量采用，為促進(jìn)藥物質(zhì)量提高起了很重要的作用。1、其中高效微量現(xiàn)代分離分析技術(shù)使中藥及天然藥物有效成分的分離分析 的速度和精度明顯提高，如薄層色譜、氣相色譜、高效毛細(xì)管色譜等已得到普 遍應(yīng)用。薄層色譜具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，信息量大，單次操作樣品數(shù)多，操作 成本低的特點(diǎn)

19、。氣相色譜因具有高的分離效能已成為中藥指紋圖譜研究的主要 手段。2、而超臨界色譜、高效逆流色譜、高效毛細(xì)管電泳、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等 現(xiàn)代分離分析技術(shù)也開(kāi)始在中藥研究中得到廣泛的應(yīng)用。超臨界色譜即可分析 GC不適用的高沸點(diǎn)、低揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的樣品，又比HPLC具有更高的柱效及更 快的分析速度。高效毛細(xì)管電泳具有分析時(shí)間短，分析效率高，溶劑消耗少， 自動(dòng)化程度高和運(yùn)轉(zhuǎn)費(fèi)用低等特點(diǎn)。怎樣用LC-MS測(cè)定中藥復(fù)雜成分，可舉例說(shuō)明用LC-MS進(jìn)行定量分析，其基本方法與普通液相色譜法相同。即通過(guò)色譜峰面積和校正因子 (或標(biāo)樣)進(jìn)行定量。但由于色譜分離方面的問(wèn)題，一個(gè)色譜峰可能包含幾種不同的組 份，給定量

20、分析造成誤差。因此，對(duì)于LC-MS定量分析，不采用總離子色譜圖，而是采用與 待測(cè)組分相對(duì)應(yīng)的特征離子得到的質(zhì)量色譜圖或多離子監(jiān)測(cè)色譜圖，此時(shí)，不相關(guān)的組分 將不出峰，這樣可以減少組份間的互相干擾，LC-MS所分析的經(jīng)常是體系十分復(fù)雜的樣品， 比如血液、尿樣等。樣品中有大量的保留時(shí)間相同、分子量也相同的干擾組分存在。為了 消除其干擾，LC-MS定量的最好辦法是采用串聯(lián)質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)技術(shù)。即，對(duì)質(zhì) 量為ml的待測(cè)組份做子離子譜，從子離子譜中選擇一個(gè)特征離子m2。正式分析樣品時(shí)，第 一級(jí)質(zhì)譜選定ml，經(jīng)碰撞活化后，第二級(jí)質(zhì)譜選定m2。只有同時(shí)具有ml和m2特征質(zhì)量的離 子才被記錄。這樣得

21、到的色譜圖就進(jìn)行了三次選擇：LC選擇了組份的保留時(shí)間，第一級(jí)MS 選擇了皿1，第二級(jí)MS選擇了皿2,這樣得到的色譜峰可以認(rèn)為不再有任何干擾。然后，根據(jù)色 譜峰面積，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。此方法適用于待測(cè)組份合量低，體系組份 復(fù)雜且干擾嚴(yán)重的樣品分析。比如人體藥物代謝研究，血樣，尿樣中違禁藥品檢驗(yàn)等。圖 9.24是采用MRM技術(shù)分析的例子，上圖為樣品的總離子色譜圖，下圖為選定特征離子m/z309 和m/z241后，利用MRM得到的色譜圖吳勝明等建立了 HPLC-MS法對(duì)大鼠血漿中槲皮素的含量測(cè)定方法，測(cè)定條件是 WatersXtter2ra (2. 1 mm X 150 mm, 5 p

22、 m)色譜柱，乙月青-1%乙酸水溶液流動(dòng)相(40 : 60)，流速0. 3 ml min- 1 , 40 C,進(jìn)樣量20p ,洗脫時(shí)間10 min。負(fù)離子模式，毛細(xì)管 電壓2. 81 kV,碰撞電壓30V,離子源溫度100C,定量采用多離子監(jiān)測(cè)技術(shù)(MRM)。本法靈 敏、快速，槲皮素的檢出限在7p g - L - 1以下。顧泳川等14 用HPLC2MS法研究了黃芪總苷中主要有效成分之一黃芪甲在SD大鼠體內(nèi)的 藥動(dòng)學(xué)過(guò)程，靜脈注射黃芪甲苷2. 0 mg - kg- 1后，9%的原型藥物經(jīng)尿排出，消除速率常數(shù)1( =0. 27 h- 1 ,腎排泄速率常數(shù)Ke = 2. 5 X10 - 2h- 1。沈嵐等15, 16 通過(guò)HPLC2MS研究發(fā)現(xiàn)麥冬的有效組分總皂苷進(jìn)入血液的一個(gè)重要代謝物 為薯蕷皂苷元，且尿中無(wú)原形藥存在,并研究了麥冬提取總皂苷制劑腸溶微球和混懸劑在大 鼠體內(nèi)的代謝情況,以薯蕷皂苷元為指標(biāo)，