葉綠素提取分離和理化性質(zhì)

1、學(xué)生姓名學(xué) 號 20062501302專 業(yè)生物科學(xué) 年級、班級06科三課程名稱植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)類型驗(yàn)證設(shè)計(jì)綜合 實(shí)驗(yàn)時(shí)間08年11月11日實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師冷佳奕、黃勝琴實(shí)驗(yàn)評分葉綠素提取分離和理化性質(zhì)實(shí)驗(yàn)材料：大葉紫薇葉片實(shí)驗(yàn)操作：稱取2g大葉紫 薇葉片加入碳酸鈣、石英砂、無水丙酮研磨過濾，取濾液分別觀察反射光和透射光的一側(cè)熒光現(xiàn)象取少量濾液于試管光破壞作用 取少量濾液于 2支試管分別置于強(qiáng)光與 黑暗處3h觀察試管中溶液 顏色的變化加濃鹽酸至溶液 出現(xiàn)褐綠色用酒精燈加熱，觀察試管中溶液 顏色的變化銅代反應(yīng) 取少量濾液于 試管色素分離取10ml濾液于盛 有20ml乙醚的分 液漏斗中，搖動

2、加入30ml蒸餾水，搖動，靜置 片刻棄去下層丙酮和 水用蒸餾水沖洗乙醚溶液2次加入5ml 30 %KOH甲醇溶液， 搖動，靜置10min加入10ml蒸餾水，搖動，靜置分離得到綠色素 和黃色素溶液分別測定390-770nm 的光譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果：熒光現(xiàn)象透射光一側(cè)呈綠色反射光一側(cè)呈血紅色光破壞作用黑暗處試管中溶液呈綠色強(qiáng)光處試管中溶液呈褐綠色銅代反應(yīng)試管中溶液顏色變化：褐綠色一綠色-理化性質(zhì)現(xiàn)象分析:44。虱汕湖640甌也波長蹄葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒W葉綠素的化學(xué)性質(zhì)很不穩(wěn)定，容易受強(qiáng)光的破壞，特別是葉綠素與蛋白質(zhì)分離后，破壞更快。葉綠素中的鎂可被H+取代而生成褐綠色的去鎂葉綠素。加入銅鹽作用

3、，去鎂葉綠素則成為綠色的銅代葉綠素。思考題:為什么用80%有機(jī)溶劑提取葉綠素？由于植物葉子中含有水分，用純丙酮提取，其提取液中丙酮最終濃度近似80%。在提取葉綠素過程中加碳酸鈣的作用？對量有何要求？加入碳酸鈣只要是為了保護(hù)色素，防止在研磨的過程中被破壞。加入少許即可， 若加入過多，會影響滲透壓破壞葉綠素。紙層析法分離葉綠素的原理？其中流動相和固定相分別是什么？利用混合物各組分在流動相和固定相兩種不同溶劑中的分配系數(shù)差異，將它們分 離。流動相是四氯化碳，固定相是濾紙上的水。為什么綠色葉子中的葉綠素在光下不被破壞？因?yàn)榫G色葉子中的葉綠素與蛋白質(zhì)結(jié)合，所以不被破壞。銅在葉綠素中取代鎂的作用，有何使用

4、意義？銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易被破壞，故常用此法制做植物的原色標(biāo)本學(xué)生姓名學(xué) 號 20062501302專 業(yè)生物科學(xué) 年級、班級06科三課程名稱植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)類型驗(yàn)證設(shè)計(jì)綜合 實(shí)驗(yàn)時(shí)間08年11月11日實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師冷佳奕、黃勝琴實(shí)驗(yàn)評分葉綠素含量的測定實(shí)驗(yàn)材料：大葉紫薇葉片實(shí)驗(yàn)操作：稱取0.1g大葉紫 薇葉片加入碳酸鈣、石 英砂、無水內(nèi)酮 研磨靜置10min80%內(nèi)酮定容至25ml過濾，取濾液測定OD663、OD645實(shí)驗(yàn)結(jié)果:OD6630.078OD6450.418代入公式得出葉綠素濃度C=12.7 OD662.69 OD645=-0.13382 mg/LC：=22.9 O

5、D：45-4.68 OD：= 9.20716 mg/LC：=8.02 OD：+20.21 oD；： 9.07334 mg/L代入公式得出葉綠素含量葉綠素含量=C X 25/100 X 1/w物質(zhì)含量(mg/g)葉綠素a葉綠素b葉綠素-0.033462.301792.268335分析：測定葉綠素含量的過程中造成的偶然誤差過大，測得數(shù)值代入公式后得出負(fù)值， 因此實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)盡量減少偶然誤差，可做平行實(shí)驗(yàn)求平均值以減少誤差。思考題：確定溶液測定光密度值時(shí)的波長依據(jù)？葉綠素a的最大吸收峰在663nm，葉綠素b的最大吸收峰在645nm，葉綠素a和 b的吸收光譜曲線彼此有重疊。如何計(jì)算葉綠素？表示單位？公式

6、中k值與什么因素有關(guān)？根據(jù)Lambert-Beer定律，最大吸收光譜峰不同的兩個組分的混合液，它們的濃 度C與光密度OD之間有如下的關(guān)系：OD =C - k +C - k1 a al b blOD =C - k +C - kC、表示單位bg/L,公式中k值與組分、提取液、濃度有關(guān)。要獲得較準(zhǔn)確葉綠素含量結(jié)果，在操作過程中注意哪些影響因素？要獲得較準(zhǔn)確葉綠素含量結(jié)果，應(yīng)該注意提取過程時(shí)充分研磨和洗滌研缽時(shí)盡量 洗滌充分，確保提取液中的葉綠素含量與葉片的葉綠素含量接近。提出優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的想法。由于本次實(shí)驗(yàn)是根據(jù)Lambert-Beer定律間接測定葉綠素的含量，因此實(shí)驗(yàn)中的 偶然誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影

7、響，因此應(yīng)從設(shè)置平衡實(shí)驗(yàn)著手。學(xué)生姓名學(xué) 號 20062501302專 業(yè)生物科學(xué) 年級、班級06科三課程名稱植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)類型驗(yàn)證設(shè)計(jì)綜合 實(shí)驗(yàn)時(shí)間08年11月11日實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師冷佳奕、黃勝琴實(shí)驗(yàn)評分紅墨水測定種子活力及玉米種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)材料：玉米種子稱取0.1g大葉紫 薇葉片加入碳酸鈣、石 英砂、無水內(nèi)酮 研磨加入 15ml NaAc 緩沖液(pH=5.0) 洗研缽取上清液70 C水浴 5min分別取0.5ml上清液 +0.5ml 4mg/ml 糊精 40 C 水浴 0min 和 10min實(shí)驗(yàn)操作:分別加入I2-KI溶液5 ml測定OD560實(shí)驗(yàn)結(jié)果：玉米種子活力玉米種子萌發(fā)率0.950.325收集研磨液與洗 液，4000rpm 離心 10min思考題：TTC法和紅墨水法測定種子活力的優(yōu)點(diǎn)與不足？優(yōu)點(diǎn)：都能簡單、快速、直觀地測定種子活力。不足:只是測定